单剂量艾迪注射液对大鼠体内多西他赛药动学参数影响

许 健 刘 雁 邢亚群 陈卫东

(1.安徽中医药大学，安徽 合肥 230012；2. 蚌埠医学院第一附属医院，安徽 蚌埠 233000；3. 蚌埠医学院第二附属医院，安徽 蚌埠 233000)

单剂量艾迪注射液对大鼠体内多西他赛药动学参数影响

许 健1刘 雁2邢亚群3陈卫东1

(1.安徽中医药大学，安徽 合肥 230012；2. 蚌埠医学院第一附属医院，安徽 蚌埠 233000；3. 蚌埠医学院第二附属医院，安徽 蚌埠 233000)

目的 研究单剂量艾迪注射液对多西他赛在大鼠体内药动学参数影响，以期为两药在临床的合理使用提供理论依据。 方法 选取SD大鼠24只，雌雄各半，体重180～220 g，随机分为四组，其中实验组分别给予高、中、低剂量艾迪注射液后间隔10 min给予多西他赛，对照组直接给予多西他赛，分别于给药后2 min、5 min、10 min、20 min、30 min、60 min、120 min、240 min、480 min、600 min分别自大鼠眼眦取血0.4 ml，UPLC-UV测定血药浓度，winnonlin软件计算药动学参数，SPSS软件对结果进行统计学分析。结果 高剂量组的t1/2为(0.31±0.05)h，对照组为(0.19±0.07)h，显著延长(P<0.05)；中剂量组的Cmax为6.01±1.92 mg/L，对照组为(15.9±8.9)mg/L，明显降低(P<0.05)，其余各组参数变化无显著性差异。 结论 单剂量艾迪注射液对多西他赛在大鼠体内药动学参数无显著性影响。

艾迪注射液；多西他赛；药动学参数

肿瘤目前已经成为影响人类健康最重要的因素之一[1]，我国恶性肿瘤发病率高于世界人口标化发病率,累积发病率已达20%左右[2]。目前对于恶性肿瘤最重要的治疗方式仍然为药物化疗，为了提高治疗有效率，临床上经常出现联合用药情况，并且各种肿瘤治疗指南也推荐联合用药方案，然而在取得良好治疗效果的同时，也可能由于联合用药使药物原本的药动学行为产生了变化，进而产生与治疗效果无关的不良反应，影响治疗效果，甚至导致患者死亡。

多西他赛(Docetaxel，DTX)属于紫杉类抗肿瘤药，是从紫杉中提取半合成的紫杉醇的衍生物，其加强了微管蛋白聚合作用和抑制微管解聚作用，导致形成稳定的非功能性微管束，因而破坏肿瘤细胞的有丝分裂[3]，从而发挥抗肿瘤作用。多西他赛说明书推荐其主要用于非小细胞肺癌和乳腺癌，但国内外相关指南及相关文献也推荐其用于胃癌、食管癌、卵巢癌、鼻咽癌、膀胱癌和肝癌等恶性肿瘤[4-8]的治疗。由于多西他赛具有广泛的适应症及良好的化疗效果，已经成为了目前恶性肿瘤化疗中的基石性药物，但在多西他赛单用或与其他化疗药物联合使用时，其不良反应造成的后果也往往会降低患者的顺应性，影响治疗效果甚至产生毒性。

艾迪注射液为我国原研药，以传统中医理论为指导思想，选用斑蝥为君药，佐以黄芪、人参和刺五加入药，其主要功用为清热解毒，消瘀散结，用于原发性肝癌，肺癌，直肠癌，恶性淋巴瘤，妇科恶性肿瘤等。艾迪注射液具有一定的抗肿瘤活性，与其他抗肿瘤药物合用后还可以达到增强细胞免疫和增效减毒[9-11]的作用。多西他赛与艾迪注射液在适应症覆盖方面具有较大的交集，具有联合用药的可能，在非小细胞肺癌的治疗上目前已有联合用药报道，不仅提高了治疗总有效率、减少了多西他赛的毒性反应，同时还提高了化疗顺应性和远期生存率[12-13]。然而，艾迪注射液与多西他赛联合用药的药动学研究目前还未见报道。本部分研究拟设计单剂量艾迪注射液对多西他赛在大鼠体内药动学参数影响实验，探究艾迪注射液对多西他赛药动学参数有无影响，以期为临床合理用药提供理论支持。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Agilent-1290 超高效液相色谱仪，美国安捷伦公司；AB135-S 型十万分之一电子天平，德国 METTLER TOLEDO；XW-80A微型涡旋混合仪，上海沪西分析仪器厂有限公司；KQ-300B型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；TG16-WS台式高速离心机，长沙湘仪离心机仪器有限公司；LC-4016型低速离心机，安徽中科中佳科学仪器有限公司；DW-86L388A 立式超低温保存箱，青岛海尔特种电器有限公司；BCD-225CHC冰箱，合肥美菱股份有限公司；Milli-Q Gradient A10超纯水系统，密理博(上海)贸易有限公司。

1.2 材料

多西他赛标准品(纯度99.3%，批号100666-200401)，中国食品药品检定研究院；多西他赛注射液(批号:批号5030021TB；40 mg)，齐鲁制药有限公司；紫杉醇标准品(纯度99.6%，批号100382-201102)，中国食品药品检定研究院；艾迪注射液(批号：20160824；10 ml×5支)，贵州益佰制药股份有限公司；甲醇(色谱纯)，上海星可高纯溶剂有限公司；超纯水(18.2 Ω)，Milli-Q超纯水机制备。

表1 高、中、低剂量组和对照组的多西他赛药动学参数

注：*与对照组相比P<0.05。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Hypersll BDSC18(2.1×100 mm，3μm)。检测波长：230 nm。流动相：甲醇∶水(55∶45，V/V)，流速为0.4 ml/min，柱温箱设置温度为30 ℃，进样量：10 μl。

2.2 溶液配制

精密称取多西他赛标准品1 mg置于10 ml的棕色容量瓶中，用甲醇溶解并将其定容至刻度，摇匀得100 μg·ml-1的多西他赛储备液，置于4 ℃冰箱储备留用。精密称取紫杉醇对照品1.0 mg于10 ml棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀得到100 μg·ml-1紫杉醇储备液，置于4 ℃冰箱储备留用。

2.3 样品预处理

取大鼠血浆100 μl 置于肝素化的1.5 ml离心管中，加入15 μl紫杉醇内标溶液(100 μg/ml)后再加入300 μl 甲醇以沉淀蛋白，置于涡旋振荡器上混匀3 min，14000 r·min-1高速离心10 min，精密吸取上清液200 μl，过0. 22 μm 微孔滤膜，待进样。

2.4 专属性考察

取大鼠空白血浆样本，大鼠空白血浆+多西他赛对照品样本，大鼠空白血浆+紫杉醇样本，大鼠空白血浆添加多西他赛+紫杉醇样本，及大鼠尾静脉注射多西他赛后5 min血浆样本，色谱图见图1。多西他赛和内标紫杉醇的保留时间分别为10.52 min和7.81 min左右, 血浆中的内源性物质不干扰测定。

2.5 标准曲线及定量下限

精密吸取“2.2”项下的多西他赛对照品储备液，用甲醇逐级稀释配制成质量浓度为10 μg·ml-1、5 μg·ml-1、2 μg·ml-1、1 μg·ml-1、0.5 μg·ml-1、0.2 μg·ml-1、0.1 μg·ml-1、0.05 μg·ml-1的多西他赛工作液并按照“2.3”项下的血浆样品预处理方法进行处理，按“2.1”项色谱条件下进样，以大鼠血浆中待测物药物质量浓度X(mg·L-1)对待测药物与内标的峰面积比值Y做回归方程为Y=0.096X+0.0051，R2=0. 9998。结果表明DTX在0. 05～10 μg·ml-1线性关系良好，大鼠血浆中DTX的定量下限(S/N = 10)为0. 05 μg·ml-1。

2.6 精密度试验

精密量取多西他赛对照液，配制成低、中、高三个浓度(0.05 μg·ml-1、0.5 μg·ml-1、和10 μg·ml-1)的质控样品，分别按照“2.1”项色谱条件进样分析。每个浓度平行配制5份样品，连续测定3d，记录下多西他赛和紫杉醇的峰面积，以当日随行标曲计算日内和日间精密度。结果表明日内精密度低、中、高质量浓度的RSD 分别为6.7%、8.8%、2.8%，日间精密度低、中、高浓度的RSD 分别为13%、11%、9. 4%。

自上至下依次为A、B、C、D、E图1 A:空白血浆；B空白血浆+多西他赛；C:空白血浆+紫杉醇；D:空白血浆+多西他赛+紫杉醇；E:尾静脉注射多西他赛后血浆样本

2.7 回收率测定

精密量取多西他赛标准溶液，配制成低、中、高三种质量浓度的生物样本(0.05 μg·ml-1、0.5 μg·ml-1、和10 μg·ml-1)，每个质量浓度均平行配制5个样本，且按“2.3”项下的血浆样品预处理方法进行样品处理，依据“2.1”项的色谱条件，进样分析，测得C1，另取大鼠空白血浆100 μl加入300 μl 甲醇沉淀蛋白后，再加入相应浓度DTX对照品溶液，涡旋混匀，离心后取上清液过0. 22 μm 滤膜待进样，每个浓度平行配制6 份，依次进样测得C2。以C1除以C2，得到大鼠血浆中DTX提取回收率。结果表明低、中、高质量浓度提取回收率分别为( 86. 17±4. 72)%、(90. 63±2. 49)%、(94. 04±2. 23)%。

2.8 稳定性试验

按2. 6项下方法制备并处理得低、中、高质量浓度的样本(0.05 μg·ml-1、0.5 μg·ml-1、和10 μg·ml-1)，每个浓度平行配制6 份，分别于血浆样本在室温放置12 h，反复冻融3 次，-20 ℃放置1 周后依次进样测定。结果表明低质量浓度RSD <8%，中、高质量浓度、RSD 均<5%。表明血浆样本中待测物稳定。

2.9 药动学研究

取SD 大鼠24只，雌雄各半，体重为(200±20)g，随机分为对照组和低、中、高剂量组。对照组只给予多西他赛, 低(5 ml/kg)、中(10 ml/kg)、高(20 ml/kg)剂量组分别给予艾迪注射液10 min后给予多西他赛。大鼠给药前禁食10 h, 给药后1 h解除禁食。试验期间大鼠自由饮水。各组分别于注射DTX溶液后2 min、5 min、10 min、20 min、30 min、60 min、120 min、240 min、480 min和600 min 从大鼠眼框静脉丛取血0. 4 ml，置于涂有肝素的离心管中，低速离心(3000 r·min-1)10 min后取上层血浆，按2. 3项下方法处理后，进样分析，得到DTX峰面积代入当日随行标曲计算浓度。各组的平均血药浓度-时间曲线见图2，由图可知各组的血药浓度。

采用winnonlin 软件计算DTX的药动学参数，见表1。结果采用SPSS 17. 0 软件进行统计学检验，采用Students' t-test。结果表明，只有中剂量组的Cmax和高剂量组的t1/2与对照组相比具有显著性差异(P<0.05),其余各组的其他药动学参数与对照组相比均无显著性差异。

图2 高、中、低剂量组和对照组的多西他赛血药浓度—时间曲线(n=6)

3 讨 论

多西他赛为抗肿瘤基础药物，组成多个化疗方案，广泛用于恶性肿瘤的治疗，疗效确切。艾迪注射液为中药复方制剂，对于特定肿瘤具有一定的抗癌活性，但其更多地被用作抗肿瘤辅助用药，在与化疗方案合用时，通过提高机体免疫，增强化疗疗效，降低其毒副反应，提高了患者化疗的顺应性并且提高了肿瘤患者的生活质量。多西他赛的药动学研究较多，主要经过CYP3A4(对应大鼠CYP3A1)酶进行代谢[14]，艾迪注射液的药动学研究较少，但有研究证实临床等效剂量的艾迪注射液在体外对CYP3A4具有弱抑制作用[15],两者联用可能会发生药动学相互作用，影响疗效，但目前关于两药联用后是否会发生相互作用还未见报道，无法预测联用的安全性。

试验结果显示实验组的药动学参数除高剂量组的t1/2和中剂量组的Cmax与对照组相比具有显著性差异，其余各参数的变化均无统计学意义，其中高剂量组的t1/2和中剂量组的Cmax显著大于对照组。t1/2为药物的消除半衰期，表示血药浓度下降一半所需的时间，该参数直观反映了药物从体内的消除速度。多西他赛为细胞周期性抗肿瘤药，作用较慢，具有时间依赖性，高剂量组的t1/2大于对照组，提示可能要延长多西他赛的给药间隔。

Cmax为药峰浓度，表示药物在体内给药后出现的血药浓度最高值，该参数是反映药物在体内吸收速率和吸收程度的重要指标。骨髓抑制、中性粒细胞减少是多西他赛最常见的不良反应之一[16-17]，并且呈剂量依赖性，结果显示中剂量组的Cmax显著大于对照组，提示中剂量(临床最大等效剂量)艾迪注射液的使用可能会增加骨髓抑制的风险，建议降低多西他赛的给药剂量。

综上所述，单剂量艾迪注射液对多西他赛药动学参数影响不大，没有显著性药动学相互作用，但在临床使用时，艾迪注射液推荐使用低剂量。

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Pharmacokinetics parameters of docetaxel in rats after single injected with Aidi injection

XU Jian1LIU Jian2XING Ya-qun3CHEN Wei-dong1

(1.Anhui University of Chinese Medicine, Anhui 230012,China; 2.The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College, Bengbu 233000,China;3.The Second Affiliated Hospital of Bengbu Medical College,Bengbu 233000,China )

Objective: For offering theoretical foundation in docetaxel combined with Aidi injection,the variation of pharmacokinetics parameters of docetaxel in rats after sigle injected with Aidi injection was investigated.Methods:Twenty-four SD rats were randomly divided into four groups: the high-dose group、the medium-dose group、the low-dose group and the blank group,sex in half and weighing 180～220 g.The rats in the experimental group were given docetaxel at 10 min intervals after high, medium and low dose Aidi injection, and the control group was given docetaxel directly.Blood samples were taken from the rat eyes at 0, 5, 10, 20, 30, 60, 120, 240, 480 and 600 min after administration respectively. UPLC-UV was used to determine the plasma concentration. The pharmacokinetic parameters were calculated by winnonlin software , Spss software for statistical analysis of the results.Results:The t1/2 of the high dose group was (0.31±0.05)h, while the control group was( 0.19± 0.07)h, the high dose group is significantly higher than the control group(P<0.05); The Cmax of the medium dose group was (6.01±1.92)mg/L and the control group was (15.9±8.9)mg/L , medium dose group is significantly lower than the control group(P<0.05); there was no significant difference in the parameters of the other groups.Conclusion: Pharmacokinetics parameters of docetaxel in rats after single injected with Aidi injection had no significant effect .

Aidi injection docetaxel； Pharmacokinetics； parameters

安徽省教育厅一般项目(KJ2015B067by)。

许健(1989—)，男，安徽凤阳人，药师，本科，主要从事临床药师工作。

陈卫东，教授，主任药师，E-mail:anzhongdong@126.com。

R965

A

1004-7115(2017)04-369-04

10.3969/j.issn.1004-7115.2017.04.003

2017-01-13)