核苷酸结合寡聚域在宫颈癌发病机制中的作用

赵巧云 范广民 阮正英 应香岚

核苷酸结合寡聚域在宫颈癌发病机制中的作用

赵巧云1范广民2阮正英1应香岚3

目的探讨核苷酸结合寡聚域1（NOD1）在宫颈癌发病机制中的作用。方法免疫组化法检测107例宫颈癌、50例宫颈上皮内瘤变、50例慢性宫颈炎组织NOD1的表达。结果与慢性宫颈炎组比较，宫颈癌组NOD1的阳性率和阳性表达强度均显著增高[91.59%比62.00%，P<0.01；（0.18±0.05）比（0.16±0.04），P<0.05]；宫颈癌组NOD1阳性率显著高于宫颈上皮内瘤变组（91.59%比76.00%，P<0.05），但两组间NOD1的阳性表达强度差异无统计学意义[（0.18±0.05）比（0.18±0.04），P>0.05]。宫颈癌组中，淋巴结转移者NOD1阳性率和阳性表达强度与无淋巴结转移者比较差异无统计学意义[94.44%比84.21%，P>0.05；（0.18±0.05）比（0.19±0.05），P>0.05]。结论NOD1在宫颈癌组织中表达增强，可能与宫颈癌的发病机制相关，但与淋巴结转移无密切关系。

宫颈癌；核苷酸结合寡聚域；免疫组化

宫颈癌是一种常见的妇科肿瘤疾病，为发展中国家引起女性死亡最常见的一个病因。目前发现，宫颈癌与固有免疫的免疫逃避机制有关[1]。核苷酸结合寡聚域（nucleotide-binding oligomerization domain，NOD）1是NOD样受体家族成员之一，为人固有免疫的一种，属于细胞内模式识别受体，参与细胞内信号传导，与机体的抗感染、肿瘤、关节炎和炎症性肠病等多种疾病的发病机制有关[2-3]，有望成为肿瘤治疗的靶点。然而NOD1是否参与宫颈癌的发病机制至今尚不清楚。本研究通过检测宫颈癌组织中NOD1的表达，探讨NOD1与宫颈癌临床病理特症的关系，为临床的靶向治疗提供新的理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料2008年6月—2015年8月台州市三家医院收治宫颈癌患者107例，其中浙江省台州市中西医结合医院28例，台州市肿瘤医院31例，台州市中心医院48例；手术55例，活检52例；年龄22～76岁，平均（46.2±14.3）岁。术毕取肿瘤组织、癌旁组织及腹腔淋巴结，常规HE染色，伴有淋巴结转移36例。并选取同时期慢性宫颈炎患者50例，年龄20～67岁，平均（43.1±10.2）岁；宫颈上皮内瘤样变患者50例，年龄20～61岁，平均（41.2±9.4）岁。三组年龄差异无统计学意义（P>0.05）。所有病例均经病理确诊，且术前均未接受放疗或化疗，无其他恶性肿瘤史。

1.2 主要试剂多克隆兔抗人NOD1 IgG抗体购自英国biorbyt公司（批号P10336），即用型SP试剂盒（PV-6000）和防脱玻片购自北京中杉金桥生物技术有限公司。免疫组化SP法测定NOD1的表达，抗体稀释浓度均为1∶100。

1.3 方法免疫组化法检测107例宫颈癌、50例宫颈上皮内瘤变、50例慢性宫颈炎组织NOD1的表达。光镜下观察细胞着色情况，阳性细胞的胞浆呈棕黄色表达。每张切片观察5个视野（×200），取其平均值即为每张切片的观察结果。按阳性细胞所占比例及分布情况判定[4]：阴性（-）：单个细胞染色，阳性细胞数<5%；弱阳性（+）：散在或小的细胞团染色，阳性细胞数5%～24%；阳性（++）：片状或簇状细胞染色，阳性细胞数为25%～50%；强阳性（+++）弥散的细胞染色，阳性细胞数>50%。每张切片随机选择5个视野，采用Image-pro Plus 5.1免疫组化图像分析系统对阳性细胞进行灰度扫描，取其平均值代表该片的光密度（optical density，OD）值。

1.4 统计学方法应用SPSS16.0统计软件，计量资料以均数±标准差（） 表示，多组间均数比较采用单因素方差分析，两组间比较采用成组资料的t检验；计数资料采用卡方检验；P<0.05（双侧）为差异有统计学意义。

2 结果

免疫组化结果显示，阳性细胞的胞浆呈棕黄色表达，三组患者的宫颈组织均有NOD1呈阳性表达。三组间NOD1阳性率差异有统计学意义（χ2=20.06，P<0.01），宫颈癌组NOD1阳性率显著高于宫颈上皮内瘤变组和慢性宫颈炎组（χ2=7.15、20.36，P<0.05或 0.01），宫颈上皮内瘤变组和慢性宫颈炎组NOD1阳性率差异无统计学意义（χ2=2.29，P>0.05）。方差齐性检验结果，三组间NOD1的阳性表达强度方差齐（F= 2.96，P>0.05）。宫颈癌组患者NOD1的阳性表达强度显著高于慢性宫颈炎组患者（P<0.05），宫颈上皮内瘤变组患者NOD1阳性表达强度与慢性宫颈炎组患者及宫颈癌组患者比较差异无统计学意义（P> 0.05）。见表1，图1（封二）。

表1 三组患者宫颈组织NOD1表达水平比较（

表1 三组患者宫颈组织NOD1表达水平比较（

注：与慢性宫颈炎组比较，*P<0.05，**P<0.01；与宫颈上皮内瘤变组比较，△P<0.05；NOD1：核苷酸结合寡聚域

组别慢性宫颈炎组宫颈上皮内瘤变组宫颈癌组例数50 50 107阴性19 12 9阳性31 38 98阳性率（%）62.00 76.00 91.59**△阳性强度（OD值）0.16±0.04 0.18±0.04 0.18±0.05*

55例宫颈癌手术患者中，无淋巴结转移36例，伴有淋巴结转移19例，但两者的NOD1阳性率和阳性表达强度比较差异均无统计学意义（χ2=1.58，t= 0.52，P>0.05）。见表2。

表2 55例宫颈癌手术患者淋巴结转移情况及NOD1表达（）

表2 55例宫颈癌手术患者淋巴结转移情况及NOD1表达（）

注：NOD1：核苷酸结合寡聚域

阳性强度（OD值）0.19±0.05 0.18±0.05淋巴结转移阴性无有例数19 36 3 2阳性16 34阳性率（%）84.21 94.44

3 讨论

人类的模式识别受体主要有两类：一类是膜结合受体，如Toll样受体；另一类是细胞内的模式识别受体，包括NOD样受体和具有螺旋酶结构域的抗病毒蛋白受体。目前研究最多的是Toll样受体与肿瘤的关系，已证实Toll样受体与肿瘤的生物学行为有关[5-6]，其基因多态性与宫颈癌的发病机制相关[7]。

NOD样受体是一类类似于Toll样受体的模式识别受体，通过识别病原体相关分子模式和损伤相关分子模式，在天然免疫反应中起着决定性的作用。根据氨基末端不同NOD样受体可分为四个亚家族：NLRA、NLRB、NLRC和NLRP；如果根据不同功能还也可分为四种类型：炎症、信号转导、转录激活和自噬。在凋亡和发育早期中扮演关键的调节器[8]。NOD1是NOD样受体的家族成员之一，广泛表达于多种细胞，例如上皮细胞、间质细胞、内皮细胞等，激活炎症因子的产生，参与凋亡和炎症反应等[3]。目前认为NOD1与癌症的发病机制密切相关，可能成为癌症的标志物[9]。在舌鳞状细胞癌组织中，NOD1蛋白表达于细胞质，舌鳞状细胞癌组织NOD1 mRNA和蛋白表达低于正常舌黏膜组织，认为NOD1可能通过机体的天然免疫功能，影响舌鳞状细胞癌的发生及发展[10]。但NOD1在宫颈癌中的作用如何，目前知之甚少。

本研究发现，宫颈癌组织中NOD1的表达水平高于慢性宫颈炎和宫颈上皮内瘤变的病变组织。提示随着宫颈组织的分化程度降低，NOD1的表达水平也随之增强，推测NOD1的过度表达可能与宫颈组织的恶性分化程度相关。本研究同时还发现，宫颈癌患者伴有淋巴结转移与不伴有淋巴结转移组中，NOD1的阳性率和阳性表达强度均无差异，提示NOD1的表达水平与淋巴结转移无密切相关。

本研究结果表明，NOD1在宫颈癌组织中表达增强，可能与宫颈癌的发病机制相关，但与淋巴结转移无密切关系。

［1］del Toro-Arreola S，García-Chagollán M，Jave-Suárez LF. Escape mechanisms to the innate immune response in HPV-associated cervical cancer［J］.Rev Med Inst Mex Seguro Soc，2015，53（Suppl 2）：S194-199.

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［3］Takakubo Y，Barreto G，Konttinen YT，et al.Role of innate immune sensors，TLRs，and NALP3 in rheumatoid arthritis and osteoarthritis［J］.J Long Term Eff Med Implants，2014，24（4）：243-251.

［4］张怡，阮正英，叶佩卿，等.趋化因子GROα、MCP-1在宫颈癌发病机制中的作用［J］.中国现代医生，2013，51（19）：60-62.

［5］Echizen K，Hirose O，Maeda Y，Oshima M.Inflammation in gastric cancer：Interplay of the COX-2/prostaglandin E2 and Toll-like receptor/MyD88 pathways［J］.Cancer Sci，2016，107（4）：391-397.

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［8］Kim YK，Shin JS，Nahm MH.NOD-like receptors in infection，immunity，and diseases［J］.Yonsei Med J，2016，57（1）：5-14.

［9］罗斌，王世夫，应香岚，等.NOD2和TRAF2在结直肠癌中的表达［J］.中国中西医结合外科杂，2012，18（1）：30-33.

［10］庄媛媛，杨小兵，庄园，等.NOD1在舌鳞状细胞癌组织中的表达及意义［J］.口腔医学，2014，34（12）：904-906.

（收稿：2016-07-27修回：2016-12-09）

Roles of Nucleotide-binding Oligomerization Domainin the Pathogenesis of Cervical Cancer

ZHAO Qiaoyun1, FANGuangmin2,RUANZhengying1,YINGXianglan3.
1DepartmentofGynaecologyandObstetrics(ZHAO Qiaoyun),Department of Pathology(RUAN Zhengying),Taizhou Integrated Western and Traditional Chinese Medicine Hospital,Wenling(317523),China;2 Department of Pathology,Taizhou Central Hospital,Taizhou(317000),China；3 Department of Pathology,Taizhou Tumor Hospital,Wenling(317500),China

ObjectiveTo investigate the potential roles of nucleotide-binding oligomerization domain 1（NOD1）in the pathogenesis of the cervical cancer.MethodsTissues from 107 patients with cervical cancer,50 cases of cervical intraepithelial neoplasia and 50 cases of chronic cervicitis were obtained,then were examined with immunohistochemistryto determine the expression of NOD1 protein in them.ResultsThe positiverate and expression levels of NOD1 in cervical cancer group were significantly higher than that in chronic cervicitis group（91.59%vs 62.00%, P<0.01;0.18±0.05 vs 0.16±0.04 optical density,P<0.05）.The positiverate of NOD1 in cervical cancer group were significantly higher than that in cervical intraepithelial neoplasia group（91.59%vs 76.00%,P<0.05）,while there was no significant difference in NOD1 levels between the two groups（0.18±0.05 vs 0.18±0.04 optical density,P> 0.05）.In cervical cancer group,no significant difference in the positiverate and expression levels of NOD1 was found between the tissuewith lymph node metastasis and those without lymph node metastasis（94.44%vs 84.21%；0.18±0.05 vs 0.19±0.05 optical density,both P>0.05）.ConclusionExpression of NOD1 in cervical cancer were increased.This may be correlated with the pathogenesis of cervical cancer,but not related closely with lymph nodesmetastasis.

cervical cancer；nucleotide-binding oligomerization domain；Immunohistochemistry

浙江省温岭市科技计划项目（No：2012-1-84）

1浙江省台州市中西医结合医院妇产科（赵巧云）、病理科（阮正英）（台州317523）；2浙江省台州市中心医院病理科（台州317523）；3浙江省台州市肿瘤医院病理科（台州317 523）

赵巧云，Tel：13750666948；E-mail：zqyzgyy@sohu.com