血红蛋白电泳技术在地中海贫血诊断中的价值

唐宝佳 叶作东 蒋煌舟 陈康银 汤一榕 福建医科大学附属宁德市医院 （福建 宁德 352100）

血红蛋白电泳技术在地中海贫血诊断中的价值

唐宝佳 叶作东 蒋煌舟 陈康银 汤一榕 福建医科大学附属宁德市医院 （福建 宁德 352100）

目的：探讨血红蛋白电泳技术在地中海贫血诊断中的价值。方法：选取2015年1月～2016年12月在宁德市医院妇产科、妇保科及儿保科等进行地中海贫血筛查患者1768例。对结果异常患者及可疑地中海贫血患者进行地贫基因检测并以基因检测结果为确诊标准，分析血红蛋白电泳结果共473例。结果：血红蛋白电泳检测异常患者达735例，占41.57%，其中HbA2<2.5%患者306例，占17.3%；HbA2>3.5%和（或）HbF>2.0%患者439例，占24.8%，检出异常条带HbH 3例、HbBart`s 5例、HbJ/K 11例；血红蛋白电泳对α-地中海贫血筛查结果：准确度83.5%、特异度86.8%、阳性预测值68.8%、阴性预测值90.0%、敏感度75.0%；对β-地中海贫血筛查结果：准确度86.5%、特异度96.8%、阳性预测值96.5%、阴性预测值79.1.0%、敏感度77.2%；经血红蛋白电泳检测，α-地中海贫血患者HbA、HbA2值明显低于阴性患者，差异有统计学意义（p<0.05）；β-地中海贫血者HbA值明显低于阴性患者，HbA2明显高于阴性患者，差异有统计学意义（p<0.05）。结论：血红蛋白电泳对地中海贫血患者诊疗过程中有重要的意义，但存在一定的假阳性、假阴性结果，仅作为一种筛查手段，如需确诊，还需进一步进行基因检测确诊。

地中海贫血 血红蛋白电泳 筛查方法

珠蛋白生成障碍性贫血又称为地中海贫血，简称地贫。它是由于珠蛋白多肽链完全不能或合成不足所致的一种遗传性疾病。目前尚无有效的治疗办法。患者只能依靠输血改善贫血症状，维持生命，给家庭、社会带来巨大的负担。苏珊珊等[1]报道称对育龄期人群、孕妇等筛查地中海贫血，早期发现，预防为主，减少患儿的出生率尤为重要。本文主要探讨有效的筛查方法，血红蛋白电泳技术，在诊断地中海贫血中的价值。

1.资料与方法

1.1 临床资料

选择2015年1月～2016年12月在本院体检筛查人群1768例，经血红蛋白电泳技术进行筛查，对结果异常患者及可疑地中海贫血患者进行地贫基因检测并诊断。因各种原因最终自愿进行地中海贫血基因检测患者共473例，其中男性148例，女性325，年龄（24.8±4.4）岁。EDTA-K2真空采血管采集静脉血2支，2ml/支，分别用于筛查实验（血红蛋白电泳检测）和基因诊断实验（地中海贫血基因检测）。

1.2 血红蛋白电泳检测技术

主要仪器试剂：法国Sebia全自动血红蛋白电泳仪、扫描仪和分析系统；配套的血红蛋白测定试剂盒试剂（加样梳、琼脂糖胶片、pH8.5±0.1碱性缓冲液海绵条、溶血素、染液等）；生理盐水。

1.2.1 标本准备：将抗凝血标本于1500rpm离心5min，去除血浆；用10倍的生理盐水洗涤红细胞3次；去除红细胞上多余的盐水；取10ul红细胞置于130ul溶血素的试管内溶血5min备用。

1.2.2 电泳操作：加样梳每孔加入10ul溶血标本，加湿舱放置5min；按试剂操作说明分别将琼脂糖胶片、碱性缓冲液海绵条放入相应位置；选择血红蛋白电泳程序；340V恒压下进行电泳自动程序。

表1. 血红蛋白电泳筛查结果

表2. 血红蛋白电泳在地贫筛查中的诊断价值

1.2.3 染色操作：将胶片放入染色模块进行自动染色

1.2.4 图谱分析：将干燥后的胶片进行扫描分析电泳图谱。

1.3 基因诊断

凯普生物化学有限公司提供的α、β地中海贫血基因检测试剂盒（PCR+导流杂交法）配套仪器及设备。按说明书操作。

1.4 判断标准

1.4.1 异常血红蛋白带：血红蛋白在pH8.5±0.1碱性条件下，蛋白移动速度为HbH、HbBart`s、HbJ/K、HbA、HbF、HbS/D、HbA2/C/E。正常血红蛋白指标：HbA≥95.0%、HbF≤2.0%、2.5%≤HbA2≤3.5%，无其他特殊血红蛋白条带。通过扫描比对发现含量异常条带及异常条带。

1.4.2 分组标准：

图1.

成人HbA2<2.5%和（或）出现异常条带HbH、HbBart`s，则初步定为疑似α-地中海贫血组；HbA2>3.5%和（或）HbF>2.0%，则初步定为疑似β-地中海贫血组；若出现异常血红蛋白条带则诊断为异常血红蛋白病。最后的确诊，需进行基因分析。

1.5 统计学分析

应用SPSS 11.5软件对数据进行分析，采用u检验，p<0.05为差异有统计学意义。

表3. 确诊为地中海贫血的血红蛋白电泳结果比对

2.结果

2.1 血红蛋白电泳检测

（通过扫描比对发现含量异常条带及异常条带，典型案例图1所示）：体检筛查人群1768例，血红蛋白电泳检测异常患者达735例，占41.57%；其中HbA2<2.5%患者306例，占17.3%；HbA2>3.5%和（或）HbF>2.0%患者439例，占24.8%；检出异常条带HbH 3例、HbBart`s 5例、HbJ/K 11例。血红蛋白电泳检测异常患者达735例，占41.57%。

2.2 血红蛋白电泳结合基因诊断结果分析

将同时进行血红蛋白电泳检测及地中海贫血基因检测的473例患者，按1.3.2分组标准分为：疑似α-地中海贫血组（125例）；疑似β-地中海贫血组（250例）；筛查正常组（98例）。地中海贫血基因检测结果确诊为α-地中海贫血137例，；β-地中海贫血193例；α-+β-地中海贫血7例，未检出病例136例。α-地中海贫血、β-地中海贫血的携带率分别为8.14%、11.31%。血红蛋白电泳技术的筛查结果（表1），其诊断价值（表2）。

2.3 确诊为地中海贫血的血红蛋白电泳结果比对。见表3。

3.讨论

人体内的血红蛋白由四个亚基构成，多肽链α、β、γ、δ组成了正常的人血红蛋白。人在不同的发育阶段血红蛋白的种类是不同的。成人体内主要血红蛋白为两个α亚基和两个β亚基组成，血红蛋白A(HbA)，α2β2，占成人血红蛋白的98%左右；血红蛋白A2(HbA2)，α2δ2，占成人血红蛋白的2%左右；血红蛋白F(HbF)，α2γ2，仅存在于胎儿及新生儿血液中，随着年龄的增长，逐渐减少消失。当血红蛋白的合成数量、合成质量异常、基因突变等，可导致地中海贫血疾病或导致异常血红蛋白病。

地中海贫血是我国影响最大的遗传性疾病之一，在南方发病率高[2]。目前预防重型患儿的出生是控制该病的最有效可行方法。

血红蛋白电泳技术是依据各种血红蛋白均具有不同的等电点，在一定pH缓冲液中所带的正、负电荷不同。经电泳后各血红蛋白的移动方向不同，借此方法可分离出不同的血红蛋白成分，并对其进行定量。利用该技术可提示异常血红蛋白；能较准确的提示α-地中海贫血、β-地中海贫血；本法检测成本较基因检测低，检测速度快，是大多数患者所能接受。目前血红蛋白电泳技术是最常用的实验方法。

3.1 通过研究分析，血红蛋白电泳技术可以较好的分离各类

血红蛋白如：HbH、HbBart`s、HbJ/K、HbA、HbF、HbS/D、HbA2/C/E等，可较好提示正常成人血红蛋白成分，特殊人群（新生儿、幼儿、妊娠期女性）的正常组分，还能较好的提示地中海贫血，异常血红蛋白病等。2015～2016年本地区检测异常患者占41.57%，其中HbA2<2.5%患者占17.3%；HbA2>3.5%和（或）HbF>2.0%患者占24.8%。但我们应注意并有效区分缺铁性贫血的假阳性结果。由于缺铁性贫血亦是小细胞低色素性贫血，可表现为HbA2的检测结果异常，HbA2在二者间的鉴别能力有所欠佳[3]，临床上应注意排除缺铁贫的干扰后，对可疑地中海贫血的患者，为能进一步确诊，可行地中海贫血基因检测。

3.2 地中海贫血基因检测耗时长，且检测费用昂贵。本地地处山区，经济相对落后，群众对地贫的重视程度不足，最终进行基因检测患者仅有473例。本研究示α-地中海贫血携带率为8.14%，与国内文献报道一致[4]；β-地中海贫血的携带率为11.31%，较国内文献报道高[4]，可能由于进行基因检测数量不够完全，或是本地区β-地中海贫血基因携带率本身较高的缘故。本研究还提示血红蛋白电泳对α-地中海贫血筛查结果：准确度83.5%、特异度86.8%、、阳性预测值68.8%、阴性预测值90.0%；对β-地中海贫血筛查结果：准确度86.5%、特异度96.8%、敏感度77.2%、阳性预测值96.5%、阴性预测值79.1.0%。该法对地中海贫血有较高特异性，但其中α-地中海贫血的阳性预测值较低，可能与缺铁性贫血有关。另外还存在一定的漏诊率，一些静止型或轻型地贫患者可表现为正常的血红蛋白电泳条带。本文中血红蛋白电泳表达正常的人群中，经地贫基因检测，仍存在一些阳性的基因携带，且携带率较高，α-地中海贫血检出30例，占30.6%，β-地中海贫血检出7例，占7.1%。

3.3 本文示：α-地中海贫血患者HbA、HbA2值明显低于阴性患者，差异有统计学意义（p<0.05）；β-地中海贫血者HbA值明显低于阴性患者，HbA2明显高于阴性患者，差异有统计学意义（p<0.05）这与国内报道大体一致[5]。

综上所述，血红蛋白电泳在地贫的筛查中起到非常重要的作用，筛查效果十分显著，在杨生宙等[6]学者的报道中描述该技术操作简便、快捷、价格低廉且临床价值高，但在方法学上还是存在一定的假阳性、假阴性现象，仅可作为地中海贫血的初步筛查手段。为了减少地中海贫血的误诊率、漏诊率，应对临床上高度可疑患者进行基因检测等手段确诊。

[1] 苏珊珊, 梁志, 黄健英, 等. 2000例孕妇地中海贫血基因携带情况的分析[J]. 广西医学, 2015,37(4):566-567.

[2] 张俊武, 龙桂芳. 血红蛋白与血红蛋白[M]. 南宁:广西科学技术出版社, 2003:156.

[3] 陈卫东, 周宇, 王秋. 缺铁性贫血对不同基因型α地中海贫血筛查的影响[J]. 中国实验诊断学, 2016,20(6):898-902.

[4] 蔡念, 李莉艳, 梁昕, 等. 广西柳州市城镇人群α和β地中海贫血发生率调查和分子鉴定[J]. 中华流行病学杂志, 2002,23(4):281-285.

[5] 杨应松. 血红蛋白电泳联合地中海贫血基因检测对地中海贫血患者的诊断价值[J]. 中国药物经济学, 2016,11(6):175-177.

[6] 杨生宙, 黄梅霞, 李祥顺, 等. 两种α地中海贫血检测方法的应用探讨[J]. 中国热带医学, 2012,12(3):330-332.

1006-6586(2017)08-0075-03

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