广西地区骨与关节结核患者外周血中白细胞介素23的水平及临床意义

吴昭元+唐毓金+卓航宇+贺玉棚+廖林波+农峰+卢贤哲

【摘要】目的檢测广西地区骨与关节结核患者外周血中白细胞介素23（IL23）的表达水平并探讨其临床意义。

方法收集2015年7月～2016年7月收治的45例骨与关节结核患者作为观察组， 选择同期在体检中心进行健康体检的54名健康者作为对照组。采用免疫酶联吸附法（ELISA）检测两组外周血血清IL23的表达水平，同时采用常规方法对C反应蛋白（CRP）和红细胞沉降率（ESR）进行检测，比较两组间IL23、CRP及ESR表达水平的差异，分析观察组IL23水平与CRP、ESR水平之间的相关性。

结果两组受试者外周血IL23、CRP及ESR表达含量差异有统计学意义（P<0.001）。观察组IL23、CRP及ESR水平均显著高于对照组；观察组外周血IL23与CRP、ESR水平均无线性相关（P>0.05）。

结论广西地区骨与关节结核患者外周血中IL23的表达水平明显升高，提示其可能在骨与关节结核发病中起重要作用。

【关键词】骨与关节结核；白细胞介素23；C反应蛋白；红细胞沉降率

中图分类号：R529.2文献标识码：ADOI：10.3969/j.issn.10031383.2017.02.004

【Abstract】ObjectiveTo detect the expression of interleukin23（IL23） level in peripheral blood of patients with bone and joint tuberculosis in Guangxi and to explore its clinical significance.

MethodsFortyfive patients with bone and joint tuberculosis admitted to our hospital from July，2015 to July，2016 were selected as observation group.And fiftyfour healthy subjects were selected as control group.The levels of serum IL23 in peripheral blood were measured by enzymelinked immunosorbent assay（ELISA） in both groups and the levels of plasma C reactive protein（CRP） and erythrocyte sedimentation rate（ESR） were tested by routine method.The difference of levels of IL23，CRP and ESR was compared between the two groups and correlation between IL23 levels and CRP，ESR levels in the observation group was analyzed.

ResultsDifference of expression levels of IL23，CRP and ESR in peripheral blood of both groups was statistically significant（P<0.001）.The levels of IL23，CRP and ESR in the observation group were significantly higher than those in the control group，and there was no linear correlation between IL23 and CRP and ESR in the peripheral blood of the observation group（P>0.05）.

ConclusionThe expression of IL23 in peripheral blood of patients with bone and joint tuberculosis in Guangxi significantly increases，which suggests that IL23 may play an important role in the pathogenesis of bone and joint tuberculosis.

【Key words】bone and joint tuberculosis；IL23；CRP；ESR

骨与关节结核（bone and joint tuberculosis，BJTB）是由结核分枝杆菌侵入骨或关节而引起的化脓性破坏性病变，是常见的肺外结核，好发于脊柱，如果治疗不及时，后期容易出现窦道、畸形甚至截瘫[1]。近年来，由于耐药性（占结核病患者11%）的增加、合并HIV感染、人口流动性的增加等使我国BJTB的发病率并没有明显下降[2～3]。BJTB发病较为隐匿，早期无典型的临床症状，预防及早期诊断尤为重要。白细胞介素23（interleukin23，IL23）是由p19亚基和p40亚基通过二硫键连接产生的一种异源二聚体细胞因子，属于IL12家族成员，由树突状细胞和巨噬细胞等产生参与免疫和炎症反应[4]。Cooper AM等[5]研究发现在结核分枝杆菌感染中，缺乏IL12和IL23共同的p40亚基比缺乏IL12 p35亚基导致结核分枝杆菌感染的易感性增加，提示IL23在机体感染分枝杆菌发病中起重要作用。本实验通过对BJTB患者外周血中IL23表达水平进行检测，初步探讨该细胞因子在BJTB发病中可能存在的机制，为早期BJTB的诊断、治疗提供理论依据。

1資料与方法

1.1一般资料

选取2015年7月～ 2016年7月右江民族医学院附属医院收治的广西籍壮族BJTB患者45例，既往未感染肺结核，排除自身免疫性疾病、慢性病、遗传性疾病者，术后病理结果确诊为BJTB，其中男29例，女16例，年龄16～75岁，平均（46.76±14.50）岁。同期随机选取我院体检中心的54名健康体检者作为对照组，所有体检者无明显临床症状，未患心、肺、肾等基础疾病，各项实验室检查指标均正常，其中男30例，女24例，年龄21～63岁，平均（41.75±12.87）岁。所有受试者均来自广西地区且征得本人或家属的知情同意。两组的性别、年龄比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2研究方法

1.2.1血标本的采集

于清晨抽取空腹受试者肘正中静脉血3 ml于促凝管，1500 r/min离心10 min后取上层血清放于-80℃冰箱冷藏用于待测IL23及C反应蛋白（CRP）表达水平，同时抽取2 ml外周血于枸橼酸钠抗凝管中待测红细胞沉降率（ESR）表达水平。

1.2.2外周血IL23水平的检测

采用ELISA法进行检测，具体步骤按照IL23 ELISA 试剂盒（浙江联科生物技术有限公司IL23 ELISA Kit）说明书进行操作。

1.2.3CRP、ESR含量的检测

使用全自动生化分析仪（日本7600）、血沉分析仪（意大利Test1）检测CRP、ESR表达水平，具体操作由我院检验科人员严格按照英国RIQAS质控标准完成。

1.3观察指标

观察两组IL23、CRP、ESR表达水平。

1.4统计学方法

对所得的实验结果运用统计学软件SPSS 19.0进行分析， 计量资料以均数±标准差（〖AKx-D〗±s）表示，两组间比较采用两独立样本t检验，相关性运用Pearson相关分析法，检验水准：α=0.05，双侧检验。

2结果

2.1不同浓度梯度标准品的OD值

观察组外周血IL23水平的标准曲线绘制，如表1和图1所示。

2.2两组IL23表达水平的比较

观察组和对照组的IL23水平比较差异有统计学意义（P<0.001），与对照组相比观察组IL23水平显著增高。见表2。

2.3观察组患者外周血IL23与CRP、ESR水平的相关性

经Pearson线性相关性分析，观察组患者外周血IL23与CRP、ESR含量均无显著相关性（r=0.138，P>0.05；r=0.243，P>0.05）。

3讨论

骨与关节结核病情复杂、进展机制不清、致残率较高，使得治疗难度增加。通常认为骨与关节结核来源于肺部感染灶的血行转移，但并非所有骨与关节结核患者都合并肺结核。目前关于结核杆菌与骨破坏之间的机制仍不明确。以往有研究[6]表明，破骨细胞和成骨细胞间的动态平衡直接影响着健康骨形态的维持，而结核分枝杆菌含有多种抗原成分，能够刺激单核、巨噬细胞系统释放多种细胞因子如IL12、TNFα，诱导破骨细胞的成熟和活化导致平衡破坏而最终引起骨坏死[7]。

当结核杆菌侵入宿主后，许多细胞因子参与免疫反应，其中CD4+T淋巴细胞起着重要作用[8]。以往我们认为IL23通过诱导CD4+T淋巴细胞分泌干扰素γ（IFNγ）参与结核免疫反应，但近来研究表明IL23还可以诱导CD4+T细胞分化成高活性TH17细胞，通过生成IL17A、IL17F、IL21、IL22等细胞因子促进炎症反应[9]。国外有学者[10]就白细胞介素23受体基因（Arg381Gln）多态性与肺结核相关性进行了研究，结果提示IL23R基因 rs11209026 位点与突尼斯人活动性肺结核的疾病严重程度有关。另外，国内学者卓文基等[11]对肺结核患者血清IL23表达水平进行了检测，结果发现肺结核患者血清中IL23分泌水平显著高于健康对照组，提示其可能在结核感染和免疫反应中起作用，并认为IL23在血清中分泌水平的差别，有可能成为肺结核临床诊断依据之一。

目前IL23与肺结核的相关研究较多，也提示其参与结核的免疫反应当中，但却未见文献报道其是否参与骨与关节结核免疫反应，而广西地区作为结核的高发地带，因此我们选取本区内骨与关节结核患者45例和健康对照组54例进行血清IL23表达水平的检测，为明确IL23是否参与骨与关节结核免疫作用及具体机制研究提供依据。本实验采用ELISA 法进行检测，结果显示与对照组相比，骨与关节结核患者血清IL23 表达水平较高，也许同它参与结核自身免疫反应作用有关，这与卓文基等的研究结果相同，提示IL23可能通过诱导CD4+T 细胞向Th1 细胞分化，促进单核巨噬细胞产生IFNγ以及扩大TH17细胞群产生IL17等方式参与机体对结核病的免疫应答，它的表达水平也可能成为骨与关节结核的诊断及愈后标准之一。

CRP是一种急性相蛋白，可以在炎症刺激下由肝细胞合成，正常人的血清中含量很低，而炎症感染者血中有较高的表达。而ESR在很多情况下都能够变快，常见的有炎症、恶性肿瘤、贫血等疾病。而本研究对两组受试人群外周血中的CRP及ESR水平检测结果也发现：观察组受试人群外周血中CRP及ESR水平与对照组相比，均明显升高（P<0.01），提示骨与关节结核病变与活动性炎症性反应有关。CRP及ESR并非是结核特异性表达蛋白，它们的表达水平受多种因素影响，作用机制复杂，本研究中观察组受试人群血清IL23 表达水平与CRP、ESR水平之间无显著相关性，说明它们可能存在各自不同的调控机制，是否存在某种相关性及具体的作用机理值得我们进一步研究。

综上所述，IL23在骨与关节结核患者外周血血清中表达水平较高，表明可能与骨与关节结核的免疫反应有着密切关系，具体机制有待进一步研究。随着对骨与关节结核的认识以及对IL23精确的分子结构、抗炎作用机制的认识不断加深，IL23有可能成为骨与关节结核临床诊断依据及判断愈后方面更好的指标，为今后早期预防及控制提供帮助。

参考文献

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[11]卓文基，钱明，陈涛，等.肺结核患者血清IL6、IL12、IL23、TNFα、IFNγ表达水平的临床意义分析[J].现代医院，2014，14（10）：46.

（收稿日期：2016-11-18 修回日期：2017-04-12）

（编辑：梁明佩）

基金项目：2015年国家自然科学基金应急管理项目（81541136）；2012年广西卫生厅重点课题（重2012083）；2011年广西教育厅课题（201106LX431）；2010年广西卫生厅课题（重2010059）

作者简介：吴昭元，男，在读硕士研究生，研究方向：脊柱与骨关节疾病。Email：543802117@qq.com

▲通信作者：唐毓金。Email：tangyujin196709@163.com