宫颈鳞癌组织中β-catenin、E-cadherin、PTEN蛋白表达变化及其意义

杨冬梅，黄利红，夏琼，刘佩佩

(华中科技大学同济医学院附属普爱医院，武汉430033)

宫颈鳞癌组织中β-catenin、E-cadherin、PTEN蛋白表达变化及其意义

杨冬梅，黄利红，夏琼，刘佩佩

(华中科技大学同济医学院附属普爱医院，武汉430033)

目的 观察宫颈鳞癌组织中β-连环蛋白(β-catenin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、磷酸酶及张力蛋白同源(PTEN)蛋白的表达变化，并探讨其临床意义。方法 82例份宫颈鳞癌组织标本为观察组，32例份宫颈上皮内瘤变(CIN)组织标本为CIN组，30例份正常宫颈组织标本为正常组。采用免疫组化SP法进行检测各组β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白，表达与宫颈癌临床病理参数的关系，分析β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白的相关性，采用ROC曲线判断β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白在宫颈癌诊断中的灵敏度及特异度。结果 观察组β-catenin阳性表达率高于CIN组和对照组，E-cadherin、PTEN蛋白阳性表达率均低于CIN组和对照组(P均<0.05)。CIN组β-catenin阳性表达率高于对照组，E-cadherin、PTEN蛋白阳性表达率均低于对照组(P均<0.05)。β-catenin表达与宫颈鳞癌组织学分级、临床分期及淋巴结转移相关(P均<0.05)；E-cadherin、PTEN蛋白表达与宫颈鳞癌组织学分级、临床分期、浸润深度与淋巴结转移相关(P均<0.05)。β-catenin诊断宫颈鳞癌的灵敏度、特异度分别为89.02%、87.10%，E-cadherin诊断宫颈鳞癌的灵敏度、特异度分别为85.37%、83.87%，PTEN蛋白诊断宫颈鳞癌的灵敏度、特异度分别为84.15%、85.48%。宫颈鳞癌组织中β-catenin表达与E-cadherin、PTEN呈负相关(r分别为-0.736，-0.702；P<0.05)，E-cadherin表达与PTEN蛋白表达呈正相关(r=0.694，P<0.05)。结论 宫颈鳞癌组织中β-catenin高表达，E-cadherin、PTEN蛋白低表达。β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白诊断宫颈鳞癌的敏感度和特异度均较高。β-catenin、E-cadherin及PTEN在宫颈鳞癌的发生发展中可能存在相互作用。

宫颈肿瘤；宫颈癌；宫颈鳞癌；β-连环蛋白；E-钙黏蛋白；磷酸酶及张力蛋白同源

宫颈癌是女性生殖系统的常见的恶性肿瘤之一，发病率居妇科恶性肿瘤的第二位，且呈年轻化趋势[1]。宫颈鳞癌发病率占宫颈癌的90%以上，但其具体病因尚未明确。研究认为宫颈癌的发生发展与原癌基因的激活、抑癌基因的失活及信号通路的激活等关系密切[1]。β-连环蛋白(β-catenin)是一种细胞膜内黏着蛋白，可与、E-钙黏蛋白(E-cadherin)形成复合体，可保证组织结构的完整性和功能性。同时β-catenin又是Wnt信号通路的调节中心环节调控细胞的分化，其在细胞核内可与T淋巴细胞的转录因子相结合，激活原癌基因，导致肿瘤的发生[2]。E-cadherin可维持上皮细胞的正常状态，在肿瘤的在肿瘤的转移、侵袭过程中发挥重要作用[3]。磷酸酶及张力蛋白同源(PTEN)是一种抑癌基因，可反馈性抑制肿瘤细胞信号通路，抑制肿瘤细胞增殖、加速细胞凋亡[4]。目前关于β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白在宫颈癌组织肿的表达报道则较少。我们观察了宫颈鳞癌组织中β-catenin、E-cadherin、PTEN蛋白的表达变化，并探讨其临床意义，旨在为临床治疗宫颈癌提供新的靶点。

1 资料与方法

1.1 标本来源 2014年1月～2016年12月间我院病理科存档的宫颈组织标本144例份，其中宫颈鳞癌组织标本82例份(观察组)、宫颈上皮内瘤变(CIN)组织标本32例份(CIN组)、正常宫颈组织标本30例份(正常组)。患者年龄26～76(48.24±4.26)岁；三组标本提供者均未接受放、化疗。根据国际妇产科联盟对宫颈癌的分期标准[5]将观察组分为Ⅰ期42例、Ⅱ期40例；组织的分化程度为低分化50例，高、中分化32例；浸润深度≤1/2者46例、>1/2者36例；存在淋巴结转移30例，无淋巴结转移52例；肿瘤直径≥4 cm者28例，<4 cm者54例。本研究纳入患者临床资料完整，且未合并其他肿瘤。

1.2 各组β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白检测方法 采用免疫组化SP法。所有操作均严格按照使用说明书进行。单克隆抗体均是由北京中杉金桥生物技术有限公司提供，分别为鼠抗人β-catenin单克隆抗体、鼠抗人E-cadherin单克隆抗体和小鼠抗人PTEN单克隆抗体，二氨基联苯胺显色剂及载玻片购自武汉博士德生物工程有限公司。将各组标本制作成石蜡切片，常规脱蜡、包埋、切片，以0.01 mol/L的枸橼酸盐缓冲液(pH=6.0)加热修复抗原，待温度降至室温30 min后，加入0.01mol/L的PBS溶液冲洗3次，5 min/次；加入5%的正常山羊血清，37 ℃封闭40 min，然后滴加一抗，4 ℃过夜；37 ℃依次滴加生物素标记的二抗和辣根酶标记链酶卵白素液，分别反应25 min；二氨基联苯胺显色，苏木精复染，脱水、透明和封片。以空白PBS液作阴性对照。每张切片在高倍镜(×400)下随机选择10个不重复视野。结合染色强度和阳性细胞百分比综合判定结果[2]。染色强度为无着色计0分，黄色计1分，棕黄色计2分，黄褐色计3分；阳性细胞百分比<10%计0分，10%～<40%计1分，40%～<70%计2分，≥70%计3分；将上述两项得分相加， 0～1分为蛋白表达阴性，2分为弱阳性，3～4分为阳性，5～6分为强阳性，其中2～6分为蛋白表达阳性。

1.3 统计学方法 采用SPSS19.0统计软件。计数资料用百分率(%)表示，组间比较采用χ2检验； 采用ROC曲线判断β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白在宫颈鳞癌诊断中的灵敏度、特异度，采用Pearson相关性分析法分析β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白表达的相关性。P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 各组β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白表达比较 各组β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白阳性表达率比较见表1。

表1 各组β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白阳性表达率比较(%)

注：与正常组比较，*P<0.05；与CIN组比较，#P<0.05。

2.2 β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白表达与宫颈鳞癌临床病理参数的关系 β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白表达与宫颈鳞癌临床病理参数的关系见表2。β-catenin表达与宫颈鳞癌组织学分级、临床分期及淋巴结转移相关(P均<0.05)，而与年龄、浸润深度和肿瘤直径无关(P均>0.05)；E-cadherin、PTEN蛋白表达与宫颈鳞癌组织学分级、临床分期、浸润深度与淋巴结转移相关(P均<0.05)，而与年龄和肿瘤直径无关(P>0.05)。

2.3 β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白诊断宫颈鳞癌的灵敏度、特异度 ROC曲线分析结果显示，β-catenin诊断宫颈鳞癌的灵敏度、特异度分别为89.02%、87.10%，E-cadherin诊断宫颈鳞癌的灵敏度、特异度分别为85.37%、83.87%，PTEN蛋白诊断宫颈鳞癌的灵敏度、特异度分别为84.15%、85.48%。

2.4 宫颈鳞癌组织中β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白表达的相关性 相关性分析显示，宫颈鳞癌组织中β-catenin表达与E-cadherin、PTEN呈负相关(r分别为-0.736，-0.702；P<0.05)，E-cadherin表达与PTEN蛋白表达呈正相关(r=0.694，P<0.05)。

表2 β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白表达与宫颈鳞癌临床病理参数的关系(例)

3 讨论

β-catenin作为一种细胞膜上的多功能蛋白质，是钙离子依赖性黏蛋白家族成员，由多条肽链组成，人体中的编码基因为CTNNB1，位于3号染色的p21和p22上[6]。β-catenin不仅是组成Cadherin/Catenin 复合体的一部分，而且可以调节Wnt信号转导通路[7]。本研究结果显示，观察组β-catenin阳性表达率高于CIN组和对照组，CIN组β-catenin阳性表达率高于对照组。同时β-catenin表达与宫颈鳞癌组织学分级、临床分期及淋巴结转移相关，而与年龄、浸润深度和肿瘤直径无关，提示宫颈鳞癌组织中存在β-catenin表达异常，且与宫颈癌的发展具有紧密联系。β-catenin在细胞内有两种形式：游离型和结合型，游离型β-catenin参与Wnt信号转导，作用机制是通过核膜在细胞质或细胞核中结合转录因子Tcf/Lef，从而激活Wnt信号转导通路中的靶基因，发挥调节细胞增殖或凋亡的作用，加速肿瘤细胞的恶性增殖。结合型β-catenin在正常细胞中可以与细胞膜上的E-cadherin结合，从而调节细胞的黏附作用。Wnt信号转导通路处于失活状态时，多数β-catenin为结合型，形成蛋白复合体，可以通过磷酸化被降解，一旦Wnt信号转导通路处于激活状态，Wnt蛋白与多种蛋白受体结合，导致与β-catenin相结合的相关蛋白解离斌刚进入细胞质，阻断磷酸化进程，继而造成β-catenin沉积在细胞质中，而β-catenin又可以与细胞核中的转录因子相结合，激活Wnt信号转导通路中的肿瘤靶基因[2,8]。

E-cadherin是一种钙黏蛋白，具有Ca2+依赖性，分子量为120 kD，能够通过与α-、β-和γ-catenin形成复合体E-cadherin/catenin维持上皮细胞的形态及结构完整性，从而参与宫颈上皮细胞的分化成熟[8]。研究结果显示，观察组E-cadherin阳性表达率均低于CIN组和对照组，CIN组E-cadherin低于对照组。E-cadherin表达与宫颈鳞癌组织学分级、临床分期、浸润深度与淋巴结转移相关，而与年龄和肿瘤直径无关。这与相关研究[9]结果一致。PTEN是继p53后机体内肿瘤细胞中的的一种抑癌基因，可以调控细胞的生长周期，加速细胞的凋亡，调节细胞的黏附及迁移作用，另外能够参与生成新的血管，从而抑制恶性肿瘤生长，编码PTEN的蛋白同时具有脂质磷酸酶和蛋白磷酸酶的双重活性，对细胞中的信号因子产生广泛作用[10,11]。从PTEN表达情况的研究结果来看，在CIN组及观察组中的表达明显降低，且PTEN蛋白表达与宫颈鳞癌组织学分级、临床分期、浸润深度与淋巴结转移相关，而与年龄和肿瘤大小无关。说明PTEN表达的缺失是宫颈癌发生的主要事件，并且与其关系密切。

β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白诊断宫颈鳞癌的灵敏度及特异度均超过80%，表明三种指标均能有效地诊断宫颈癌，分析其原因主要与三种蛋白质的作用机理密切相关，研究中的不足是需要对三种指标的联合检测进行研究。宫颈鳞癌组织中β-catenin表达与E-cadherin和PTEN表达呈负相关，E-cadherin表达与PTEN蛋白表达呈正相关。说明三种蛋白间联系密切，β-catenin和E-cadherin可在细胞膜上形成复合体，共同维持细胞的形态及结构功能性，PTEN 的缺失表达会导致磷脂酰肌醇三磷酸去磷酸化失败，持续激活磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路，加速E-cadherin的表达缺失。而β-catenin与PTEN之间的具体联系尚有待进一步研究[4]。

综上所述，宫颈鳞癌组织中β-catenin高表达，E-cadherin、PTEN蛋白低表达。β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白诊断宫颈鳞癌的敏感度和特异度均较高。β-catenin、E-cadherin及PTEN在宫颈鳞癌的发生发展中可能存在相互作用。

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湖北省自然科学基金资助项目(2014CFB36)。

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.19.016

R711

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1002-266X(2017)19-0054-03

2017-02-10)