星斑川鲽无水保活运输技术研究

徐中平

摘 要：该文研究了星斑川鲽无水保活运输技术方法及在无水保活处理中的应激反应。结果表明，星斑川鲽在低温麻醉状态下空气暴露处理65 h存活率为100%，处理84 h存活率达90%；血清皮质醇浓度在0～35 h和48～65 h时间段分别升高2～3倍和20-24倍，显示星斑川鲽的应激反应程度随胁迫进程呈现为阶梯状特点；血糖浓度变化趋势基本与血清皮质醇水平变化相对应。以上结果显示，星斑川鲽进行无水保活运输在该实验条件下可安全跨时35 h，且有可能跨时65 h，并保持100%存活。

关键词：星斑川鲽 无水保活 空气暴露 皮质醇

中图分类号：S917.4 文献标识码：A 文章编号：1674-098X（2017）02（a）-0075-02

鱼类无水保活运输具有显著降低运输成本，避免设备腐蚀，加快运输速度，缩减运输用时等优点，同时也是人们努力突破的运输方式。星斑川鲽（Platichthys stellatus）属鲽形目、鲽科、星鲽属，为一种大型鲆鲽底栖性鱼类，由于该鱼营养价值高，口感独特，在国内外市场上深受欢迎，特别是欧洲、日本、韩国，在市场上与鲑鳟鱼类相媲美。自2006年实现全人工规模化育苗以来，星斑川鲽养殖规模逐步扩大，已成为替代大菱鲆、牙鲆等重要的海水鱼养殖种类，并实现出口韩国和日本。

星斑川鲽的无水保活运输及应激生理反应，目前未见报道。该实验将星斑川鲽商品鱼长时间无水保活处理，统计了存活率，观测了其间星斑川鲽对空气暴露处理应激反应特点，为星斑川鲽无水保活运输技术开发应用提供了数据参考。

1 材料与方法

1.1 材料

星斑川鲽（415±53）g由日照市星斑川鲽良种场提供。供试鱼从养殖池捞出，放于小池（3 m×3 m）暂养，养殖用水为砂滤海水，盐度28‰，水温18 ℃，连续充气增氧，停食2 d后，进行实验处理。

皮质醇放射免疫分析药盒购于北方生物技术研究所，其他药品均为国产分析纯。

1.2 方法

1.2.1 低温与空气暴露处理和回水复活实验

逐渐向暂养池加冰降低水温（5 ℃/h）至4 ℃，观察鱼呼吸明显减慢、触及反应十分微弱后捞出，平放于自制塑料盒（23 cm×35 cm×13 cm）内的悬空塑料网片上（1尾/盒），然后装入塑料袋内（1盒/袋），再放入空气保湿材料和CO2吸收药包，将塑料袋内空气赶出，冲入氧气，扎紧后放置于4 ℃冷室，模拟无水保活运输柜进行处理。处理结束后将存活鱼从塑料袋中取出，转入冷室外盛有同温海水的水箱中（增氧），24 h后再转入暂养池中继续观察至8 d，统计存活率。

1.2.2 观察与记录

每间隔约7 h观察一次，确定处理鱼的存活状况，并随机抽样3尾采集血液制备血清。鱼鳃盖仍能均匀张合呼吸则认为存活，反之，停止张合、反复刺激无反应则视为死亡。

1.2.3 血清制备

抽样鱼迅速浸入含麻醉剂M-222（20 mg/L）的海水（4 ℃）中，使之处于深度昏迷状态，用注射器收集其尾部动静脉血液注入离心管内，于冰箱（4 ℃）静置24 h后收集血清，离心（10 000 g，4 ℃）10 min，取上清液，分装于1.5 mL离心管，-20 ℃冻存备用。

1.2.4 血清皮质醇测定

按照皮质醇放射免疫分析药盒提供的使用操作方法，由山东大学核医学研究所测定。

1.2.5 血糖测定

采用邻甲苯胺法[1]进行血糖测定。

2 结果

2.1 無水保活处理过程中的鱼存活情况

经加冰降温麻醉的星斑川鲽鱼入充氧袋内进行无水保活处理。处理65 h内未发现有鱼死亡，处理84 h发现处理鱼死亡两尾，处理实验结束，存活率为90%。将存活鱼15尾回水复活，5～17 min后回水鱼呼吸频率逐渐加快，30 min后触动全部有反应，24 h后再转入暂养池继续观察7 d，全部回水鱼体色、呼吸、触及反应和游泳姿态均未见异常，且有摄食行为，复活率为100%。

2.2 无水保活处理过程中血清皮质醇水平的变化

由图1显示，鱼经过低温海水麻醉后血清皮质醇浓度比未处理对照升高约0.5倍。将麻醉后的鱼进行无水保活处理，在0～65 h的处理时期内，鱼血清皮质醇浓度继续升高，呈阶梯状特点。在0～35 h阶段，血清皮质醇测定值比未处理对照鱼升高2～3倍，在48～65 h期间，处理鱼血清皮质醇水平上升比未处理对照鱼升高20～24倍。这些数据表明，处理前35h，应激反应相对平缓，处理48 h后，应激反应则明显加剧。将处理84 h的存活鱼放回海水中进行复活，3 d后测定的血清皮质醇水平与未处理对照测定值相当，从血清皮质醇水平上看，长时无水保活处理的星斑川鲽回水后能够恢复到正常静息状态。

2.3 低温与无水保活处理过程中血糖浓度的变化

如图2所示，低温处理使星斑川鲽血糖浓度显著升高约1倍，进一步的空气暴露处理使星斑川鲽血糖水平继续升高，并随处理时间的延长而逐渐增大升高的幅度，在48 h观测点达到峰值，在处理48～65 h期间血糖浓度维持高位水平。糖浓度的变化态势基本与血清皮质醇浓度变化相对应。空气暴露处理84 h实验鱼回水复活处理72 h后，血糖浓度基本恢复到未处理对照水平。以上结果进一步佐证了2.2部分血清皮质醇观测结果所得出的结论。

3 讨论

该研究将经低温麻醉星斑川鲽商品鱼入充氧袋内进行空气暴露处理，来模拟无水保活运输，并观测处理鱼应激生理反应。血液皮质醇水平的升高常被看作是鱼类应激的灵敏信号[2]。在胁迫条件下，鱼类肾上腺皮质系统活动加强，皮质醇分泌量大大增加，引发一系列的应激生理反应，如加速糖异生，抑制外周组织葡萄糖利用，血糖升高等，血糖升高亦常被作为可靠的生理应激指标之一[3]。因此，测定无水保活处理过程中的血清皮质醇和血糖水平变化，对于了解星斑川鲽无水保活运输过程中的生理变化具有重要意义。

星斑川鲽经低温麻醉和无水保活处理，处理65 h存活率为100%，处理84 h存活率为90%。在0～35 h和48～65 h在阶段血清皮质醇和血糖水平呈现出阶梯状升高特点（如图1，图2）。基于这些观察结果，本研究推测，在0～35 h阶梯期，星斑川鲽应处于应激反应的警告期和抵抗期，而在48～65 h阶梯期则处于应激反应的疲惫期。这一推断结合存活率的观测提示，星斑川鲽无水保活运输在35 h以内对于存活是相对安全平稳的，在48～65 h处理时长内处理鱼虽处于应激反应的疲惫期，但保活运输是有可能实现的，而超过65 h，星斑川鲽可能因过度应激反应造成不可逆转伤害而死亡。

参考文献

[1] 洪磊，张秀梅.环境胁迫对许氏平鮋和花鲈血糖、血沉降的影响[J].中国水产科学，2005，12（4）：414-418.

[2] Wendelaar B S E.The stress response in fish[J].Physiological Reviews，1997，77（3）：59l-625.

[3] 卢玉标，游翠红，王树启，等.浅水应激后黄斑蓝子鱼生理指标变化及牛磺酸的抗应激作用[J].水生生物学报，2014，38（1）：68-73.