血清胶质纤维酸性蛋白对脑胶质瘤的诊断及判断预后的价值

李 伟 袁 方 刘丙丽 张冠群 刘 君 朱 亮 王江波 刘志广

血清胶质纤维酸性蛋白对脑胶质瘤的诊断及判断预后的价值

李 伟 袁 方 刘丙丽 张冠群 刘 君 朱 亮 王江波 刘志广

目的 检测胶质瘤患者胶质纤维酸性蛋白(GFAP)，分析其与脑胶质瘤诊断及转归的关系。方法 选取胶质瘤患者60例作为实验组，颅内良性肿瘤患者40例作为对照组，ELISA法检测入组患者血清GFAP含量，免疫组织化学法法检测胶质瘤组织、癌旁组织、对照组脑组织中GFAP表达，分析胶质瘤患者GFAP表达与其临床病理特征的相关性。结果 脑胶质瘤组GFAP含量为(0.05±0.04) ng/ml，较良性肿瘤组降低，差异有统计学意义(P<0.05)；胶质瘤组织中出现7例GFAP阳性表达(++)，阳性率11.7%，较癌旁组织、良性肿瘤组织的低，差异有统计学意义(P<0.05)；脑胶质瘤组GFAP表达水平与胶质瘤病理类型、原发灶数目及大小、其他脏器转移、放疗、化疗有关(P<0.05)，与年龄、性别、PS评分无关(P>0.05)；病理类型、原发灶数目及大小、远处转移、放疗、化疗均是独立危险因素(P<0.05)。结论

脑胶质瘤；血清胶质纤维酸性蛋白；临床病理特征

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:719～721)

脑胶质瘤是最常见的恶性颅内原发性肿瘤，目前其诊断主要依赖影像学检查，即使是最先进的MRI 检查也不能完全确诊，尤其是那些影像学表现不典型的病例[1]。研究者们致力于寻找更为准确有效的标志物来诊断胶质瘤及判断预后。胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)是星形细胞胞质内的特异性中间丝结构蛋白[2]，研究提示，GFAP在维持星形细胞形态、决定细胞分化和细胞功能方面具有特别的作用[3]。本研究选取在我院住院的脑胶质瘤患者，检测其GFAP的表达变化，分析其与脑胶质瘤诊断及转归的关系。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2015年1月至2016年1月在我院住院的脑胶质瘤患者60例作为实验对象，其中，男性22 例，女性18 例，年龄30～70岁，平均年龄(43.22±6.24) 岁。均经细胞学或组织病理学确认为脑胶质瘤，并接受手术治疗。其中，星形细胞瘤22例，室管膜瘤18例，少突胶质细胞瘤12例，胶质母细胞瘤8例。选择同时期在我院住院的颅内良性肿瘤患者40例作为对照组，其中，男性19 例，女性21 例，年龄30～68岁，平均年龄(44.12±3.44) 岁。包括垂体瘤13 例，脑膜瘤11 例，神经鞘瘤8 例，中枢神经细胞瘤2 例，胆脂瘤2 例，海绵状血管瘤4 例。入组患者在年龄、性别等方面无显著差异(P>0.05)，具有可比性。

1.2 实验方法

1.2.1 试剂及器材 Na2EDTA抗凝剂；GFAP ELISA试剂盒；GFAP封闭液+一抗，兔抗鼠免疫组化二抗试剂盒；离心机(上海飞鸽)；显微镜(日本Olympus)；酶标仪(英国TECNA)；脱水机(日本TIYODA)；切片机(德国Leica)；计算机图像分析系统(美国惠普)。

1.2.2 ELISA法检测入组患者血液中GFAP含量 入组患者抽取空腹静脉血，1 500 r/min离心10 min后吸取上清，保存于低温冰箱中。计算板孔数；试剂盒常温放置30 min；标准品稀释；每个浓度均设5个复孔，加样；配液；洗涤；显色；终止；酶标仪以450 nm的波长处测量吸光值；绘制线性回归方程，计算样品浓度。

1.2.3 IHC法检测组织中GFAP的表达 福尔马林液固定、脱水、透明；包埋、切片；热修复；过氧化氢阻断；正常山羊血清封闭；加一抗50 μl静置1 h；加二抗50 μl 静置10 min；显色、终止；复染、分化；封片。

判断标准：GFAP阳性结果判定以细胞核不染色，胞膜或胞质出现棕黄色颗粒为阳性，阴性(-)：染色细胞数≤10%；弱阳性(+)：11%～25%；阳性(++)：26%～50%；强阳性(+++)：>50%。

1.3 统计学分析

应用SPSS 17.0统计学软件进行数据处理，计数资料用χ2检验，计量资料用方差分析，以(均数±标准差)表示，多因素用Logistic回归模型，P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ELISA法检测入组患者血清中GFAP含量

抽取入组患者外周静脉血，检测血清GFAP含量，结果发现，脑胶质瘤组GFAP为(0.05±0.04) ng/ml，较良性肿瘤组降低，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2 IHC法检测入组患者组织中GFAP表达

对入组患者组织中GFAP的表达进行检测，结果发现，胶质瘤组织中出现7例阳性表达(++)，阳性率为11.7%，较癌旁组织、良性肿瘤组织降低，差异有统计学意义(P<0.05)；具体结果见表1。

表1 IHC法检测入组患者组织中GFAP表达情况/例

注：*为与癌旁组织比较，P<0.05；#为与良性肿瘤组织比较，P<0.05。

2.3 GFAP表达与脑胶质瘤临床病理特征的相关性

GFAP表达与胶质瘤病理类型、原发灶数目及大小、其他脏器转移、放疗、化疗有关(P<0.05)，与年龄、性别、PS评分无关(P>0.05)；具体结果见表2。

表2 GFAP表达与脑胶质瘤临床病理特征的相关性(例，%)

2.4 GFAP表达与胶质瘤临床病理特征的多因素分析

多因素分析结果显示：病理类型、原发灶数目及大小、远处转移、放疗、化疗均是独立危险因素，具体结果见表3。

表3 GFAP表达与胶质瘤临床病理特征的多因素分析

3 讨论

目前，改善脑胶质瘤患者预后的主要治疗方法即手术切除，但脑胶质瘤患者缺乏典型的早期临床表现，影像学检查在早期无法确诊，常常贻误最佳的治疗时机[4]。因此，寻找能够协助诊断及判断预后的新指标至关重要。胶质纤维酸性蛋白(GFAP)是1种分子量为50～52 kD的酸性蛋白，属细胞骨骼蛋白，是星形细胞的标志蛋白，在星形细胞中有丰富的、唯一的表达[5]。在缺血损伤时，刺激成熟星形细胞合成GFAP，GFAP 主要用于标记损伤后胶质活动。在正常情况下GFAP 受星形胶质细胞的动力调节[6]。本研究选取在我院住院的脑胶质瘤患者，检测其GFAP的表达变化，分析其与脑胶质瘤诊断及转归的关系。

在本研究中，选取我院脑胶质瘤及良性颅脑肿瘤患者，检测患者血清GFAP含量发现，脑胶质瘤组GFAP较良性肿瘤组降低。进一步对脑胶质瘤组织、癌旁组织及对照组脑组织中GFAP表达检测发现，胶质瘤组织中GFAP阳性率11.7%，较癌旁组织、良性肿瘤组织降低。这表明，在脑胶质瘤血清及组织中均存在GFAP的表达下降。既往实验发现，GFAP 基因敲除小鼠的星形细胞高表达祖细胞标志物nestin，且这种细胞中间丝形成减少，生长时饱和密度增高[7]，提示GFAP 表达的丧失能使细胞呈现恶性表型,并使胶质瘤进展更迅速。

本研究对脑胶质瘤组GFAP表达与临床病理特征的关系分析发现，GFAP表达与胶质瘤的病理类型、原发灶数目及大小、其他脏器转移、放疗、化疗有关，与年龄、性别、PS评分无关；病理类型、原发灶数目及大小、远处转移、放疗、化疗均是独立危险因素。许多研究者利用GFAP 免疫组织化学技术对大量脑肿瘤进行观察表明胶质瘤的恶性程度与GFAP 表达呈显著负相关，即分化越差，GFAP表达越少甚至完全不表达，认为GFAP 可以作为该类肿瘤恶性程度及预后判定的一项良好的标志物[8]。将GFAP 基因导入不表达GFAP 的髓母细胞瘤瘤细胞中，细胞生长受抑，形态显著改变并向星形细胞分化，GFAP 重新获得表达，表达程度与肿瘤的增殖、分化呈明显负相关[9]。瘤细胞对抗癌药物的敏感性提高[10]。

综上所述，脑胶质瘤患者存在GFAP的表达降低，其表达水平与脑胶质瘤的病理类型、原发灶数目及大小、其他脏器转移、放疗、化疗有关。星形细胞瘤，原发灶数目少，病灶小，无远处转移，接受放化疗等抗肿瘤治疗者，GFAP水平升高。GFAP可能作为脑胶质瘤患者早期诊断及判断预后的新指标。

[1] 陈梅花,陈贵珍, 贾万钧.Ki67、GFAP 在人脑恶性胶质瘤病理分级中的意义〔J〕.中国医药导报,2014,18(11):31-34.

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[3] 覃 川，杨秀江，晏 怡.脑胶质瘤患者血清胶质纤维酸性蛋白浓度及临床价值〔J〕.第三军医大学学报,2012,21(34):2214-2215.

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[5] Peraud A,Mondal S,Hawkins C,et al.Expression of fascin,an actin-bundling protein,in astrocytomas of varying grades〔J〕.Brain Tumor Pathol,2003,20(2):53-58.

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[7] 张正保,覃 川,晏 怡.血清胰岛素生长因子-1和胶质纤维酸性蛋白在脑胶质瘤分级及预后评估中的临床价值〔J〕.华西医学,2013,28(1):11-13.

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[10] Ferguson SD.Malignant gliomas:diagnosis and treatment〔J〕.Dis Mon,2011,57(10):558-569.

(编辑：吴小红)

Value of GFAP in the Diagnosis and Prediction of Clinical Outcome of Glioma

LIWei,YUANFang,LIUBingli,etal.

XuzhouCentralHospital,Xuzhou,221009

Objective To study glial fibers acidic protein (GFAP) in glioma,to analyze its relationship with the diagnosis and outcome of glioma.Methods 60 patients with glioma were selected as experimental objects,40 patients with intracranial benign tumor was the control group, ELISA method was used to detect the contents of serum GFAP,immune histochemical method was used to detect GFAP expression in glioma tissues,tissue adjacent to carcinoma,and brain tissues of the control group.Relevance of GFAP expression of glioma and clinical pathological features were analyzed.Results The expression of GFAP in glioma group was (0.05±0.04) ng/ml,which was lower than that in benign tumor group (P<0.05).There were 7 cases of GFAP positive expression in glioma tissues,(P<0.05).The expression of GFAP in the glioma group was significantly correlated with the pathological type,the number and size of the primary tumor in the glioma group,and the difference was statistically significant (P<0.05) (P<0.05),which was independent of age,sex and PS score (P>0.05).Pathological type,number and size of primary tumor,distant metastasis,radiotherapy and chemotherapy were independent risk factors (P<0.05).Conclusion Expression of GFAP in glioma patients reduced,and GFAP expression level are related with pathological type,number and size of original site of glioma,transfer of other organs,radiotherapy and chemotherapy.

Glioma;Serum acidic protein glial fibers;Clinical pathological features

江苏省徐州市科技项目(编号:KC14SH029)

221009 江苏省徐州市中心医院

刘志广

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.05.007

R739.41

A

1001-5930(2017)05-0719-03

2016-07-08

2017-03-12)

脑胶质瘤患者存在GFAP的表达降低，其表达水平与脑胶质瘤的病理类型、原发灶数目及大小、其他脏器转移、放疗、化疗有关。