胃癌组织中Vav1蛋白表达与胃癌临床生物学行为及预后的关系

范立侨，谭明，李勇，檀碧波，王冬，刘庆伟

(河北医科大学第四医院 外三科，河北 石家庄 050011)

·论 著·

胃癌组织中Vav1蛋白表达与胃癌临床生物学行为及预后的关系

范立侨，谭明，李勇，檀碧波，王冬，刘庆伟

(河北医科大学第四医院 外三科，河北 石家庄 050011)

目的：探讨胃癌组织中Vav1蛋白表达与肿瘤临床生物学行为及预后的关系，并对Vav1蛋白与转移相关蛋白MMP-2、TIMP-1的关系进行分析。方法：采用免疫组织化学方法检测Vav1、MMP-2、TIMP-1蛋白在胃癌及癌旁组织中的表达，收集患者的临床资料并进行随访。结果：Vav1、MMP-2蛋白在胃癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织(均P<0.01)，TIMP-1蛋白在胃癌组织中表达低于癌旁组织(P<0.01)。Vav1蛋白与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期相关(P<0.05)。Vav1阳性表达患者5年生存率为26.26%，明显低于阴性表达患者(50.82%)(均P<0.05)。Cox比例风险回归显示，Vav1阳性表达是影响患者预后的独立危险因素(P<0.05)。Vav1与MMP-2存在正相关关系(P<0.05)。结论：Vav1与胃癌的侵袭转移有关，Vav1阳性表达是胃癌预后差的标志。

胃癌；Vav1蛋白；侵袭；转移；预后

研究发现，Vav家族中的Vav1基因在各种生物和细胞信号转导中扮演重要的角色[1]。Vav1对T和B淋巴细胞的发育、功能及其受体诱导的钙离子通道具有极其重要的作用[2]。Vav1蛋白可以促进细胞恶性转化[3]。目前有关Vav1侵袭转移机制不明，研究证实，Vav1具有原癌基因特征，然而与胃癌关系尚不明确。本研究应用免疫组化方法，分析Vav1与胃癌临床生物学行为及预后的关系，探讨检测胃癌组织中Vav1蛋白的意义。为初步了解Vav1蛋白的作用机制，我们还检测了与肿瘤转移关系密切的MMP-2、TIMP-1蛋白，分析Vav1与它们的关系。

1 资料与方法

1.1 病例来源

本研究收集2009年1月至2010年7月在我院经手术、病理学确诊为胃癌的患者160例，其中男123例，女37例，年龄为33～82岁，中位年龄为59岁。均有完整的临床资料及随访，随访截止日期为2015年8月。胃癌组为石蜡包埋的癌组织；癌旁组为石蜡包埋的距癌灶边缘5cm以上的胃组织，病理学证实无癌存在。

1.2 主要实验试剂

Vav1兔抗人多克隆抗体、MMP-2兔抗人多克隆抗体、TIMP-1兔抗人多克隆抗体均购自武汉云克隆科技股份有限公司。免疫组化试剂盒、浓缩型DAB试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 免疫组化染色检测Vav1、MMP-2以及TIMP-1蛋白表达

用免疫组化二步法检测Vav1、MMP-2以及TIMP-1蛋白的表达，以PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照，以试剂盒提供的组织作为阳性对照。Vav1、MMP-2以及TIMP-1以胞浆出现黄色染色颗粒为阳性。随机选取5个高倍镜视野，根据阳性细胞所占比例及染色强弱度计分，表达强度为(-)或(+)记为阴性表达，(++)或(+++)记为阳性表达。

1.4 统计学处理

数据采用SPSS 13.0统计软件进行处理，采用χ2检验、Spearman相关性分析、Kaplan-Meier法生存分析、Cox比例风险回归模型对结果进行分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 胃癌组织中Vav1、MMP-2以及TIMP-1的表达与肿瘤生物学的关系

Vav1阳性表达率在胃癌组织中高于癌旁组织(χ2=12.818，P<0.001)(表1)。TIMP-1阳性表达率在胃癌组织中明显低于癌旁组织(χ2=19.031，P<0.001)(图1)。Vav1阳性表达率与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移以及TNM分期相关(分别χ2=4.264，P=0.039；χ2=7.385，P=0.007；χ2=4.251，P=0.039；χ2=5.464，P=0.019)(表2)。MMP-2阳性表达率在胃癌组织中显著高于癌旁组织(χ2=76.098，P<0.001)。

表1 Vav1、MMP-2以及TIMP-1的表达情况

组 别Vav1MMP-2TIMP-1阳性/例阳性率/%阳性/例阳性率/%阳性/例阳性率/%癌旁组6741.884326.8810263.75胃癌组9961.8812175.636339.38χ2值12.81876.09819.031P值<0.001<0.001<0.001

A.Vav1在胃癌组织中的阳性表达；B.Vav1在癌旁组织中的阴性表达

图1 Vav1在胃癌组织及癌旁组织中的表达 Elivision×400

2.2 胃癌组织中Vav1的表达与预后的关系

Vav1阳性表达患者5年生存率为26.26%，阴性表达患者5年生存率为50.82%(χ2=4.550，P=0.033)。Kaplan-Meier生存分析显示，Vav1阳性表达患者的生存率低于阴性表达的患者(图2)。Cox比例风险回归显示，Vav1的阳性表达是胃癌预后的独立危险因素(表3)。

表2 胃癌组织中Vav1的表达与胃癌临床生物学行为的关系

临床生物学特征nVav1蛋白 阳性/例 阳性率/% χ2值P值性别1.8220.177 男性1238367.48 女性371643.24年龄0.0260.871 <60845363.10 ≥60764660.53部位0.3810.826 贲门胃底694260.87 胃体/窦684058.82 全胃231878.26大小1.4590.227 ≤5cm723758.33 >5cm886264.77大体类型(Borrmann)0.8120.846 Ⅰ型4250.00 Ⅱ型482552.08 Ⅲ型855665.88 Ⅳ型231669.57分化程度4.2640.039 高/中分化894247.19 低/未分化715780.28浸润深度7.3850.007 T1、T2541833.33 T3、T41068176.42脉管瘤栓0.0570.812 无1298162.79 有311858.06淋巴结转移4.2510.039 无622641.94 有987374.49远处转移0.5830.445 无1529663.16 有8337.50TNM分期5.4640.019 Ⅰ、Ⅱ823643.90 Ⅲ、Ⅳ786380.77

图2 胃癌中Vav1表达与预后关系的K-M曲线

表3 Vav1的表达与预后的多因素分析

因 素B值SE值Wald值df值SigExp(B)Vav12.1350.34338.65210.0008.458TNM分期1.1460.27517.41710.0003.145脉管瘤栓1.2890.26922.94510.0003.630

2.3 胃癌组织中Vav1、MMP-2及TIMP-1表达之间的相关分析

结果显示，Vav1与MMP-2呈正相关，差异有统计学意义(P<0.001，r=0.454)。Vav1与TIMP-1以及MMP-2与TIMP-1无明显相关性(P=0.746，r=-0.026；P=0.810，r=-0.019)。

3 讨 论

胃癌具有较强的侵袭转移力，这是胃癌预后差的重要原因[4-5]。Vavl蛋白在不同的信号传导通路激活自然杀伤细胞，触发自然杀伤作用[1-2，6]。Sebban等[7]报道，乳腺癌组织中Vav1的表达显著高于癌旁正常组织。Fernandez-Zapico[8]发现，胰腺导管癌组织中Vav1的表达显著高于癌旁正常组织。齐瑶等[9]发现，抑制非小细胞肺癌中Vav1蛋白的表达，肿瘤分化程度降低，以上结果均说明Vav1与恶性肿瘤关系密切。

本研究结果显示：Vav1蛋白的阳性表达率在胃癌组织中为61.88%，高于癌旁组织；Vav1的表达与肿瘤分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移以及TNM分期相关，提示Vav1可能参与了胃癌侵袭转移。5年生存率Vav1阳性表达患者低于阴性者，多因素分析提示，Vav1的阳性表达是影响胃癌预后的独立危险因素，提示Vav1蛋白可能是胃癌预后差的标志物。

为了解Vav1与胃癌侵袭转移的关系，本研究还检测MMP-2、TIMP-1在胃癌中的表达，MMP-2的阳性表达率在胃癌组织中显著高于癌旁组织；TIMP-1的阳性表达率在胃癌组织中明显低于癌旁组织。相关性分析显示，Vav1与MMP-2呈正相关，说明Vav1与MMP-2在胃癌的侵袭转移中可能起协同作用，对此还需进一步研究。

[1] BUSTELO X R.Vav family exchange factors：an integrated regulatory and functional view[J].Small Gtpases，2014，5(2):1-12.

[2] MANES T D，POBER J S.TCR-driven transendothelial migration of human effector memory CD4 T cells involves Vav，Rac，and myosin ⅡA[J].J Immunol，2013，190(7):3079-3088.

[3] LAZER G，KATZAV S.Guanine nucleotide exchange factors for Rho Gtpases：good therapeutic targets for cancer therapy?[J].Cell Signal，2011，23(6):969-979.

[4] 聂鲁愚，朱海涛，谢敏.胃癌患者外周血骨髓干细胞水平变化的初步研究[J].东南大学学报：医学版，2016，35(2)：226-228.

[5] 姚远，李艳，赵鸿梅.MTA1在胃癌细胞系和胃癌组织中的表达定位以及临床意义[J].东南大学学报：医学版，2012，31(2)：158-161.

[6] KATZAV S.Flesh and blood：The story of Vav1，a gene that signals in hematopoietic cells but can be transforming in human malignancies[J].Cancer Lett，2007,255(2):241-254.

[7] SEBBAN S，FARAGO M，GASHAI D，et al.Vav1 fine tunes p53 control of apoptosis versus proliferation in breast cancer [J].PLos One，2013，8(1):e54321.

[8] FERNANDEZ-ZAPICO M E，GONZALEZ-PAZ N C，WEISS E，et al.Ectopic expression of Vav1 reveals an unexpected role in pancreatic cancer tumorigenesis[J].Cancer Cell，2005，7(1):39-49.

[9] 齐瑶，李润美，于津浦，等.Vav1蛋白在非小细胞肺癌浸润T淋巴细胞中的表达及意义[J].中国免疫学杂志，2013，29(3):279-282.

Expression of Vav1 protein in gastric cancer and it′s relationship with clinical biological behaviors and prognosis of gastric cancer

FAN Li-qiao，TAN Ming，LI Yong，TAN Bi-bo，WANG Dong，LIU Qing-wei

(TheThirdDepartmentofSurgery，theFourthHospital，HebeiMedicalUniversity，Shijiazhuang050011，China)

Objective: To explore the relationship between the expression of Vav1 protein and clinical biological behavior，prognosis of gastric cancer，and to analysize of the relationship among Vav1 protein MMP-2 and TIMP-1 of the metastasis associated protein.Methods:Expressions of Vav1，MMP-2，TIMP-1 proteins in gastric cancer and paracancerous tissues were tested by immunohistochemistry.Data of clinicopathological characteristics and follow-up were also collected.Results: The expressions of Vav1，MMP-2 in gastric cancer were higher than in paracancerous tissue(allP<0.01)，whereas expression of TIMP-1 was lower in gastric cancer than in paracancerous tissues(P<0.01).The expression of Vav1 in gastric cancer was correlated with the tumor differentiation，tumor infiltration depth，lymph node metastasis and TNM stage(allP<0.05).Five years survival rate in patients with Vav1 positive was 26.26%，and the negative was 50.82%(P<0.05).Cox proportional hazard regression showed that the positive expression of Vav1 was an independent risk factor affecting the prognosis of patients(P<0.05).The expression of Vav1 was positive correlated with MMP-2(P<0.05).Conclusion:Vav1 is involved in the invasion，metastasis of gastric cancer，and positive expression of Vav1 may be an independent risk factor for the prognosis of patients with gastric cancer.

gastric cancer；Vav1 protein；invasion；metastasis；prognosis

2016-06-03

2016-08-25

国家自然科学基金资助项目(81372580)；河北省自然科学基金资助项目(H2016206173)；河北省科技项目(14277779D)

范立侨(1963-)，男，山东淄博人，主任医师，教授。E-mail：drflq@sina.com

李勇 E-mail：li_yong_hbth@126.com

范立侨，谭明，李勇，等.胃癌组织中Vav1蛋白表达与胃癌临床生物学行为及预后的关系[J].东南大学学报:医学版，2017，36(1)：4-8.

R735.2

A

1671-6264(2017)01-0004-05

10.3969/j.issn.1671-6264.2017.01.002