蒙医施灸赫依三穴对PCPA模型大鼠脑组织IL-1β、IL-6含量的影响△

高玉峰 乎宝力格* 苏日古嘎

(1.内蒙古民族大学附属医院，内蒙古 通辽 028007；2.内蒙古民族大学，内蒙古 通辽 028000)

蒙医理论认为失眠症的病因有外因和内因，外因系劳逸失调、思虑太过、惊吓、失血等，内因系赫依琪素紊乱累及心脏白脉受累，机体在4个发病条件的作用下，赫依希日紊乱累及心脏、肾脏或赫依琪素紊乱累及白脉从而引起失眠，因此大多属赫依病范畴。蒙医灸疗法则是镇赫依之邪，抑制赫依病扩散之功效。前期研究已表明，施灸“赫依三穴”对睡眠紊乱模型大鼠有镇静作用，可降低中枢神经系统内重要的神经递质NO与NOS的活性[1,2]。白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)是具有多种生物学功能的细胞因子，参与睡眠-觉醒，有调控睡眠稳态的作用[3]。笔者在前期研究基础上观察施灸赫依三穴对失眠大鼠脑干内IL-1β和IL-6含量的影响，进一步探讨其干预失眠的机制，为临床治疗失眠选穴提出实验依据。

1 材料和方法

1.1 实验动物：实验动物选择健康雄性SD大鼠60只，体重约200±10g，全部大鼠均由沈阳实验动物中心提供，合格证号：(SXSK(辽)2015-0001)。

1.2 试剂及仪器： AUW120D型岛津电子d平购自日本岛津公司，Biotek Elx800酶标仪购自美国Bio-Rad公司，对氯苯丙氨酸(PCPA)购自北京环亚太克生物医学技术有限公司，艾灸贴购自苏州东方艾绒厂，IL-1β酶联免疫分析(ELISA)试剂盒购自广州瑞博奥生物科技有限公司，IL-6酶联免疫分析(ELISA)试剂盒购自广州瑞博奥生物科技有限公司。

1.3 造模方法：本实验采用共认得对氯苯丙氨酸造模法[4]。将PCPA用生理盐水配置成混悬液(45mg/100g),腹腔注射PCPA混悬液(1mg/100g)，1次/d，连续注射2d。大鼠出现活动明显频繁、对外界的声、光等刺激异常敏感，兴奋性增高，昼伏夜出节律消失等，表明造模成功。

1.4 分组及处理方法：将60只SD雄性大鼠随机分为6组，即正常组、模型组、安定组、顶会穴组、赫依穴组、黑白际穴组，每组10只。

正常组：大鼠腹腔注射0.9%氯化钠溶液(1mL/100g)，1次/d，连续注射2日；与治疗组相同的抓取、固定，不做任何治疗，连续7d。

模型组：造模成功后同灸疗组一样抓取，固定。

安定组：造模成功后，将安定(地西泮)注射液，0.92mg/Kg，1次/d，连续灌胃7d。

顶会穴组：造模成功后施灸大鼠“顶会穴”，1次/d，连续7d。

赫依穴组：造模成功后施灸大鼠“赫依穴”，1次/d，连续7d。

黑白际穴组：造模成功后施灸大鼠“黑白际穴”，1次/d，连续7d。

1.5 观察指标及检测方法[5,6]：将6组大鼠快速断头处死，冰上迅速取大脑干称重，-80℃冰箱保存待测。按100mg组织加入500μL裂解液，冰上裂解30min，每5min振荡1次，在冰上用高速分散切割机进行破碎组织，冷冻离心机离心13000rpm， 20min，取上清。用ELISA法，按照IL-1β和IL-6试剂盒说明书的步骤，用酶标仪在酶标仪上的540～595nm波长范围处检测吸光度，其中562nm波长为最佳测量光密度值，计算出IL-1β及IL-6含量。

1.6 统计学方法：结果均采用±S表示，数据处理用SPSS17.0统计软件，组间数据比较采用方差分析，以P<0.05为差异有显著性意义。

2 结果

2.1 各组大鼠脑干中IL-1β含量测定结果：如表1所示，与正常组相比，模型组脑干内IL-1β含量升高，有显著性差异(P<0.05)；与模型组比较，安定组脑干内IL-1β的含量降低，有显著性差异(P<0.05)；与模型组相比，赫依穴组、顶会穴组和黑白际穴组均无显著性差异(P>0.05)，但顶会穴组和黑白际穴组有降低趋势。

表1 蒙医灸疗法对各组大鼠脑干中IL-1β的影响

注：与正常组比较，◆P<0.05；与模型组比较，●P<0.05，●●P>0.05

2.2 各组大鼠脑干中IL-6含量测定结果：如表2所示，与正常组相比，模型组脑干IL-6含量升高，有显著性差异(P<0.05)；与模型组比较安定组、赫依穴组、顶会穴组和黑白际穴组脑干IL-6含量降低，有显著性差异(P<0.05)。

表2 蒙医灸疗法对各组大鼠脑干中IL-6的影响

注：与正常组比较，◆P<0.05；与模型组比较，●P<0.05

3 讨论

蒙医理论认为人体体素相搏导致无法正常入睡称失眠，属于赫依病范畴。蒙医灸疗法具有通络、行气、活血，抑制赫依病之功效。蒙医“赫依三穴”[7]是指赫依穴、顶会穴、黑白际穴。赫依穴：位于第七颈椎棘突与第一胸椎棘突间隙窝中；顶会穴：两耳角直上连线中点，头顶正中心；黑白际穴：位于两乳正中对直的心窝处。《甘露四部》中记载[8]“赫依偏盛引起的疾病以顶会穴、赫依穴、黑白际穴灸之…。”

白细胞介素-1(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)是多功能细胞因子，研究表明夜间睡眠剥夺后第二d血液中IL-6含量增多[9]，Sint等发现IL-6产生总量因睡眠减少而增加，因睡眠状况好转而降低[10]。人睡眠剥夺后脑脊液IL-1β含量增加。说明IL-1、IL-6参与睡眠-觉醒周期，通过调节内源性的IL-1β和IL-6释放，调控睡眠稳态的作用。本研究发现，施灸顶会、赫依、黑白际穴治疗7d，与正常组相比，模型组大鼠脑干内IL-1β和IL-6含量升高，有显著性差异(P<0.05)；与模型组比较，安定组大鼠脑干内IL-1β和IL-6的含量降低，有显著性差异(P<0.05)；与模型组相比，赫依穴组、顶会穴组和黑白际穴组大鼠脑干内IL-1β含量均无显著性差异(P>0.05)，但顶会穴组和黑白际穴组有降低趋势；赫依穴组、顶会穴组和黑白际穴组大鼠脑干内IL-6含量降低，有显著性差异(P<0.05)。PCPA造模后，SD大鼠IL-1β、IL-6含量升高，明显高于正常组大鼠，表明IL-1β、IL-6有促进睡眠作用，动物睡眠剥夺后，IL-1β、IL-6含量反馈性升高，施灸“赫依三穴”后SD大鼠睡眠得以改善，治疗组大鼠IL-6含量接近正常组水平，而IL-1β水平则顶会穴组、黑白际穴组有降低趋势，因此实验说明，施灸“赫依三穴”治疗失眠机制可能与影响脑内细胞因子IL-1β、IL-6有关。

[1]高玉峰，乎宝力格. 蒙医灸疗对睡眠紊乱模型大鼠戊巴比妥钠睡眠时间的影响[J].中国民族医药杂志，2015,8(8):61～62.

[2]高玉峰. 施灸赫依三穴对失眠模型大鼠镇静催眠作用机理研究[J].中国民族医药杂志，2016,12(12):67～68.

[3]Fukada Y,Okano T.Circadian clock system in the Pineal gland[J].MolNeurobiol,2002,25(1):19～30.

[4] 王卓慧,刘婧,郭保君. 针刺补泻跷脉对失眠大鼠5-HT , NE及IL-1β含量的影响[J].中华中医药杂志,2017,32(3): 1321～1323.

[5]雷箴,贾兴元,王国忠.依达拉奉对氧惊厥小鼠脑组织白细胞介素-1β和白细胞介素-10含量的影响[J].中国工业医学杂志,2015,28(2):118～119.

[6]郭永明,梁宪如. 针刺对局灶性脑缺血大鼠缺血脑组织及血清IL-6的影响[J].天津中医药,2010,27(6):469～470.

[7]蒙医学编辑委员会.中国医学百科全书(蒙医学)[M].上海科学技术出版社,1993,12:31.

[8]伊希巴拉珠尔.甘露四部[M].呼和浩特:内蒙古人民出版社,1998,97,192.

[9]代国仪,马国强,王晓娟.免疫网络与OSAHS的相关研究进展[J].中国误诊学杂志,2008:8(18):4297-4299.

[10]郑利星,杨明会.神经递质在睡眠-觉醒周期中的作用[J].军医进修学院学报，2009,30(2):244～246.