心肌梗死患者Lp-PLA2基因Y160X位点多态性检测的意义

张明明，于悦卿，赵培，杨朝菊，高伟，李亚丽，李芳

(河北省人民医院 1.检验科，2.生殖遗传科，3.风湿免疫科，河北 石家庄 050051)

·论 著·

心肌梗死患者Lp-PLA2基因Y160X位点多态性检测的意义

张明明1，于悦卿1，赵培1，杨朝菊1，高伟1，李亚丽2，李芳3

(河北省人民医院 1.检验科，2.生殖遗传科，3.风湿免疫科，河北 石家庄 050051)

目的：检测Lp-PLA2基因Y160X位点突变与心肌梗死(MI)的关系。方法：检测病例组和对照组Lp-PLA2基因多态性，Logistic回归分析Lp-PLA2多态性与MI的关系，以及病例组和对照组血脂、血糖、Lp-PLA2、超敏C反应蛋白(HsCRP)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)水平，分析这些指标与MI及Lp-PLA2基因突变的关系。结果：病例组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDLC)、Lp-PLA2、HsCRP、IL-6水平及家族史阳性率高于对照组，HDLC、IL-10水平低于对照组(P<0.05)；发病1周、1个月时Lp-PLA2、HsCRP、IL-6水平下降，IL-10水平上升(P<0.05)。Lp-PLA2基因型是MI的独立危险因素。结论：Lp-PLA2基因Y160X位点突变可能是MI的原因。

脂蛋白相关磷脂酶A2基因；基因多态性；心肌梗死；遗传易感性

研究发现，脂蛋白相关磷脂酶A2(lipoprotein associated phospholipase A2，Lp-PLA2)基因突变与冠心病有关[1-2]，但未见Lp-PLA2基因Y160X突变与心肌梗死(MI)关系的报道。本研究对487例MI患者和450例健康体检者Lp-PLA2基因Y160X位点多态性和血清Lp-PLA2、炎症因子的差异进行比较分析，探讨Lp-PLA2基因突变与MI的关系。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选择2014年4月至2016年4月在我院确诊住院的MI患者487例为病例组，其中男294例，女193例，中位年龄47岁。选择同期来我院体检的健康人450例为对照组，男272例，女178例，中位年龄47岁。

1.2 血清采集

病例组于入院24h内取空腹静脉血7ml，2ml用于提取DNA，5ml分离血清，检测血脂、血糖(Glu)、Lp-PLA2、超敏C反应蛋白(Hs-CRP)、白介素-6(IL-6)及IL-10。入院后1 周和1个月复查上述指标。对照组抽取空腹静脉血7ml，检测上述指标。

1.3 实验室检测

Beckman AU5821生化仪测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDLC)、低密度脂蛋白(LDLC)、Glu水平。Abbott ARCHITECT plus i2000 SR电发光分析仪检测血清Lp-PLA2。Siemens BNⅡ system蛋白分析仪检测血清中Hs-CRP水平。ELISA法检测IL-6 、IL-10水平，酶标仪450nm处读取OD值。按文献[3]检测Lp-PLA2基因Y160X位点多态性。

1.4 统计学处理

数据采用SPSS16.0软件进行统计处理。采用t检验，F检验、χ2检验、Spearman相关分析、多因素Logistic回归分析进行处理。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组基本资料比较

病例组TC、TG、LDLC、Lp-PLA2、HsCRP、IL-6水平及家族史阳性率显著高于对照组，HDLC、IL-10水平明显低于对照组(P<0.01)；Glu水平两组差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

组 别n年龄/岁家族史TC/mmol·L-1TG/mmol·L-1HDLC/mmol·L-1LDLC/mmol·L-1病例组48747.9±10.3183(37.6)5.19±1.021.85±0.610.77±0.153.58±0.77对照组45048.0±11.455(12.2)4.19±0.591.07±0.291.27±0.282.43±0.42t/χ2值-0.14179.00218.17624.670-34.42328.058P值0.888<0.001<0.001<0.001<0.001<0.001组 别nGlu/mmol·L-1LP-PLA2/ng·ml-1HsCRP/mg·L-1IL-6/pg·ml-1IL-10/pg·ml-1病例组4874.88±0.55384.2±75.823.2±4.6573.2±98.7192.5±35.7对照组4504.83±0.46114.9±29.85.12±0.84148.8±26.8409.6±77.5t值1.50370.49782.11888.255-55.75P值0.103<0.001<0.001<0.001<0.001

注：括号内为百分比

2.2 两组不同时间Lp-PLA2、炎症因子水平比较

Lp-PLA2、HsCRP、IL-6水平随疾病时间逐渐下降，IL-10水平逐渐上升。发病1个月后HsCRP、IL-6的水平下降至对照组水平，IL-10水平上升至对照组水平(P>0.05)，但Lp-PLA2的水平仍高于对照组(P<0.05)，见表2。

组 别nLp-PLA2/ng·ml-1HsCRP/mg·L-1IL-6/pg·ml-1IL-10/pg·ml-1病例组487 入院时384.2±75.8ac23.2±4.6ac573.2±98.7ac192.5±35.7ac 入院1周282.4±57.6ab14.6±3.3ab328.5±56.3ab289.4±33.9ab 入院1个月168.4±44.8abc5.20±0.58bc150.3±27.2bc396.2±58.8bc对照组450114.9±29.85.12±0.84148.8±26.8409.6±77.5

与对照组比较，aP<0.05；与同组入院时比较，bP<0.05；与同组入院1周时比较，cP<0.05

2.3 Lp-PLA2基因第6外显子Y160X位点多态性直接测序结果

该位点存在等位基因T和A，有3种基因型：AA(突变纯合子)、AT(突变杂合子)、TT(野生型)，见图1。

图1 Lp-PLA2基因Y160X位点多态性情况

Fig 1 Y160X site polymorphism of Lp-PLA2 gene

2.4 两组Lp-PLA2基因Y160X位点基因型和等位基因频率分布

病例组AA、AT基因型频率明显高于对照组(χ2=13.506，P=0.0002；χ2=49.997，P<0.001)；病例组A等位基因频率(20.0 %)明显高于对照组(6.6%)(χ2=72.383，P<0.001)，见表3。

2.5 病例组入院时血清Lp-PLA2、HsCRP、IL-6、IL-10之间的相关性

Spearman结果显示，Lp-PLA2与HsCRP、IL-6呈正相关(r=0.4376；r=0.3152，均P<0.001)，与IL-10负相关(r=-0.2755，P<0.001)；HsCRP、IL-6与IL-10负相关(r=-0.4016；r=-0.2341，均P<0.001)。

2.6 Logistic回归分析结果

以MI(无=0，有=1)为因变量，TC、TG、LDLC、HDLC、Lp-PLA2、HsCRP、IL-6、IL-10、Lp-PLA2基因Y160X位点基因型(TT=0，AT=1；AA=2)为自变量进行Logistic回归分析，结果显示基因型与Lp-PLA2、MI有关(分别OR=9.863，95%CI4.107-21.331，P<0.001；OR=1.239，95%CI1.023-2.017，P=0.031)，见表4。

表3 两组Lp-PLA2基因Y160X位点多态性基因型和等位基因频率分布 例

Tab 3 The frequency of genotype and alleles of Y160X site polymorphism of Lp-PLA2 gene in case group and control group case

组 别n基因型 TT AT AA 等位基因 T A 病例组487318(65.3)143(29.4)a26(5.3)a779(80.0)195(20.0)a对照组450396(88.0)49(10.9)5(1.1)841(93.4)59(6.6)

注：括号内为百分比

与对照组比较，aP<0.05

表4 MI危险因素多因素Logistic回归分析结果

Tab 4 Results of Logistic regression analysis for risk factors of MI

变 量B值SE值Wald值df值P值OR值95%CI基因型2.3150.37236.5701<0.0019.8634.107-21.331Lp-PLA20.1450.2314.32710.0311.2391.023-2.017TC0.1340.1950.09410.6340.9140.798-1.139TG0.0450.0810.06910.7100.8390.713-1.094HDLC-0.1210.1971.06810.4371.4370.897-1.683LDLC0.2570.2943.29610.0821.2840.821-1.934HsCRP0.4210.2342.62410.2511.2390.738-1.776IL-60.5940.3931.92710.3421.3010.637-1.835IL-10-0.3600.4123.01410.1310.6970.436-1.096

3 讨 论

在MI发病中遗传因素、炎症因子均发挥了作用[4-5]。Lp-PLA2与冠心病及炎症因子有关。HsCRP是反映炎症情况的灵敏指标[6]；IL-6具有刺激炎症细胞的作用[7]；IL-10能下调炎症反应[8]。本研究病例组Lp-PLA2、HsCRP、IL-6水平高于对照组，IL-10低于对照组，提示MI的过程有炎症反应参与，Lp-PLA2与MI有关。本研究还发现，病例组的TC、TG、LDLC水平高于对照组，HDLC低于对照组，提示血脂异常与MI有关。

Lp-PLA2基因位于6p21.2-p12[9]，Y160X突变导致氨基酸由酪氨酸(Tyr，Y)变为终止密码子，突变后肽链不完整，空间构象及功能都可能改变。本结果显示，病例组AT、AG基因型以及A等位基因的分布频率均明显高于对照组，提示Y160X位点突变可能与MI的发病相关。

Logistic回归分析结果显示，AA基因型与MI关系密切，是MI的独立危险因素，提示Lp-PLA2基因突变与MI有关。结果还显示血清Lp-PLA2的水平也与MI有关，我们推测Lp-PLA2可能通过刺激IL-6、抑制IL-10而促进了MI的发生，但具体机制还有待深入研究。

[1] WANG Q，HAO Y，MO X，et al.Nonsynonymous polymorphisms in PLA2G7 gene are associated with the risk of coronary heart disease in a southern Chinese population[J].Mamm Genome，2015，26(3-4):191-199.

[2] MAIOLINO G，LENZINI L，PEDON L，et al.Lipoprotein-associated phospholipase A2 single-nucleotide polymorphisms and cardiovascular events in patients with coronary artery disease[J].Cardiovasc Med (Hagerstown)，2015，16(3):259.

[3] 张明明，卢亚敏，刘欣，等.石家庄地区肥胖人群KCTD15基因多态性与白细胞介素-35的关系[J].广东医学，2015，36(23)：3682-3685.

[4] ZHAO W，MA S T，CUI L Q.Meta-analysis of angiotensin-converting enzyme insertion/deletion polymorphism and myocardial infarction in Han Chinese[J].Genet Mol Res，2015，14(3):8068-8076.

[5] LEI J，ZHU F，ZHANG Y，et al.Transient receptor potential vanilloid subtype 1 inhibits inflammation and apoptosis via the release of calcitonin gene-related peptide in the heart after myocardial infarction[J].Cardiology，2016，134(4):436-443.

[6] 虞春雷，李艳志，任利群.心率变异性及高敏C反应蛋白与冠状动脉病变程度及预后的相关性研究[J].东南大学学报:医学版，2014，33(1)：58-62.

[7] RIDKER P M.From C-reactive protein to interleukin-6 to interleukin-1：moving upstream to identify novel targets for atheroprotection[J].Circ Res，2016，118(1):145-156.

[8] MOBINI M，MORTAZAVI M，NADI S，et al.Significant roles played by interleukin-10 in outcome of pregnancy[J].Iran J Basic Med Sci，2016，19(2):119-124.

[9] VITTOS O，TOANA B，VITTOS A，et al.Lipoprotein-associated phospholipase A2 (Lp-PLA2)：a review of its role and significance as a cardiovascular biomarker[J].Biomarkers，2012，17(4):289-302.

Significance of detection the Y160X site polymorphism of Lp-PLA2 gene in patients with myocardial infarction

ZHANG Ming-ming1，YU Yue-qing1，Zhao Pei1，YANG Chao-ju1，GAO Wei1，LI Ya-li2，LI Fang3

(1.DepartmentofMedicalLaboratory；2.DepartmentofReproductionandGenetics；3.DepartmentofRheumaticImmunology；HebeiGeneralHospital，Shijiazhuang050051，China)

Objective: To investigate the relationship between Y160X site polymorphism of Lp-PLA2 gene and myocardial infarction(MI).Methods:Y160X site polymorphism of Lp-PLA2 gene was tested in case group and control group.Logistic regression analysis was used to analyze relationship between Y160X site polymorphism of Lp-PLA2 gene and MI.Serum Lp-PLA2，lipids，glucose，HsCRP，IL-6，IL-10 of the 2 groups were detected simultaneously.Results:The serum levels of TC，TG，LDL-C，Lp-PLA2，HsCRP，IL-6，and positivie rate of family history in case group were higher than those in control group；while the levels of HDL-C，IL-10 were lower than those in control group (P<0.05).Levels of Lp-PLA2，HsCRP，IL-6 decreased after 1 week，1month，whereas the level of IL-10 increased (P<0.05).Genotype of Lp-PLA2 gene was risk factor of MI.Conclusions:The Y160X(T/A) site polymorphism of LP-PLA2 gene may be one pathogeny of MI.

Lp-PLA2 gene；gene polymorphism；myocardial infarction；genetic susceptibility

2016-08-07

2016-08-29

河北省科技支撑项目资助项目(16277771D)

张明明(1976-)，女，河北昌黎人，副主任技师。E-mail:zhangmm197612@126.com

张明明，于悦卿，赵培，等.心肌梗死患者Lp-PLA2基因Y160X位点多态性检测的意义[J].东南大学学报:医学版，2017，36(1)：40-43.

R446.1；R541.4

A

1671-6264(2017)01-0040-04

10.3969/j.issn.1671-6264.2017.01.010