香菇多糖对结肠癌化疗患者免疫功能及外周血中炎症因子水平的影响

万盟++朱余兵+++邱润泽+++田星+++朱庆贵

[摘要] 目的 探究香菇多糖聯用化疗药物对中晚期结肠癌患者免疫功能及外周血中炎症因子水平的影响。 方法 选取2014年1月～2016年8月南京医科大学附属南京医院收治的68例中晚期结肠癌患者作为研究对象，将其随机分为对照组（34例）和治疗组（34例）。对照组单用FOLFIRI化疗方案，治疗组给予FOLFIRI化疗方案联用香菇多糖。治疗后收集患者外周血浆，采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测转化生长因子-β（TGF-β）、白细胞介素-17（IL-17）、白细胞介素-6（IL-6）与肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的水平，同时采用流式细胞技术检测外周血中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平，并评价两组不良反应。 结果 化疗后，治疗组TNF-α、TGF-β、IL-17和IL-6水平均较化疗前显著下降（P < 0.05），且治疗组化疗后TNF-α、TGF-β、IL-17和IL-6水平均显著低于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。化疗后，治疗组CD3+、CD4+水平较化疗前显著上升（P < 0.05），且治疗组化疗后外周血中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值均显著高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。治疗组总的不良反应发生率低于对照组，且在白细胞降低、血红蛋白降低、恶心呕吐、腹泻、便秘等方面的不良反应发生例数均少于对照组，但差异均无统计学意义（P > 0.05）。 结论 香菇多糖与化疗药物联用有降低中晚期结肠癌患者外周血中细胞因子IL-17、TGF-β、IL-6与TNF-α水平的作用，能够在一定程度上抑制肿瘤浸润，阻止肿瘤恶化和转移，减少化疗不良反应的发生率，同时提高结肠癌患者机体的免疫功能，对中晚期结肠癌患者的化疗辅助治疗有积极的临床意义。

[关键词] 香菇多糖；结肠癌；FOLFIRI；免疫功能

[中图分类号] R735.35 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）04（c）-0159-04

[Abstract] Objective To investigate the influence of lentinan combined with chemotherapeutics on the immune function and the levels of inflammatory factors in peripheral blood of patients with middle and advanced stage of colon cancer. Methods Sixty-eight cases of patients with middle and advanced stage of colon cancer admitted to Nanjing Hospital Affiliated to Nanjing Medical University from January 2014 to August 2016 were selected as research objects， and they were randomly divided into control group （34 cases） and treatment group （34 cases）. The control group was only given FOLFIRI chemotherapy regimens， the treatment group was given lentinan combined with FOLFIRI chemotherapy regimens. After treatment， the peripheral plasma of patients was collected. The enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） was used to detect the levels of transforming growth factor-β （TGF-β）， interleukin-17 （IL-17）， interleukin-6 （IL-6） and tumor necrosis factor-α （TNF-α）， and the flow cytometry was used to detect the levels of CD3+， CD4+， CD8+， CD4+/CD8+ in peripheral blood， the adverse reactions of the two groups were evaluated. Results After chemotherapy， the levels of TNF-α， TGF-β， IL-17 and IL-6 in the treatment group were significantly lower than those before chemotherapy （P < 0.05）， and the levels of TNF-α， TGF-β， IL-17 and IL-6 in the treatment group after chemotherapy were all lower than those of control group， the differences were all statistically significant （P < 0.05）. After chemotherapy， the levels of CD3+， CD4+ in the treatment group were all significantly higher than those before chemotherapy （P < 0.05）， and the levels of CD3+， CD4+， CD4+/CD8+ in peripheral blood in the treatment group after chemotherapy were all higher than those of control group， the differences were all statistically significant （P < 0.05）. The total incidence of adverse reactions in the treatment group was lower than that of control group， and the cases of adverse reactions in the aspects of decrease of leukocyte， decrease of hemoglobin， nausea and vomiting， diarrhea， constipation were all lower than those of control group， but there were no statistically significant differences （P > 0.05）. Conclusion Combined application of lentinan with chemotherapeutics has the function of decreasing the levels of IL-17， TGF-β， IL-6 and TNF-α in peripheral blood of patients with middle and advanced stage of colon cancer， which can inhibit tumor infiltration to a certain degree， stop the deterioration and transfer of tumour， reduce the incidence of adverse reactions of chemotherapy， and improve the immune function of patients with colon cancer at the time， it has positive clinical significance for the adjuvant chemotherapy of patients with middle and advanced stage of colon cancer.

[Key words] Lentinan； Colon cancer； FOLFIRI； Immune function

结肠癌的发病率日益上升，是全球癌症中导致死亡的最主要因素之一，其病死率非常高，侵袭和转移是其生物学特征。目前对于中晚期患者多采用化疗方案治疗，但单用化疗药物对患者的免疫系统造成极大负担，且复发率高，为治疗带来了很大困难。香菇多糖（lentinan，LNT）是从人工培养的伞形科真菌香菇子实体中提取的葡聚糖，为一种临床常用的恶性肿瘤辅助用药[1]。越来越多的研究表明，LNT作为宿主免疫增强剂（host defense potentiator，HDP）能够刺激机体多种免疫细胞、因子生长，对于改善癌症预后、延缓患者生存时间有着重大意义[2]。本研究采用FOLFIRI化疗方案联合LNT治疗结肠癌患者，观察联用后对患者外周血中转化生长因子-β（TGF-β）、白细胞介素-17（IL-17）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平、机体免疫功能以及化疗不良反应的影响，阐明LNT对采用FOLFIRI化疗方案治疗结肠癌的积极意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集南京医科大学附属南京医院2014年1月～2016年8月肿瘤内科中晚期结肠癌住院患者共68例（符合《中国常见恶性肿瘤诊治规范》病理诊断为Ⅲ、Ⅳ期结肠癌患者）。入组标准：①入组患者均有影像学（CT或MRI）可评估客观疗效的肿瘤病灶，CT检查病灶≥1 cm；②1个月内未经放疗或化疗治疗的患者；③功能状况评分（KPS）均≥70分；④预计生存期≥3个月。排除标准：①妊娠或哺乳期女性，过敏体质；②治疗期间患者依从性差，临床资料不完全者；③严重慢性胃肠道疾病者，肠梗阻或不完全性肠梗阻者；④药物或其他物品滥用者；⑤急性心、脑血管疾病者或合并严重感染者。入组的患者随机分为对照组和治疗组，各34例。两组性别、年龄、病情等方面差异均无统计学意义（P > 0.05），具有可比性，见表1。所有患者均已签署知情同意。

1.2 药物及试剂

注射用香菇多糖（南京绿叶思科药业有限公司，批号16060308）；盐酸伊替立康（江苏恒瑞医药股份有限公司，批号16072615）；亚叶酸钙注射液（江苏恒瑞医药股份有限公司，批号16082235）；氟尿嘧啶针（天津金耀氨基酸有限公司，批号1606271）。人IL-17酶联免疫吸附测定（ELISA）检测试剂盒（由上海朗顿生物技术有限公司提供，规格：96T，货号：BPE10082）；人TGF-β ELISA检测试剂盒（由上海朗顿生物技术有限公司提供，规格：96T，货号：BPE10113）；人IL-6 ELISA检测试剂盒（由南京森贝伽生物科技有限公司提供，规格：96T，货号：SBJ-H0465）；人TNF-α ELISA检测试剂盒（由南京森贝伽生物科技有限公司提供，规格：96T，货号：SBJ-R0040）。

1.3 主要仪器

流式细胞仪（Epics-XL，美国Beckman Couler公司）；酶标仪（SpectraMaxRL，由上海美谷分子仪器有限公司提供）；离心机（H1850R台式高速冷冻离心机，由湖南湘仪实验室仪器开发有限公司提供）；移液枪（由北京大龙兴创实验仪器有限公司提供）；恒温孵育箱（由上海五相仪器仪表有限公司提供）；立式超低温保存箱（由青岛海尔特种电器有限公司提供）；枸橼酸钠抗凝管（由上海运势佳医疗器械有限公司提供，规格：1.5～2.0 mL）。

1.4 方法

两组患者均采用FOLFIRI化疗方案：对照组第1天给予伊立替康180 mg/m2，持续静脉滴注2 h；第1、2天给予四氢叶酸钙400 mg/m2，静脉滴注2 h；第1天静脉推注氟尿嘧啶400 mg/m2；第2天给予氟尿嘧啶2400 mg/m2，经化疗泵持续滴注46 h。治疗组患者于化疗开始前先行静脉滴注香菇多糖注射液，1次/d，连用5 d。每2周重复，2周为1个疗程，3个疗程后考查两组的临床疗效，收集患者外周血样，抗凝离心吸取血浆后用于检测。化疗期间发生不良反应填写不良反应登记表。

1.4.1 患者血浆中TGF-β、IL-17、IL-6、TNF-α水平的檢测 血浆采用ELISA法测定TGF-β、IL-17、IL-6、TNF-α的水平，记录吸光度值，并计算结果。

1.4.2 免疫功能的检测 采集空腹静脉血，枸橼酸钠抗凝，送流式细胞仪检测CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平。

1.5 统计学方法

采用SPSS 15.0统计学分析软件分析检测结果，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，行t检验，计数资料采用频率描述，行χ2检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 香菇多糖对结肠癌患者外周血中TNF-α、TGF-β、IL-17、IL-6水平的影响

化疗后，治疗组TNF-α、TGF-β、IL-17和IL-6水平均较化疗前显著下降，差异有统计学意义（P < 0.05），对照组各因子也同样出现下降，但仅有TGF-β水平化疗前后差异有统计学意义（P < 0.05）。与对照组化疗后比较，治疗组TNF-α、TGF-β、IL-17和IL-6水平均显著下降，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表2。

2.2 香菇多糖对结肠癌患者外周血中T细胞亚群水平的影响

化疗后，治疗组CD3+、CD4+水平较化疗前显著上升，差异有统计学意义（P < 0.05），对照组出现一定程度下降，但差异无统计学意义（P > 0.05）。化疗后，治疗组外周血中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值均显著高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表3。

2.3 香菇多糖对晚期结肠癌患者化疗不良反应的影响

治疗组在白细胞降低、血红蛋白降低、恶心呕吐、腹泻、便秘等方面的不良反应发生例数均少于对照组，治疗组总的不良反应发生率也低于对照组，但是差异均无统计学意义（P > 0.05）。见表4。

3 讨论

恶性肿瘤是临床常见病、多发病。对于中晚期结肠癌患者的治疗，目前仍以化疗为主进行治疗。对于结肠癌患者而言，绝大部分患者都需要接受化療来控制体内的微小病灶[3]，是治疗中晚期结直肠癌的重要手段之一[4]。FOLFIRI方案是中晚期结肠癌常用的一线治疗方案。有研究报道[5]，FOLFIRI方案对中晚期结肠癌的治疗有效率高达40%以上。但是有效果的同时，FOLFIRI方案也会引起一系列的不良反应，诸如恶心呕吐、骨髓抑制、迟发性腹泻等，部分患者常因不能顺利完成疗程而影响疗效。同时化疗的不良反应降低了患者的生存质量，甚至严重地影响患者正常的免疫功能[6]。近年来，有研究表明，在肿瘤的治疗过程中，杀伤肿瘤细胞和保护机体的免疫状态具有同等重要的意义[7]。

LNT是一种能提高免疫功能的生物调节剂，在我国已被广泛用于治疗胃肠道肿瘤[8]。LNT是一种宿主防卫增强剂，它能恢复或加强宿主对淋巴细胞、激素及其他生物活性因子的反应，通过刺激免疫活性细胞的成熟、分化和繁殖，使机体的淋巴细胞大量增加，从而提高机体的免疫功能。LNT还可激活补体系统的经典途径或变更途径，增加中性白细胞对肿瘤细胞的浸润，促使宿主尽快恢复因癌症及感染而引起的体内平衡失调状态[9]。临床资料表明香菇多糖与化疗并用可起到增效作用，可在一定程度上提高癌症患者临床疗效[10]。以往研究发现[11]，结肠癌时机体的CD3+、CD4+普遍下降和CD8+上升导致免疫功能下降。本研究发现LNT作为一种胸腺依赖型T细胞导向免疫佐剂。它通过识别巨噬细胞，释放T细胞辅助因子，增强巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬率。本研究显示结肠癌患者在使用LNT后，CD8+百分率下降，CD4+/CD8+比值上升，从而增强患者机体免疫功能，调整化疗药物作用后异常的免疫系统状态，对提高化疗方案的效率具有积极的临床意义。

炎症因子的水平与肿瘤的发展也密切相关，炎症因子有多种可以致癌的机制，这包括诱导基因突变、促进血管生成、改变基因状态和促进细胞增殖等方面[12]。IL-17通过与受体特异性结合，发挥促进炎症发展、免疫应答等作用，是一种促炎细胞因子[13]，其在机体免疫防御方面起着重要作用。它能诱导IL-6、IL-1β、TNF-α等炎症因子产生[14]，并激活免疫防御、补体系统。有研究发现[15]，肠、肺等黏膜表面富集了能产生IL-17的细胞，因此IL-17对黏膜的免疫防御作用尤为明显。IL-17能将淋巴细胞、DC及其他趋化蛋白靶向至黏膜表面，也能招募单核细胞来杀伤入侵病原体。而在肿瘤环境下，IL-17虽可通过增强免疫杀伤细胞产生抗肿瘤作用，但它对IL-6的诱导作用会活化Stat3途径，促进肿瘤血管生长，加重肿瘤病情的进展[16-17]。由于TGF-β在环境刺激下对IL-17有着强大的促分泌作用，它在免疫防御与肿瘤生长方面也有着显著的临床意义。TGF-β对肿瘤的影响有双向性[18]，一方面在肿瘤早期，它通过信号通路核心组件的缺失或突变对肿瘤组织有抑制作用；另一方面，肿瘤细胞对TGF-β诱导的抑制信号失活会刺激肿瘤血管的生成。TNF-α在体外是诱导肿瘤细胞凋亡的重要因子，但在体内的主要作用并不是杀伤肿瘤，而是作为炎性因子促进肿瘤的发展[19]。结肠癌患者体内TNF-α水平的高表达，其原因可能是癌症刺激机体免疫系统，引起患者淋巴细胞产生TNF-α水平升高，这些说明了TNF-α与结肠癌具有高度相关性[20]。IL-6可在早期促进癌变细胞的增殖以及肿瘤细胞的生长，刺激结肠癌细胞的增殖，同时与TNF-α、IL-17共同作用，活化Stat3与核转录因子NF-κB的途径[21]，促进结肠癌细胞的存活，抵抗外界诱导的凋亡。

王梦洁等[22]对30例正常人、59例接受手术治疗且无转移的结直肠癌患者和44例术后转移患者研究。外周血测定结果显示：术后转移患者组IL-17与TGF-β水平显著高于无转移和对照组患者，手术无转移组的患者IL-17水平显著高于正常人，而TGF-β水平无显著差异。房慧等[23]将110例接受手术治疗的结直肠癌患者按是否发生转移分为两组，另选了健康对照组50例，测定3组外周血中IL-17与TGF-β水平，其中未转移组术前术后也各测1次。结果与王梦洁等[23]的实验一致。以上证据表明，在结直肠癌患者外周血中，IL-17表达水平的测定可以作为肿瘤的浸润及恶性程度指标，而TGF-β可能与转移趋势相关。临床研究显示，结肠癌患者外周血IL-6的水平显著高于正常人，并且肿瘤恶性程度与细胞因子水平呈现相关性[24]。本研究中采用FOLFIRI化疗方案合用LNT后，可以观察到LNT降低外周血中IL-17与TGF-β的水平，进而降低结肠癌患者肿瘤细胞的恶性程度以及转移程度。同时，在LNT的干预下，与肿瘤增殖相关的TNF-α与IL-6水平，在外周血中表达也明显降低，改善结肠癌患者体内异常的细胞因子水平。在化疗同时，由于LNT的干预，白细胞降低、血红蛋白降低、恶心呕吐、腹泻、便秘等不良反应的发生也在减少。

综上所述，对中晚期结肠癌患者，尤其是免疫功能低下的人群，应用FOLFIRI化疗方案同时给予香菇多糖，可以调节机体炎症因子水平，改善免疫功能，减少化疗不良反应，提高患者的化疗耐受性和生活质量，值得临床推广应用，但其改善肿瘤患者的远期生存的效果尚待进一步研究。

[参考文献]

[1] 王小红，余新民，沈祝苹.香菇多糖联合化疗对晚期结肠癌患者的临床疗效[J].中国医药导报，2014，11（17）：65-69.

[2] 赵林.香菇多糖联合化疗对肺癌患者免疫功能影响的研究[J].中国实用医药，2014，9（11）：151-152.

[3] Carrillo JA，Munoz CA. Alternative chemotherapeutic agents：nitrosoureas，cisplatin，irinotecan [J]. Neurosurg Clin N Am，2012，23（2）：297-306.

[4] Xiao J，Tan Y，Li W，et al. Tumor volume reduction rate is superior to RECIST for predicting the pathological response of rectal cancer treated with neoadjuvant chemoradiation：Results from a prospective study [J]. Oncol Lett，2015，9（6）：2680-2686.

[5] Kim DY，Paek TY，Oh SY，et al. Pretreatment selection of regimen according to genetic analysis improves the efficacy of chemotherapy in the first line treatment of metastatic colorectal cancer [J]. J Surg Oncol，2014，109（3）：250-254.

[6] 張明，谢可，安宁.艾迪注射液联合FOLFIRI方案治疗晚期结直肠癌患者的疗效研究[J].四川医学，2016，37（9）：957-959.

[7] Ghiringhelli F，Apetoh L. The interplay between the immune system and chemotherapy：emerging methods for optimizing therapy [J]. Expert Rev Clin Immunol，2014，10（1）：19-30.

[8] 翟艳.晚期结肠癌患者应用香菇多糖与化疗治疗的临床效果观察[J].中国实用医药，2015，10（8）：26-27.

[9] 李六文，赵刚.药用真菌多糖抗肿瘤免疫生物活性研究进展[J].中华肿瘤防治杂志，2015，22（14）：1156-1160.

[10] 龙进，涂文升.香菇多糖注射液在肿瘤治疗中的配伍应用[J].中国现代药物应用，2016，10（8）：270-271.

[11] 黎莹.高龄结肠癌患者化疗后细胞免疫功能的变化[J].中国肿瘤临床与康复，2012，19（6）：487-489.

[12] 黄宁.炎症因子与肿瘤[J].中国民族民间医药，2010，19（9）：87-89.

[13] 戴小波，孙万邦.IL-17免疫调节作用的研究进展[J].检验医学与临床，2011，86（3）：32-35.

[14] 施沛青，朱书，钱友存.IL-17的信号传导及功能研究[J].中国细胞生物学学报，2011，33（4）：345-357.

[15] Acosta-Rodriguez EV，Rivino L，Geginat J，et al. Surface phenotype and antigenic specificity of human interleukin 17-producing T helper memory cells [J]. Nat Immunol，2007，8（6）：639-646.

[16] 张晓鹏，王小忠，彭启全，等.血清IL-17在结直肠癌中的表达及临床意义[J].中国现代医药杂志，2014，16（4）：36-39.

[17] 王建升，吕元鹏，孟军涛，等.IL-23和IL-17在结直肠癌患者中的表达及意义[J].中国肿瘤临床，2014，41（9）：580-584.

[18] 刘贤伟，曹俊达，熊功友，等.TGF-β1、Smad7与树突状细胞在结直肠癌肝转移中作用的初步研究[J].中国普通外科杂志，2015，24（1）：63-69.

[19] 王东辉，李冬梅，马洪喜.不同类型音乐对结肠癌术后患者血清IL-6、IL-8、TNF-α及T淋巴细胞亚群的影响[J].中国老年学杂志2014，34（9）：2329-2331.

[20] Venetsanou K，Kaldis V，Kouzanidis N，et al. Measurement of tumour necrosis factor receptors for immune response in colon cancer patients [J]. Clin Exp Med，2012，12（4）：225-231.

[21] De Simone V，Franzè E，Ronchetti G，et al. Th17-type cytokines，IL-6 and TNF-α synergistically activate STAT3 and NF-κB to promote colorectal cancer cell growth [J]. Oncogene，2015，34（27）：3493-503.

[22] 王梦洁，孙苏平，钱科卿，等.结直肠癌患者血清IL-17和TGF-β浓度及其相关性的初步研究[J].中国肿瘤临床，2013，40（13）：767-778.

[23] 房慧，郭晓川，白莉，等.IL-17和TGF-β1在结直肠癌中的表达及临床意义[J].中国临床研究，2015，28（6）：734-736.

[24] 廖德贵，王珊，周春辉，等.IL-6和TNF-α在结肠癌患者血清中的测定及其意义[J].中国医学创新，2015，12（32）：12-15.

（收稿日期：2016-11-09 本文编辑：张瑜杰）