PRAME、APPL1在原发性肺腺癌中的表达及临床意义

王芳 包迪

PRAME、APPL1在原发性肺腺癌中的表达及临床意义

王芳 包迪

目的 探讨黑色素瘤特异性抗原(PRAME)、适应性蛋白L1(Adaptor protein containing PH domain，APPL1)在原发性肺腺癌中的表达及临床意义。方法 收集2014年2月至2015年12月期间被我院收治的52例原发性肺腺癌患者手术切除的肺腺癌组织和癌旁组织为实验标本。采用RT-PCR技术检测组织标本中的PRAME、APPL1 mRNA表达量。结果 肺腺癌组织中PRAME表达水平低于癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.05)。肺腺癌组织中APPL1表达水平高于癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.05)。随着肺腺癌病例病理分期的升高、肿瘤大小的增加、分化程度的降低，肺腺癌组织中PRAME mRNA表达减弱，APPL1 mRNA表达增强，此外，肺腺癌组织中PRAME、APPL1 mRNA水平与病例是否伴淋巴结转移有关。伴淋巴结转移的肺腺癌组织，PRAME mRNA水平低于未出现淋巴结转移的肺腺癌组织(P<0.05)，APPL1 mRNA水平高于未出现淋巴结转移的肺腺癌组织(P<0.05)。原发性肺腺癌组织中PRAME、APPL1 mRNA表达量呈负相关(r=-0.412，P=0.007)。结论 PRAME在原发性肺腺癌组织中的表达水平低于癌旁组织，APPL1在原发性肺腺癌组织中的表达水平高于癌旁组织。PRAME、APPL1的表达与原发性肺腺癌组织的病理分期、肿瘤体积、分化程度及是否伴淋巴结转移有关。

原发性肺腺癌；PRAME；APPL1；临床病理

肺癌是常见的呼吸系统恶性肿瘤，其发病率和死亡率在全世界恶性肿瘤中居前列[1-2]。原发性肺腺癌是肺癌的一种，在中国，其发病人数和死亡率逐年上升[3]。原发性肺腺癌早期临床症状不明显，其具有血行转移早、淋巴结转移早等特征，且对放化疗敏感性差，目前手术治疗是其治疗的主要手段[4]。

黑色素瘤特异性抗原(PRAME)是在黑色素瘤组织中首先被发现，是肿瘤睾丸抗原家族成员[5]，适应性蛋白L1(Adaptor protein containing PH domain，APPL1)是细胞内的一种适应性蛋白[6]。PRAME、APPL1两种生化标志物在恶性肿瘤组织中存在异常表达。本研究通过检测原发性肺腺癌患者组织中PRAME、APPL1等指标的表达水平，旨在探讨PRAME、APPL1在原发性肺腺癌组织中的表达情况及临床意义。

资料与方法

一、一般资料

收集2014年2月至2015年12月期间被我院收治的52例原发性肺腺癌(诊断标准参考文献[7])患者手术切除的肺腺癌组织和癌旁组织为实验标本。患者年龄45-80岁，平均年龄为59.61±8.79岁，体质量指数为22.18±4.59 kg/m2；由我院病理科进行病理活检确诊为原发性肺腺癌，52例原发性肺腺癌患者中，低分化22例，中高分化30例，伴淋巴结转移29例；按照临床分期的不同分为，Ⅰ-Ⅱ期30例，Ⅲ-Ⅳ期22例。均无饮酒史，其中6例有肺癌家族史，22例有吸烟史，患者手术前未接受放化疗治疗。本研究经入组者签署知情同意书，并获我院伦理委员会审批通过。

二、标本的采集及处理

原发性肺腺癌组织和癌旁组织标本切除离体后立即投入液氮中，冷冻后储存于-80℃冰箱保存备用。

三、实验方法

采用购自于赛飞(中国)有限公司的9701梯度PCR仪行RT-PCR，检测原发性肺腺癌组织和癌旁组织中PRAME、APPL1 mRNA的表达水平，以GAPDH为内参PRAME上游引物为：5'TGCAGGCTCTCTATGTGGACTCT3'，下游引物为：5'TT'CATCACGTGCCTGAGCAA3'。APPL1上游引物为：5' TGAAGGTCGGAGTCAACGG3'，下游引物为：5' CTGGAAGATGGTGATGGGAT3'。PCR反应步骤：94℃预变性3min；94℃变性20s，60℃退火30s，72℃延伸40s；35个循环，72℃延伸10min。

四、统计学方法

结 果

一、肺腺癌组织、癌旁组织中PRAME、APPL1 mRNA水平比较

肺腺癌组织中PRAME表达水平低于癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.05)。肺腺癌组织中APPL1表达水平高于癌旁组织，差异有统计学意义，P<0.05。(见表1)。

表1 肺腺癌组织、癌旁组织中PRAME、APPL1 mRNA水平比较

注：*P<0.05，与癌旁组织比较

二、不同临床病理的原发性肺腺癌组织中PRAME、APPL1 mRNA水平

肺腺癌组织中PRAME、APPL1 mRNA水平与患者年龄、解剖部位无关，随着肺腺癌病例病理分期的升高、肿瘤大小的增加、分化程度的降低，肺腺癌组织中PRAME mRNA表达减弱，APPL1 mRNA表达增强，此外，肺腺癌组织中PRAME、APPL1 mRNA水平与病例是否伴淋巴结转移有关。伴淋巴结转移的肺腺癌组织，PRAME mRNA水平低于未出现淋巴结转移的肺腺癌组织(P<0.05)，APPL1 mRNA水平高于未出现淋巴结转移的肺腺癌组织，P<0.05。(见表2)。

三、相关性分析

原发性肺腺癌组织中PRAME、APPL1 mRNA表达量呈负相关(r=-0.412，P=0.007)。

讨 论

近年来原发性肺腺癌发病率和发病人数不断攀升[8]。由于原发性肺腺癌对放化疗敏感性较差，因此临床上原发性肺腺癌仍然以手术治疗为主。对于恶性肿瘤来说，普遍存在癌前病变、原位癌、肿瘤早期治疗效果较好的现象，因此对原发性肺腺癌尽早发现、尽早治疗对提高患者治疗效果具有重要意义[9]。

PRAME是肿瘤睾丸抗原家族成员之一，具有能让肿瘤溶解的功能。PRAME在多种肿瘤组织中有表达，同时也可表达于卵巢、肾上腺等正常组织中。目前已发现PRAME与儿童髓性白血病关系密切，但其与肺癌的关系尚不清楚[10]。APPL1是机体体内的一种适应性蛋白，可与膜受体结合，在体内的诸多生物反应过程中广泛发挥作用[11]。APPL1在生化反应过程中起衔接、调节的作用，同时可以介导脂联素的信号转导[12-13]。有研究发现，PRAME、APPL1等生化标志物在恶性肿瘤组织中可以异常表达[14-15]。本研究RT-PCR结果显示，肺腺癌组织中PRAME表达水平低于癌旁组织(P<0.05)。肺腺癌组织中APPL1表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。表明原发性肺腺癌组织中，PRAME低表达，而APPL1高表达。与相关研究[14-15]结果一致。

影响因素nPRAMEmRNAt值P值APPL1mRNAt值P值年龄 ≥60岁2312．07±5．590．860．23125．41±6．810．910．196 <60岁2912．69±5．7123．98±6．34解剖部位 外周型3712．11±5．450．800．29425．64±6．840．870．196 中央型1512．69±5．6723．97±6．42病理分期 Ⅰ-Ⅱ期3015．32±6．074．810．00021．39±6．075．180．000 Ⅲ-Ⅳ期2211．07±5．5027．92±6．94肿瘤大小 >3cm1515．79±5．914．260．00027．91±6．865．300．000 ≤3cm3711．10±5．0721．17±6．64分化程度 低分化2211．07±5．094．410．00028．19±6．895．390．000 中高分化3015．37±6．0821．04±6．39淋巴结转移 有2910．88±5．045．170．00028．14±6．965．410．000 无2315．39±6．1221．01±6．41

为探讨PRAME、APPL1在不同临床病理肺癌组织中的表达情况，我们采用RT-PCR技术检测了不同临床病理组织中PRAME、APPL1的水平。检测结果显示，原发性肺腺癌组织中PRAME、APPL1 mRNA水平与患者年龄、解剖部位无关，但随着肺腺癌病例病理分期的升高、肿瘤大小的增加、分化程度的降低，肺腺癌组织中PRAME mRNA表达减弱，APPL1 mRNA表达增强。即PRAME、APPL1的表达水平与原发性肺腺癌的病理分期、病灶大小、分化程度密切相关。此外，我们在实验中也发现，肺腺癌组织中PRAME、APPL1 mRNA水平与病例是否伴淋巴结转移有关。伴淋巴结转移的肺腺癌组织，PRAME mRNA水平低于未出现淋巴结转移的肺腺癌组织(P<0.05)，APPL1 mRNA水平高于未出现淋巴结转移的肺腺癌组织(P<0.05)。有学者在研究中也发现，PRAME、APPL1的表达与原发性肺腺癌分化程度分别呈正相关、负相关，与淋巴结转移分别呈负相关、正相关[14-15]。本研究结果与相关研究[14-15]结果一致。这表明PRAME、APPL1的异常表达可能参与了原发性肺腺癌的淋巴结转移，与患者病情恶化有关。这表明PRAME的表达减弱、APPL1的表达增强可能参与了原发性肺腺癌癌细胞的淋巴结转移，与患者的预后存在一定的关系。

此外，我们在研究中还发现，原发性肺腺癌组织中PRAME、APPL1的表达之间呈负相关。这表明PRAME、APPL1在原发性肺腺癌的发病及进展过程中可能共同起作用。PRAME的高表达对原发性肺腺癌的发病可能起抑制作用，而APPL1的高表达对原发性肺腺癌的发病可能起促进作用。

综上所述，PRAME在原发性肺腺癌组织中的表达水平低于癌旁组织，APPL1在原发性肺腺癌组织中的表达水平高于癌旁组织。PRAME、APPL1的表达与原发性肺腺癌组织的病理分期、肿瘤体积、分化程度及是否伴淋巴结转移有关。PRAME、APPL1在原发性肺腺癌的发病、病情进展、恶化过程中可能共同发挥作用。

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Expression of PRAME and APPL1 in primary lung adenocarcinoma and its clinical significance

WANGFang,BAODi
NorthBranchofXiangyangCentralHospital,Xiangyang,Hubei441000,China

Objective To study the expression of PRAME and APPL1 in primary lung adenocarcinoma and its clinical significance. Methods From February 2014 to December 2015 in our hospital, 52 cases of lung adenocarcinoma tissue and tissue adjacent to carcinoma specimens by surgical resection of primary lung adenocarcinoma patients were collected for experiment. The levels of PRAME and APPL1 mRNA of tissue samples were detected by RT-PCR technique. Results The expression level of PRAME in lung adenocarcinoma tissues was lower than in tissues adjacent to carcinoma (P<0.05). The expression level of APPL1 in lung adenocarcinoma tissue was higher than in tissues adjacent to carcinoma (P<0.05). With the increase of pathological stage of lung adenocarcinoma and tumor size and the decrease of differentiation degree, the expression of PRAME mRNA in lung adenocarcinoma tissues weakened, and APPL1 mRNA enhanced. In addition, the level of PRAME and APPL1 mRNA was related with whether the cases were complicated with lymph node metastasis or not. The level of PRAME mRNA was lower in patients associated with lymph node metastasis than in patients without lymph node metastasis (P<0.05), and APPL1 mRNA was higher in patients associated with lymph node metastasis than in patients without lymph node metastasis (P<0.05). In primary lung adenocarcinoma tissues, PRAME and APPL1 mRNA showed a negative correlation (r=-0.412,P=0.007). Conclusion PRAME expression in primary lung adenocarcinoma tissue is lower than tissue adjacent to carcinoma. APPL1 expression in primary lung adenocarcinoma tissue is higher than tissue adjacent to carcinoma. PRAME and APPL1 expression in primary lung adenocarcinoma tissue is related to the pathological staging, tumor size, degree of differentiation and whether associated with lymph node metastasis.

primary lung adenocarcinoma; PRAME; APPL1; clinical pathology

10.3969/j.issn.1009-6663.2017.07.019

441000 湖北 襄阳，襄阳市中心医院(湖北文理学院附属医院)肿瘤科

包迪，E-mail:75118300@qq.com

2016-11-04]