p16、CK 17在宫颈ASC-US细胞蜡块中的表达及临床价值

周秋锋，赵志刚，岳双磊，平金良，祁水琴

（1.安吉县人民医院，浙江 安吉313300；2.湖州市中心医院，浙江 湖州313000）

p16、CK 17在宫颈ASC-US细胞蜡块中的表达及临床价值

周秋锋1，赵志刚1，岳双磊1，平金良2，祁水琴1

（1.安吉县人民医院，浙江 安吉313300；2.湖州市中心医院，浙江 湖州313000）

目的 探讨p16、CK17在宫颈ASC-US细胞蜡块及组织活检标本中的表达及其临床意义。 方法 选取120例宫颈ASC-US的细胞蜡块及组织活检标本，分别采用EnVision免疫组化法测定p16、CK17的表达，并分析这两种标记物在蜡块和活检组织中的表达情况。 结果 p16、CK17在ASC-US细胞蜡块及组织活检标本中的表达一致（P＞0.05）；p16阳性与宫颈CIN的发生密切相关，而CK17阳性提示宫颈不成熟鳞状上皮化生。 结论 在宫颈ASCUS的细胞蜡块中联合检测p16、CK17表达，可进一步对ASC-US行病理诊断分类，有较好的临床应用价值。

宫颈ASC-US；p16；CK17；免疫组织化学染色；TCT

宫颈不典型鳞状上皮细胞不能明确意义（atypicalsquamouscellsofundetermined significance，ASC-US）是宫颈TCT检查中最常见的诊断结果，约占阳性病例的50%，是指鳞状细胞有异常改变，但尚未达到鳞状上皮内病变（squamous intraepithelial lesion，SIL）的程度，包括增生活跃的良性病变、潜在恶性病变及恶性病变，在TCT中不能对其进行明确的分类，只是一种排除性诊断。因此，寻找对ASC-US有诊断价值的生物标志物，进一步完善和改进宫颈癌前病变的筛查和诊断方法具有重要意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2014年1月1日～12月30日经TCT检查诊断为ASC-US的病例共120例，包括安吉县人民医院40例、湖州市中心医院80例，年龄28～65岁，平均44.2岁。所有病例均进行组织学活检，活检结果为宫颈炎49例，良性再生性病变9例，未成熟鳞化（IM）12例，CIN50例。

1.2 方法

1.2.1 细胞蜡块制作 收集TCT保存液中剩余标本 （肉眼可见组织碎屑），于离心管中离心沉淀（2500r/min）10分钟，弃上清液，将沉淀物集中于滤纸，置于包埋盒中，按常规方法固定及脱水，石蜡包埋切片。

1.2.2 主要试剂 鼠抗人p16、CK17单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司，EnVision免疫组化试剂盒购自丹麦DAKO公司，4℃冰箱保存备用。

1.2.3 免疫组织化学染色 120例ASC-US病例的细胞蜡块和对应组织切片均进行免疫组织化学染色。免疫组织化学采用EnVision二步法，按产品说明书操作，操作步骤简述如下：组织切片经脱蜡、脱二甲苯、水化后，0.3%H2O2封闭内源性过氧化物酶15分钟，柠檬酸钠缓冲液（0.01mol/L，pH6.0）微波抗原修复10分钟，冷却至常温，滴加一抗（p16工作浓度1:100，CK17工作浓度1:200），37℃孵育40分钟，滴加酶标抗鼠/兔聚合物，室温下孵育30分钟，滴加二氨基联苯胺（3，3’-diaminobenzidine，DAB）显色，苏木精复染细胞核，常规脱水，透明，封片，光镜下观察。以PBS代替一抗作阴性对照，已知阳性宫颈上皮内病变切片作为阳性对照。

1.3 结果判定 由2名高年资病理医师采用双盲法阅片进行判定，阳性为棕黄色颗粒状，p16阳性定位于细胞核和/或胞浆，CK17阳性定位于细胞浆，上皮细胞无任何着色为（-），有上皮细胞着色为（+），腺上皮生发上皮的CK17着色视为阴性。

1.4 统计学处理 采用SPSS18.0统计软件进行统计分析，计数资料采用χ2检验。

2 结果

2.1 在细胞蜡块和组织活检标本中的表达 120例中，p16和CK17在细胞蜡块和组织活检标本中的阳性表达率差异均无统计学意义（均P＞0.05），即在ASC-US病例的细胞蜡块和组织活检标本中，p16和CK17的表达是一致的。详见表1、图1～4。2.2 p16、CK17在ASC-US中表达 p16诊断为CIN的阳性率细胞蜡块为 96.0%，活检标本为100.0%，而在其他宫颈良性病变中不表达或少量表达；CK17的阳性表达更多见于不成熟化生的病例（细胞蜡块的阳性率为91.6%，活检标本的阳性率为100.0%），在其他良性病变及宫颈CIN中CK17的表达均较少。这些结果提示，p16阳性与宫颈CIN的发生密切相关，而CK17阳性提示宫颈不成熟鳞状上皮化生。

表1 细胞蜡块和病理组织学p16、CK17阳性表达比较（%）

图1 细胞蜡块中p16阳性表达，呈棕黄色（EnVision×200）

图2 组织活检中p16阳性表达（EnVision×200）

图3 细胞蜡块中CK17阳性表达（EnVision×200）

图4 组织活检中CK17阳性表达（EnVision×200）

3 讨论

p16是1994年6月由Kamb[1]报道的一种新型抑癌基因，又称MTSl（多肿瘤抑制基因），为细胞周期依赖性激酶（CDK）抑制蛋白，通过与细胞周期素D（CyclinD）竞争CDK4、CDK6，阻止细胞由G1期进入S期，从而抑制细胞增殖[2]。目前研究发现，p16阳性表达与HPV感染密切相关，可预测HPV阳性女性发生高级别宫颈上皮内瘤样病变或更差临床状况的风险[3-4]。本次统计也表明p16在宫颈CIN病变中的表达量明显高于其他良性病变，因此，若将p16检测与宫颈TCT检查相结合，可用于判断患者宫颈病变的程度及预后。

CK17目前主要用于宫颈鳞癌的诊断，CK17的表达会随着宫颈病变的进展逐渐增高。它在宫颈早期鳞癌组织和CIN中表达率逐渐升高，在宫颈鳞癌中显著表达，表达部位主要是瘤栓和浸润的前沿部位，它在腺上皮细胞、成熟鳞化细胞中不表达[5]，而在不成熟鳞化细胞中呈阳性表达[6-8]。多数研究认为，CK17可作为高级别宫颈癌和CIN预测及诊断病变发展方向的标志物[9-10]。CK17表达的阳性率及强度随CIN级别增高而逐渐增高。周满红[11]的实验指出，CIN中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级的阳性表达率分别为14.3%、52.9%、68.2%，CIN III组CK17表达的阳性率明显高于CINⅠ组。

宫颈不成熟鳞化是一种描述性诊断，在组织学诊断中有时也易与CIN病变混淆，在TCT细胞学中更易造成过诊断或诊断不明，而p16、CK17的联合检测，在一定程度上可有助于区分这两种病变，指导临床作出正确的处理。

TCT技术比组织活检更适合宫颈病变的筛查工作，提高了宫颈癌的检出率，降低了病死率，但由于取材、制片及判读主观性等多方面存在不足之处，如出现假阴性、假阳性的结果及该检测本身具有不可重复性。行TCT检查后剩余的细胞可用于制作细胞蜡块，目前运用较成熟的细胞蜡块技术可最大程度地富集细胞量，使细胞形态完整、结构清晰，且可长期保存，重复切片进行相关实验室检查如免疫组化标记等，并可有效防止脱片，提高实验的准确性[12]。本实验发现，p16、CK17在ASC-US病例的细胞蜡块和组织活检标本中的表达是一致的，因此临床上可以选择使用细胞蜡块检查代替组织活检，既方便、经济，又能避免创伤。

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安吉县科技计划项目（201421）