骨桥蛋白表达与食管鳞状细胞癌及其临床病理特征关系的Meta分析

代玉娟张恩环陈大朝*

骨桥蛋白表达与食管鳞状细胞癌及其临床病理特征关系的Meta分析

代玉娟①张恩环①陈大朝①*

目的：系统评价骨桥蛋白(OPN)表达与食管鳞状细胞癌及其临床病理特征的关系。方法：计算机检索PubMed、The Cochrane Library、EMbase、CBM、CNKI、VIP和WanFang Data数据库，并辅以文献追溯的方法，收集有关于OPN表达与食管鳞状细胞癌及其与临床病理特征关系的研究。检索年时限截至2017年1月。由2位研究者按照纳入与排除标准筛选文献、提取资料并评价纳入研究的方法学质量后，应用RevMan 5.2软件进行Meta分析。结果：共纳入12个病例-对照研究，其中食管鳞状细胞癌782例，对照组700例。Meta分析结果：OPN在食管鳞状细胞癌组与对照组表达OR=52.71，95%置信区间(CI)为17.95，154.79；OPN在临床Ⅰ～Ⅱ期组与临床Ⅲ～Ⅳ期组表达OR=0.20，95%CI为0.07，0.60；OPN在有淋巴结转移组与无淋巴结转移组表达OR=6.37，95%CI为3.64，11.15；OPN在T1＋T2组与T3＋T4组表达OR=0.31，95%CI为0.15，0.64；OPN在各组表达差异均有统计学意义。结论：OPN表达与食管鳞状细胞癌及其临床病理特征有显著相关性。受纳入研究样本量和质量限制，上述结论需进一步开展高质量研究加以验证。

骨桥蛋白；表达；食管鳞状细胞癌；系统评价；Meta分析；病例-对照研究

食管癌是常见的消化道恶性肿瘤之一，其全球的发病率及病死率分别位于第9位及第6位，食管癌也是我国最常见的恶性肿瘤之一，在我国其发病率位于第3位[1-3]。因此，更深入了解食管鳞状细胞癌发生的分子生物学机制，寻找抗癌药物新的作用靶点具有重要意义。近年来的研究显示，骨桥蛋白(osteopontin，OPN)在人类多种肿瘤的发生发展过程中起重要作用，其过度表达与食管鳞状细胞癌也有密切联系[4-16]。但其在食管鳞状细胞癌的表达及作用的研究结果不尽相同。因此，本研究在尽可能全面收集国内发表的相关文献基础上，采用Meta分析的方法对收集的证据进行全面分析，为明确OPN与食管鳞状细胞癌的临床病理因素的关系提供更精确的循证医学证据。

1 资料与方法

1.1 研究类型

病例-对照研究，纳入12个病例，对食管鳞状细胞癌组(782例)与对照组(700例)进行对照研究。文种限中文、英文。

1.2 纳入与排除标准

(1)纳入标准：①所有食管鳞状细胞癌病例均有完整临床病理资料；②取材前均未经放疗或化疗；③此病例无年龄限制。

(2)排除标准：①OPN检测方法为非免疫组织化学方法；②重复报告或资料雷同、质量较差等无法利用的文献；③非食管鳞状细胞癌的文献；④无对照组的文献；⑤综述、细胞或动物试验文献等。

1.3 研究方法

(1)资料采集。在收集国内发表的相关文献基础上，采用Meta分析的方法对收集的资料进行全面分析。

(2)OPN检测方法。OPN检测方法为免疫组织化学方法，评定标准采用半定量记分法。

1.4 资料检索

计算机检索PubMed、The Cochrane Library、EMbase、CBM、CNKI、VIP和WanFang Data数据库，并辅以文献追溯的方法，收集关于OPN表达与食管鳞状细胞癌及其临床病理特征关系的病例对照研究。检索时限截至2017年1月。检索词包括OPN、osteopontin、骨桥蛋白、食管癌、食管肿瘤和食管恶性肿瘤等。以CMB为例，其具体检索策略如图1所示。

图1 CBM检索策略框图

1.5 文献筛选及质量评价标准

(1)对文献的筛选，由2位评价员阅读文题和摘要并进行初筛，从排除文献中随机抽取10%进行全文阅读，检查一致率，结果为100%。阅读全文进行二次筛选，最终根据纳入与排除标准决定文献是否被纳入。从纳入文献中提取信息包括编号、文题、作者、发表年限、原始文献出处、样本大小、食管鳞状细胞癌患者性别、年龄、肿瘤深度、临床分期、肿瘤大小、组织学分级以及有无淋巴结转移等。

(2)采用观察性研究偏倚风险的评估工具NOS量表对纳入研究的方法学质量进行评价[4，17]。

1.6 统计学方法

分析采用Cochrane协作网提供的RevMan5.2软件，计算优势比(OR)及其95%置信区间(confidence interval，CI)作为效应量表示结果。采用x2检验分析各研究结果间的异质性，检验水准设为α=0.1。如果P＞0.1，提示各研究结果间具有同质性，则选择固定效应模型分析。如果P＜0.1，提示各研究结果间存在统计学异质性，则选择随机效应模型进行Meta分析。通过漏斗图了解文章潜在的发表偏倚，异质性来源采用敏感性分析进行处理，或仅行描述性分析。

2 结果

2.1 检索结果

初检出文献126篇，经过逐层筛选最终纳入12个病例进行对照研究[5-16]。文献筛选流程及结果如图2所示。

图2 文献筛选流程及结果框图

2.2 基本特征和质量评价

在12个研究[5-16]完整报告中，纳入研究的对照来源、食管鳞癌组例数及对照组例数、每个研究的质量评价总分等基本特征(见表1)。

表1 纳入分析研究的基本特征

表1显示，12个研究[5-16]完整报告了OPN在食管鳞状细胞癌组织及对照组中的表达情况，7个研究[5，7，9，11，13，15，16]报告了OPN在食管鳞状细胞癌不同性别中的表达情况，4个研究[5，7，9，15]报告了食管鳞状细胞癌不同年龄段中的OPN表达情况，6个研究[5，7，9，12-13，15]报告了食管鳞状细胞癌不同组织学分级中OPN表达情况，8个研究[8-12，14-16]完整报告了食管鳞状细胞癌不同临床分期中OPN表达情况，11个研究[5，7-16]报告了食管鳞状细胞癌有无淋巴结转移中OPN表达情况，3个研究[5，9，15]报道了食管鳞状细胞癌不同肿瘤大小中OPN表达情况，8个研究[8-13，15，16]报告了食管鳞状细胞癌不同浸润深度中OPN表达情况。

2.3 OPN表达分析结果

2.3.1 食管鳞状细胞癌组与对照组的OPN表达

纳入的12篇文献[5-16]均报告了食管鳞状细胞癌组与对照组的OPN表达情况，其中食管鳞状细胞癌组782例，对照组700例。各研究间有统计学异质性(P＜0.00001，I2=83%)，故采用随机效应模型进行Meta分析。结果显示，食管鳞状细胞癌组OPN表达更高，两组OPN表达比较差异有统计学意义(OR=52.71，95%CI为17.95，154.79；P＜0.00001)，如图3所示。

2.3.2 OPN在食管鳞状细胞癌患者不同性别中的表达

共纳入7篇文献[5，7，9，11，13，15，16]，食管鳞状细胞癌患者中男性320例，女性183例。各研究间无统计学异质性(P=0.83，I2=0%)，故采用固定效应模型进行Meta分析。结果显示，两种性别OPN表达比较差异无统计学意义(OR=1.33，95%CI为0.87，2.03；P=0.19)，如图4所示。

图3 OPN表达与食管鳞状细胞癌关系的Meta分析

图4 OPN表达与食管鳞状细胞癌患者性别关系的Meta分析

2.3.3 OPN在食管鳞状细胞癌患者不同年龄段中的表达

共纳入4篇文献[5，7，9，15]，食管鳞状细胞癌的患者中≥60岁196例，＜60岁139例。各年龄段间研究差异无统计学异质性(P=0.97，I2=0%)，故采用固定效应模型进行Meta分析。结果显示，两年龄段间OPN表达比较差异无统计学意义(OR=1.16，95%CI为0.72，1.87；P＞0.05)，如图5所示。

图5 OPN表达与食管鳞状细胞癌患者年龄段关系的Meta分析

2.3.4 OPN在食管鳞状细胞癌不同组织学分级中的表达

共纳入6篇文献[5，7，9，12-13，15]，其中食管鳞状细胞癌高中分化患者319例，低未分化患者140例。各研究两者间有统计学异质性(P=0.05，I2=54%)，故采用随机效应模型进行Meta分析。结果显示，两者间OPN表达比较差异无统计学意义(OR=1.29，95%CI为0.63，2.67；P＞0.05)，如图6所示。

2.3.5 OPN在食管鳞状细胞癌不同临床分期中的表达

图6 OPN表达与食管鳞状细胞癌不同组织学分级关系的Meta分析

共纳入8篇文献[8-12，14-16]，其中食管鳞状细胞癌临床分期为Ⅰ～Ⅱ期患者271例，临床Ⅲ～Ⅳ期患者267例。各研究间有统计学异质性(P=0.0008，I2=72%)，故采用随机效应模型进行Meta分析。结果显示，临床Ⅲ～Ⅳ期组表达更高，两种临床分期间OPN表达比较差异有统计学意义(OR=0.20，95%CI为0.07，0.60；P＜0.05)，如图7所示。

图7 OPN表达与食管鳞状细胞癌不同临床分期关系的Meta分析

2.3.6 OPN在食管鳞状细胞癌有无淋巴结转移中的表达

共纳入11篇文献[5，7-16]，其中有淋巴结转移的患者386例，无淋巴结转移的患者351例。各研究间有统计学异质性(P=0.08，I2=40%)，故采用随机效应模型进行Meta分析。结果显示，有淋巴结转移患者OPN表达更高，与无淋巴结转移患者间表达比较，差异有统计学意义(OR=6.37，95%CI为3.64，11.15；P＜0.05)，如图8所示。

图8 OPN表达与食管鳞状细胞癌有无淋巴结转移关系的Meta分析

2.3.7 OPN在食管鳞状细胞癌不同肿瘤大小中的表达

共纳入3篇文献[5，9，15]，其中肿瘤≥5 cm的食管鳞状细胞癌患者88例，肿瘤＜5 cm的食管鳞状细胞癌患者185例。各研究间有统计学异质性(P=0.07，I2=62%)，故采用随机效应模型进行Meta分析。结果显示，两种不同肿瘤大小患者间OPN表达比较差异无统计学意义(OR=2.51，95%CI为0.80，7.85；P＞0.05)，如图9所示。

图9 OPN表达与食管鳞状细胞癌不同肿瘤大小关系的Meta分析

2.3.8 OPN在食管鳞状细胞癌不同浸润深度中的表达

共纳入8篇文献[8-13，15，16]，其中食管鳞状细胞癌浸润深度为T1＋T2的患者239例，T3＋T4的患者299例。各研究间有统计学异质性(P=0.01，I2=61%)，故采用随机效应模型进行Meta分析。结果显示，浸润深度为T3＋T4的患者表达更高，不同浸润深度两者间OPN表达比较差异有统计学意义(OR=0.31，95%CI为0.15，0.64；P＜0.05)，如图10所示。

图10 OPN表达与食管鳞状细胞癌不同浸润深度关系的Meta分析

2.3.9 发表偏倚

对纳入的12个报告OPN在食管鳞状细胞癌组与对照组中表达情况的研究进行了漏斗图分析，结果显示，纳入的研究不均匀地分布在综合效应两侧，表明存在较明显的发表偏倚(如图11所示)。

图11 12篇文献的漏斗图分析

3 讨论

OPN是细胞外基质中重要的功能性蛋白，内含一个精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp)RGD氨基酸序列，与相应配体结合后激活细胞内相应的信号通路，能促进细胞的趋化、黏附和迁移[4，18]。已有研究证实，OPN在乳腺癌、肺癌、前列腺癌、大肠癌的发生、浸润及转移中发挥重要作用[19]。肿瘤组织中OPN的表达水平与肿瘤的发展、预后密切相关，OPN被多位专家学者誉为临床应用上的“领头羊”[20-21]。

本研究Meta分析提示，食管鳞状细胞癌组OPN表达是对照组的52.71倍(95%CI为17.95，154.79)，OPN的高表达可能与食管鳞状细胞癌相关。此外，许多研究涉及OPN表达与一些预后因子如不同性别、不同年龄段、组织病理学分级、临床分期、有无淋巴结转移、浸润深度以及肿瘤大小等的关系，希望通过这些研究探索OPN能否成为有意义的预后因子。本研究发现，OPN在食管鳞状细胞癌中的表达与患者的性别、不同年龄段、肿瘤的分化程度及肿瘤大小无显著关联。在不同临床分期中，本研究Meta分析结果显示，OPN表达在不同临床分期中有明显差别(OR=0.20，95%CI为0.07，0.60)，表示OPN表达与临床分期密切相关，Ⅲ～Ⅳ期组阳性率明显高于Ⅰ～Ⅱ期组，提示OPN表达增加体现于食管鳞状细胞癌病变全过程，可能在食管鳞状细胞癌的发生、发展全程中均发挥作用，并对食管鳞状细胞癌的临床分期有参考意义。纳入的11篇文献[5，7-16]中Wu等[16]报道，OPN表达情况与食管鳞状细胞癌有、无淋巴结转移无相关性，本研究对这11个研究进行Meta分析结果显示，OPN表达在有、无淋巴结转移中有明显差别(OR=6.37，95%CI为3.64，11.15)，即有淋巴结转移组OPN表达明显高于无淋巴结转移组，提示OPN蛋白在食管鳞状细胞癌淋巴结转移中具有重要作用。杨德生[10]、徐磊[11]、孙珠蕾[12]和Wu等[16]的研究提示，OPN表达情况与食管鳞状细胞癌的浸润深度无明显相关性，本研究对纳入的8篇有关食管癌浸润深度的文献[8-13，15-16]进行Meta分析，结果显示，OPN表达在不同浸润深度有明显差别(OR=0.31，95%CI为0.15，0.64)，即T3+T4组OPN表达明显高于T1+T2组，提示OPN蛋白在食管鳞状细胞癌浸润中具有重要作用。

食管鳞状细胞癌组与对照组中OPN表达存在明显差异，其表达与性别、年龄段、分化程度及肿瘤大小无明显关联，而与不同临床分期、有无淋巴结转移及浸润深度有一定的相关性，表明OPN在食管鳞状细胞癌的发生、淋巴结转移和浸润过程中起重要作用，检测OPN的表达情况有助于判断食管鳞状细胞癌患者的预后。然而本研究尚存在一定的局限性，纳入的研究大部分为中文文献且数量偏少，未进行“灰色”文献检索，可能会漏掉阴性结果的研究而产生发表偏倚。因此，需要开展多中心大样本同质性的随机对照研究，来进一步证实OPN的表达与食管鳞状细胞癌临床病理特征之间的关联，以为食管鳞状细胞癌的治疗和预后干预提供更强的循证医学证据。

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The relationships between the expression of osteopontin and esophageal squamous cell carcinoma and its clinicopathologic feature: A Meta-analysis/

DAI Yu-juan, ZHANG Enhuan, CHEN Da-chao//China Medical Equipment,2017,14(6):92-97.

Objective: To systematic review the relationships between the expression of osteopontin (OPN) and esophageal squamous cell carcinoma and its clinicopathologic feature with metaanalyses. Methods: The published studies in the PubMed, the Cochrane Library, EMbase, CBM, CNKI, VIP and WanFang databases were searched, at the time, the documents retrospective method was adopted, and then a series researches about the relationships between the expression of OPN and esophageal squamous cell carcinoma and its clinicopathologic feature were collected. The Jan., 2017 was the deadline of search. The study arranged two researcher to screen documents as the standards of inclusion and exclusion, and extract data and evaluate the quality of methodology for these included documents. The RevMan 5.2 was applied to analyze these data in this Meta analysis. Results: A total of 12 case control studies were included, which included 782 cases of esophageal squamous cell carcinoma in case group and 700 persons in control group. The results of Meta analysis showed the OR of the expression of OPN between cases group and control group was 52.71, and its 95% confidence interval (CI) was 17.95-154.79. Besides, the OR of the expression of OPN between clinical I-II stage group and clinical IIIIV stage group was 0.20, and its 95% (CI) was 0.07-0.60. The OR of the expression of OPN between group with lymph node metastasis and group without lymph node metastasis was 6.37, and its CI was 3.64-11.15. The OR of the expression of OPN between T1+T2 group and T3+T4 group was 0.31, and its 95% (CI) was 0.15-0.64. The differences of the expression of OPN among various group had statistically significant. Conclusion: Current evidence indicates that the expression level of OPN is significantly correlated with esophageal squamous cell carcinoma and its clinicopathologic features. Due to the limited quantity of documents and quality of included studies, above conclusions need to be verified by conducting more high quality studies.

Osteopontin(OPN); Expression; Esophageal squamous cell carcinoma; Systematic review; Metaanalysis; Case-control study

Department of Radiotherapy, The Affiliated Dongnan Hospital of Xiamen University, The 175th Hospital of People's Liberation Army, Zhangzhou 363000, China.

10.3969/J.ISSN.1672-8270.2017.06.026

1672-8270(2017)06-0092-06

R735.1

A

代玉娟,女,(1985- ),硕士，医师。厦门大学附属东南医院 解放军第175医院放疗科，研究方向：消化道肿瘤。

2017-01-03

①厦门大学附属东南医院 解放军第175医院放疗科 福建 漳州 363000

*通讯作者：2048128199@qq.com