p28GANK在食管胃交界部癌中的表达研究

许洪宝 潘杰 汪伟民 蔡炜龙 韩春蕃

p28GANK在食管胃交界部癌中的表达研究

许洪宝 潘杰 汪伟民 蔡炜龙 韩春蕃

目的 探讨p28GANK在食管胃交界部(EGJ)癌中表达的临床意义。 方法 选取66例患者手术切除的EGJ癌及对应切缘癌旁组织标本，采用HE染色进行组织病理学观察，免疫组化染色检测p28GANK在EGJ癌及癌旁组织中的表达，对结果进行分析。 结果 鳞状细胞癌、腺癌分别占19.7%（13/66）、80.3%（53/66）；肿瘤组织侵犯淋巴管或血管的占28.2%（19/66）；肿瘤淋巴结转移的占45.5%（30/66）。p28GANK在鳞状细胞癌与腺癌中的阳性表达率比较差异无统计学意义（P＞0.05）；p28GANK在EGJ癌组织中的阳性表达率明显高于其在对应癌旁组织中的阳性表达率（P＜0.05）；p28GANK在EGJ癌中阳性表达与肿瘤淋巴结转移及较晚的TNM分期有关（P＜0.05）。 结论 p28GANK在EGJ癌中高表达，可能是EGJ癌重要的分子标志物。

食管胃交界癌 p28GANK 病理分析 临床意义

食管胃交界部（esophagogastric junction，EGJ）癌为食管胃交界处黏膜发生癌变，有其独特的生物学特点，与食管癌及胃癌不尽相同，其起源有可能是食管鳞状上皮或胃腺上皮细胞。EGJ癌发病率逐年升高，虽然在全球范围内有一定的报道[1]，但其研究报道不多，尤其是其分子标志物研究报道较少，制约了EGJ癌临床诊治水平的提高。本研究分析EGJ癌的病理特征，并应用免疫组化染色方法研究消化道肿瘤恶性进展重要分子p28GANK[2]在EGJ癌中表达的临床意义，现报道如下。

1 对象和方法

1.1 对象 选取2008年5月至2014年6月在本院普外科行手术切除治疗的EGJ癌患者66例，年龄38～74（52.6±10.2）岁。患者术前均未接受任何抗肿瘤治疗。其中42例患者因进食后有梗阻感首次就诊，24例患者因剑突下或胸骨后疼痛、烧灼感等首次就诊。患者术前均行胃镜检查，并取组织病理活检确诊EGJ癌后进行手术。手术切除标本经石蜡包埋后保存于本院病理科，对应的癌旁组织分别取自标本上切缘及下切缘。每例标本由病理科医师阅片并记录癌组织学类型、TNM分期、是否脉管侵犯及淋巴结转移等病理资料。

1.2 HE染色及免疫组化染色 将癌组织进行切片，烘烤12h后待用。HE染色由本院病理科完成，免疫组化染色方法参考文献[3]进行。切片经二甲苯（杭州永星五交化有限公司，货号1330-20-7）脱蜡、浓度梯度乙醇水化后，再经柠檬酸缓冲液中煮沸抗原修复、正常山羊血清抗原封闭30min及3%H2O2去除内源性氧化酶活性后，在切片上滴加p28GANK抗体（美国Santa Cruz公司，1∶50），室温下孵育3h后，PBS冲洗3次（每次5min）后，滴加山羊抗兔二抗（北京百奥莱博科技有限公司，货号WK364，1∶1 000），室温静置40min后，PBS冲洗3次，DAB显色（北京索莱宝科技有限公司）、苏木精（美国Sigma公司）复染及封片。

1.3 评判标准 依据肿瘤中心部位将EGJ癌分为4型[4]：Ⅰ型为肿瘤中心位于EGJ以上5cm的食管鳞状细胞癌；Ⅱ型为肿瘤中心位于EGJ以上5cm的食管腺癌；Ⅲ型为肿瘤中心位于EGJ以下5cm内累及EGJ；Ⅳ型为肿瘤中心位于EGJ以下5cm内未累及EGJ。免疫组化结果由2位病理科医师阅片后按照以下标准评判结果：细胞染色呈黄色或棕黄色的为阳性细胞，将染色强度分为无、弱、中等、强4档，分别计为0、1、2、3分；将阳性细胞比例按0%、1%～25%、26%～50%、51%～75%、76%～ 100%5档分别计为0、1、2、3、4分；两项得分之和＜3分作为p28GANK免疫组化阴性，≥3分作为p28GANK免疫组化阳性。

1.4 统计学处理 应用SPSS 19.0统计软件；计数资料以频数和构成比表示，组间比较采用χ2检验。

2 结果

2.1 病理检查结果 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型EGJ癌患者分别占19.7%（13/66）、31.8%（21/66）、48.5%（32/66）、0.00%（0/ 66）；鳞状细胞癌、腺癌患者分别占19.7%（13/66）、80.3%（53/66）；28.2%（19/66）的患者肿瘤侵犯淋巴管或血管；TNM分期Ⅰ+Ⅱ期患者占30.3%（20/66），Ⅲ+Ⅳ期患者占69.7%（46/66）；肿瘤淋巴结转移患者占45.5%（30/66）。

2.2 p28GANK在EGJ癌与癌旁组织中的表达情况比较 p28GANK在EGJ癌组织中阴性、阳性表达率分别为21.2%（14/66）、78.8%（52/66）；在上切缘癌旁组织中阴性、阳性表达率分别为93.9%（62/66）、6.1%（4/66），在下切切缘癌旁组织中阴性、阳性表达率分别为95.2%（63/66）、4.8%（3/66），无上、下切缘癌旁组织均阳性表达病例，即p28GANK在癌旁组织中阴性、阳性表达率分别为89.4%（59/66）、10.6%（7/66）。p28GANK在EGJ癌组织与癌旁组织中的阳性表达率比较差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.3 p28GANK在EGJ癌中的表达情况 p28GANK在EGJ癌中的免疫组化染色所见见图1。

图1 p 2 8 G A N K在E G J癌中的免疫组化染色所见（a：鳞状细胞癌中阳性表达；b：腺癌中阳性表达；c腺癌中阴性表达；×2 0 0）

由图1可见，p28GANK在鳞状细胞癌、腺癌的细胞核与细胞质中呈阳性表达。p28GANK在鳞状细胞癌中细胞核染色较强，其阴性、阳性表达率分别为23.1%（3/13）、76.9%（10/13）；p28GANK在腺癌细胞质阳性染色强度大于细胞核，其阴性、阳性表达率分别为20.8%（11/53）、79.2%（42/53）；p28GANK在鳞状细胞癌与腺癌中的阳性表达率比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.4 p28GANK在EGJ癌中表达的临床因素分析 见表1。

由表1可见，p28GANK在EGJ癌中的表达与患者性别、年龄、肿瘤分型、是否侵及脉管等临床因素均无关（均P＞0.05），与肿瘤淋巴结转移、TNM分期均有关（均P＜0.05），即p28GANK阳性表达与EGJ癌恶性进展程度密切相关。

3 讨论

EGJ是位于胸腔和腹腔交界处的上消化道重要解剖部位，具有抗胃内容物反流等多种重要生理功能，为食管鳞状上皮与胃柱状上皮细胞交界的地方。此处发生癌变，有可能为鳞状上皮起源，也可能为腺癌。随着内镜技术进步及普及，EGJ癌变率在欧美国家逐年升高[5]，目前有关其上皮细胞组织起源、病理特点、生物学差别、分子生物学特点及临床诊治的报道越来越多，但仍缺乏有效的生物标志物。据报道，肿瘤恶性进展重要分子p28GANK在食管鳞状上皮癌[3]、肠上皮起源的腺癌[6]等多种肿瘤中呈高表达，但其在EGJ癌中的表达及临床意义研究报道少见。

表1 p 2 8 G A N K在E G J癌中表达的临床因素分析[例（%）]

本研究纳入EGJ癌患者66例，主要以男性患者为主，可能与男性抽烟、饮酒等不良生活习惯有关，具体因素尚需进一步深入研究；病理分型上以腺癌为主，这些特点与文献报道基本一致。这一现象可能是由于胃食管反流，长期的酸刺激诱导食管黏膜上皮向肠腺上皮化生，易发生食管腺癌变。但有报道EGJ癌病理分型还包括神经内分泌瘤和未分化癌等[7]，本组患者中未见该类肿瘤。

本研究结果显示，p28GANK表达于鳞状细胞及腺细胞的细胞质与细胞核中，其在癌组织中的阳性表达率显著高于对应的癌旁组织；进一步分析发现p28GANK阳性表达与较晚的肿瘤TNM分期及淋巴结转移有关。这一结果与p28GANK在乳腺癌[8]、肝癌[9]等肿瘤中的表达情况相符，提示其为EGJ癌的重要标志物。近期的荟萃分析发现，p28GANK与肿瘤恶性进展密切相关，是较好的预后评估指标[10]。目前肿瘤生物靶向治疗是研究的热点，已经有多个分子靶向药物应用于临床，但尚未见针对p28GANK的生物靶向治疗药物。本研究进一步证实其在恶性肿瘤中高表达，可作为生物靶向治疗的关键位点。p28GANK在EGJ癌中的表达与肿瘤的复发、转移及患者预后是否有关，可作为今后研究的方向。

p28GANK作为一个消化道肿瘤中重要的分子标志物，可通过调节β-catenin/cyclinD1通路来促进结直肠癌的恶性增殖[6]；也可与MDM2结合增强其活性，降解p53，使p53下游调控肿瘤相关基因转录活性改变[11]；还可对抑癌基因pRb磷酸化，促进其核外排及降解[12]，从而导致肿瘤恶性增殖。在肝癌中，p28GANK可通过Nrf2负反馈调节抗氧化作用，促进肝癌发生[13]；在结肠癌中，其可激活TSC2来调节mTORC1信号转导通路[14]。关于p28GANK的调控机制研究较少，目前只发现非编码小RNA MiR-605可降解p28GANK，从而抑制胆管癌的恶性进展[15]。本研究结果进一步说明p28GANK对于消化道肿瘤生长、增殖、侵袭及转移的重要性，但其调控EGJ癌恶性进展的信号转导通路尚不清楚。

综上所述，p28GANK在EGJ癌中高表达，可能是EGJ癌重要的分子标志物。由于本研究没有纳入神经内分泌瘤及未分化癌等其他病理类型EGJ癌，p28GANK在这些类型肿瘤中的表达及临床意义还需大样本深入研究。

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Expression of p28GANK in gastroesophageal junction cancer and its clinicopathological significance

XU Hongbao,PAN Jie,WANG

Weimin,et al.Department of General Surgery,Huzhou Central Hospital,Huzhou 313000,China

Objective To investigate the expression of p28GANK in gastroesophageal junction(EGJ)cancer and its clinicopathological significance. Methods The expression of p28GANK was detected with immunohistochemical staining in 66 cases of EGJ cancer and corresponding normal tissue in the resection edge.The correlation of p28GANK expression with clinicopathological features was analyzed. Results Among 66 cases of EGJ cancer,13 were squamous cell carcinoma(19.7%) and 53 were denocarcinoma(80.3%).Postoperative pathology showed that 28.2%patients (19/66)had lymphatic or vascular invasion;and 45.5%(30/66)had lymph node metastasis.There was no difference in p28GANK expression between squamous cell carcinoma and adenocarcinoma (P＞0.05).P28GANK expression was significantly stronger in cancer tissues than that in the corresponding non-cancerous tissue(P＜0.05).The expression of p28GANK was correlated with lymph node metastasis and advanced TNM stage of EGJ cancer(P＜0.05). Conclusion P28GANK expression is upregulated in gastroesophageal junction cancer,indicating that it might be used as a tumor molecular marker for EGJ cancer.

Gastroesophageal junction cancer P28GANK Pathology analysis Clinical significance

2 0 1 6-0 6-2 1）

（本文编辑：李媚）

10.12056/j.issn.1006- 2785.2017.39.8.2016- 511

313000湖州市中心医院普外科

许洪宝，E- m ail:1457380065@ qq.com