乌龙丹对类风湿关节炎患者血清中NF-κB、IL-1、TNF-α的影响

2017-04-25陈鑫黄吉峰闫起李泽光张乐陈思思刘艳敏

中医药学报 2017年2期

关键词：滑膜炎乌龙类风湿

陈鑫，黄吉峰，闫起，李泽光*，张乐，陈思思，刘艳敏

(1.黑龙江中医药大学，黑龙江哈尔滨 150040；2.黑龙江中医药大学附属第一医院，黑龙江哈尔滨 150040)

乌龙丹对类风湿关节炎患者血清中NF-κB、IL-1、TNF-α的影响

陈鑫1，黄吉峰2，闫起1，李泽光2*，张乐1，陈思思1，刘艳敏1

(1.黑龙江中医药大学，黑龙江哈尔滨 150040；2.黑龙江中医药大学附属第一医院，黑龙江哈尔滨 150040)

目的:探讨乌龙丹治疗痰瘀痹阻型类风湿关节炎的作用机制。方法：将60例RA患者用随机法分为治疗组和对照组各30例。治疗组乌龙丹联合来氟米特片治疗，对照组予来氟米特片治疗。记录两组患者中医证候积分、DAS28-3评分的改善情况，血清中NF-κB、IL-1、TNF-α的数值变化。结果：治疗组患者中医证候积分、DAS28-3评分改善情况均优于对照组，差异均具有统计学意义(P<0.05)；治疗组患者的NF-κB/p65、IL-1、TNF-α水平显著低于对照组，差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:乌龙丹联合来氟米特片治疗痰瘀痹阻型类风湿关节炎具有一定的临床效果，可改善患者的临床症状，降低致炎因子。

乌龙丹；类风湿关节炎；NF-κB；IL-1；TNF-α

类风湿关节炎(RA)是一种有以“滑膜炎”为病理特征的全身性自身免疫病。可破坏关节软骨和骨组织，最终造成关节功能障碍。现代医学对其病因及发病机理尚不明确，但多数认为，在RA的发病过程中信号转导途径及细胞因子的异常发挥着重要的作用[1]。有研究证实，在RA患者滑膜组织中有高表达的NF-κB/p65，而NF-κB信号通路是RA关节炎症的重要信号传导通路，当转导途径被异常激活后,能增加IL-1、TNF-α等细胞因子的分泌[2]，而这些细胞因子已被公认为是 RA 滑膜炎和关节骨破坏的重要介质[3]。本课题通过对两组患者治疗前后血清中NF-κB、IL-1、TNF-α下降水平的检测,提示乌龙丹能不同程度地影响RA患者血清中NF-κB、IL-1、TNF-α的表达，进而探讨乌龙丹对NF-κB信号转导通路的作用机制。

1 资料

1.1 一般资料

选取 2015年1月—2015年10月在本院就诊的门诊RA患者60例，随机分为治疗组和对照组，每组30例。治疗组男9例，女21例；年龄18～65岁，平均(43.97±12.75)岁；病程5～53个月，平均(37.97±14.94)个月。对照组男6例，女24例；年龄18～64岁，平均(45.87±12.34)岁；病程3～60个月，平均(36.43±15.62)个月。两组资料具有可比性(P>0.05)。

1.2 诊断标准

西医诊断标准采用2010年类风湿关节炎的ACR/EULAR分类标准[4]；中医诊断标准符合《实用中医风湿病学》第2版类风湿关节炎痰瘀痹阻型证候特点[5]；RA的病情活动标准：采用欧洲抗风湿联盟制定的改良疾病活动性标准(DAS28-3)[6]。

1.3 纳入标准

①符合RA西医诊断标准与中医诊断标准者；②年龄在18～65岁；③病程在6月以上, 性别不限；④在本单位能够配合完成治疗疗程者；⑤自愿并签署知情同意书。

1.4 排除标准

①不符合上述纳入标准者；②合并其他风湿免疫疾病；③合并有其他严重系统性慢性疾病;④妊娠或哺乳期妇女、精神病患者；⑤在1个月内应用激素或免疫抑制剂者；⑥过敏性体质或对已知试验药物或组成成分过敏者；⑦近1月内曾参加过或正在参加其他临床试验者。

1.5 剔除标准

①纳入后发现不符合纳入标准的病例应予剔除；②治疗过程中接受其他方法治疗者。

2 方法

2.1 治疗方法

对照组: 给予来氟米特片(规格:10 mg/片,批号:H20000550,生产厂家:苏州长征一欣凯制药)，每日1次，1次20 mg，口服。

治疗组:在对照组的基础上加乌龙丹(乌骨藤、穿山龙、杜仲、续断、威灵仙、秦艽、白芍、木瓜、粉萆薢和元胡等组成，由黑龙江中医药大学附属第一医院制药厂加工，制成水丸，每丸6 g)，每日3次,1次20粒。两组均治疗12周。

2.2 观察指标

观察对比两组患者的中医证候积分、DAS28-3评分的改善情况。实验室观测指标：ELISA 法检测治疗前后两组患者血清细胞因子NF-κB/p65、IL-1、TNF-α指标的变化情况。严格按照试剂盒操作。安全性检测：血、尿、大便常规，肝肾功能、心电图等。

2.3 疗效判定标准

按《中药新药临床研究指导原则》，证候疗效标准:临床痊愈:临床症状、体征消失或基本消失，证候积分减少≥95%；显效:临床症状、体征明显改善，证候积分减少≥70%；有效:临床症状、体征均有好转，证候积分减少≥30%；无效:临床症状、体征均恶明显改善，甚或加重，证候积分减少<30%。(注：计算公式(尼莫地平法)：[(治疗前积分-治疗后积分)/治疗前积分]×100%)。

2.4 统计学方法

3 结果

3.1 两组中医症候疗效积分比较

治疗组较对照组下降明显(△P<0.05)；较治疗前明显降低，有统计学意义(▲P<0.05)。见表1。

表1两组中医症候疗效积分比较±s,分)

注：与对照组比较，△P<0.05；与治疗前比较，▲P<0.05

3.2 两组DAS28-3评分比较

治疗组较对照组评分显著减少(△P<0.05)；较治疗前明显降低，均有统计学意义(▲P<0.05)。见表2。

表2 两组DAS28-3评分比较,分)

注：与对照组比较，△P<0.05；与治疗前比较，▲P<0.05

3.3 两组血清中细胞因子水平的比较

治疗组中IL-1较治疗前水平明显降低 (▲P<0.05)；较对照组下降比较 (△P<0.05)；治疗组中TNF-α较治疗前水平明显降低 (▲P<0.05)；较对照组下降比较(△P<0.05)；治疗组中NF-κB/p65较治疗前水平明显降低 (▲P<0.05)；较对照组下降比较(△P<0.05)。见表3。

表3 两组血清中IL-1、TNF-α、NF-κB/p65水平的比较

注：与对照组比较，△P<0.05；与治疗前比较，▲P<0.05

4 讨论

RA是一种侵蚀性、非特异性关节炎为主要表现的自身免疫病，以持续性的慢性滑膜炎为主要病理表现。随着对RA的病因及发病机制深入探索，发现信号通路的异常以及炎性细胞因子的异常产生和相互作用在RA患者的关节炎症反应及软骨破坏中起着重要作用。NF-κB信号通路能够影响滑膜细胞炎症反应，NF-κB是调节多种细胞因子和炎性介质表达的关键转录因子，调控着许多参与免疫反应的早期和炎症反应各阶段的分子[7]。当NF-κB被激活后能诱导转录并促进靶蛋白IL-1、TNF-α等的合成,从而参与炎性反应的调控，反过来这些炎症因子又可以增强NF-κB的活性，进一步产生 TNF-α、IL-1等炎症因子加重RA 进展。已有证实活动期 RA 患者中NF-κB、IL-1、TNF-α较稳定期 RA 或正常人偏高[8]，免疫组化分析证实NF-κB/p65蛋白活性与RA活动性呈正相关。TNF-α是一种多效性的炎症介质,能引起内皮细胞、炎性因子合成与释放，导致局部滑膜炎症，促使骨破坏，抑制骨和软骨修复，促进血管翳形成。IL-1可以激活滑膜细胞，进而增加并分泌多种炎性调控因子的表达，从而引发RA的滑膜炎症反应[9]，而且TNF-α和IL-1有协同作用，它们能诱导活化滑膜细胞产生的炎性介质，从而降解关节软骨、蛋白多糖以及胶原，可以进一步刺激滑膜巨噬细胞分化为破骨细胞而破坏边缘骨质[10]。已有研究显示,乌龙丹能降低胶原诱导性类风湿关节炎模型大鼠关节滑液及血清中 IL-6、IL-1β的含量，从而抑制或延缓RA炎症和关节破坏的作用[11]。

RA在中医学属“尪痹”范畴[12-13]。《济生方》云:“皆因体虚,腠理空疏,受风寒湿气而成痹也。”《类证治裁·癖症》指出“诸痹……由营卫先虚,腠理不密,风寒湿乘虚而袭,正气为邪气所阻,不能宣行,因而留滞,气血凝滞,久而成痹。”以上理论指出RA发病的内因是先天禀赋不足、气血虚弱，外因为感受风寒湿热之邪，留滞关节，导致气血不通，痹阻脉络，造成局部或全身关节肿痛[14-15]。李泽光教授在以上理论基础上并结合多年丰富临床经验，以标本同治为原则，自制乌龙丹，取得较好疗效。乌龙丹以重用乌骨藤和穿山龙二药共为君药，祛风除湿、活血化瘀通络；臣以杜仲、川续断、威灵仙和元胡，补肝肾，祛风湿止痛；佐使为白芍、木瓜、秦艽和粉萆薢组成，养血舒筋，袪风除湿，止痹痛。纵观全方寒温并用、散中有收、寓通于补，共奏祛风、散寒、除湿、补肾、通络而止痹痛之功效。

本研究结果显示，乌龙丹联合来氟米特片治疗痰瘀痹阻型RA患者12周后，能明显降低患者中医症候积分及DAS28-3评分，并且治疗组RA患者血清IL-1、TNF-α、NF-κB/p65较治疗前数值明显下降，有统计学意义(P<0.05)；治疗组较对照组明显降低，有统计学意义(P<0.05)。说明乌龙丹联合来氟米特片治疗RA疗效更显著，乌龙丹可能通过降低NF-κB的异常活化，进而影响NF-κB通路，从而降低IL-1、TNF-α的表达，减轻RA滑膜炎症反应，这可能是该方治疗RA的机制之一。通过本课题研究，为临床应用乌龙丹治疗RA提供了实验依据，也为今后更加深入地研究乌龙丹奠定了基础。

[1] (美)菲尔斯坦.凯利风湿病学[M].栗战国,唐福林,译.北京:北京大学医学出版社,2011:1149.

[2] Sun Z, Andersson R. NF-kappaB activation and inhibitionra review[J].Shock，2002,18(2):99-106.

[3] Goldblatt F，Isenberg DA． New therapies for rheumatoid arthritis[J].Clin Exp Immunol，2005，140(2):195-204．

[4] Villeneuve E，Nam J，Emery P． 2010 ACR-EULAR classification criteria for rheumatoid arthritis[J]．Rev Bras Reumatol，2010，50:481-483．

[5] 王承德，沈丕安,胡荫奇.实用中医风湿病学[M].北京：人民卫生出版社,2009:501.

[6] Leeb BF,Andel I,Leder S, et al. The patients perspective and riieumatoid arthritisdisease activity indexes[J].Rheumatology, 2005,44(3):360-365.

[7] 姜申易,鲁静.NF-κB在类风湿关节炎中的研究进展[J].中国免疫学杂志，2016,32(1):119-122.

[8] 何奕坤，杨光辉.补肾解毒通络方联合甲氨蝶呤对类风湿关节炎患者血清中IL-1、IL-6、TNF-α的影响[J].辽宁中医杂志，2015,42(8)：1451-1453.

[9] 倪朝辉，李凡.IL-1及其受体拮抗剂与类风湿性关节炎[J]．国外医学·免疫学分册，2004，27(2):94-96．

[10] 翁习生，任玉珠.骨性关节炎病因研究进展[J]．中华骨科杂志，1996，16(1):60-62．

[11] 李泽光,梁华.乌龙丹对大鼠胶原诱导性关节炎的影响[J].风湿病与关节炎，2013(7)：29-38.

[12] 朱洁宜,吴鑫宇,周海纯,等.中医药治疗类风湿关节炎的研究进展[J].中医药信息,2015,32(1):115-117.