平喘固金颗粒对СOPD肺脾肾三虚模型大鼠的实验研究

魏亚东， 惠爱武， 陈 涛，毛家荣，王向阳， 苗文红，鱼 涛*

（1.陕西省中医医院，西安 710003；2. 西安交通大学第一附属医院，西安 710061）

平喘固金颗粒对СOPD肺脾肾三虚模型大鼠的实验研究

魏亚东1， 惠爱武1， 陈 涛2，毛家荣1，王向阳1， 苗文红1，鱼 涛1*

（1.陕西省中医医院，西安 710003；2. 西安交通大学第一附属医院，西安 710061）

目的 探讨平喘固金颗粒对慢性阻塞性肺疾病（СOPD)肺脾肾三虚证模型大鼠肺功能、肺表面活性物质SP-А、IL-8、肺泡灌洗液Ⅰ、Ⅲ型胶原、右心室肥厚指标及肺组织病理变化的影响。方法 60只SD健康大鼠随机分为空白对照组，模型组，金水宝胶囊组，平喘固金颗粒大、中、小剂量组(10.0、5.0、2.5g/kg)，用气管内滴入脂多糖及烟熏，并配合番泻叶泻下法、背部注射醋酸氢化可的松，建立肺脾肾三虚证СOPD大鼠模型，测定各组大鼠肺功能、肺表面活性物质SP-А、IL-8、肺泡灌洗液Ⅰ、Ⅲ型胶原、右心室肥厚指标，НE染色观察大鼠肺组织病理变化。结果 平喘固金颗粒大剂量组FVС、FEV0.3、FEV0.3/ FVС、PEF与模型组比较显著增加（P＜0.05）；平喘固金颗粒大剂量组显著降低IL-8和Ⅲ型胶原含量，升高SP-А含量，对Ⅰ型胶原无明显影响（P＜0.05）；平喘固金颗粒大剂量组能显著降低大鼠右心室肥厚指标（P＜0.05）；模型组大鼠支气管肺组织 НE 染色结果符合СOPD病理改变，与模型组比较，平喘固金颗粒中剂量 组炎症吸收良好。结论 平喘固金颗粒可明显改善肺脾肾三虚型СOPD大鼠肺功能；显著降低IL-8和Ⅲ型胶原含量；升高SP-А含量；显著降低大鼠右心肥厚指标；减轻肺组织病理学改变。

慢性阻塞性肺疾病；肺脾肾三虚证；SP-А；IL-8；Ⅰ型胶原；右心室肥厚；肺组织病理；大鼠；平喘固金颗粒

平喘固金颗粒是根据陕西省名中医曹利平主任医师临床有效方剂研制而成，具有补肺益肾，健脾化痰，降气平喘等功效，用于治疗慢性阻塞性肺疾病(СOPD)缓解期的咳、痰、喘等症。笔者通过建立大鼠脾肺肾三虚СOPD模型，研究其治疗СOPD的相关作用机制。

1 材料与方法

1.1 药物 受试药物：平喘固金颗粒（由党参、黄芪、胡桃肉、白术、橘红、法半夏、茯苓、枳壳、厚朴、五味子、沉香、苏子、浙贝母、麦冬等组成,批号：20150601,陕西省中医医院制剂中心提供,按每袋10 g，每克药粉相当于原生药粉0.72 g）。临床人用量：3次/d，10 g/次，或遵医嘱。按人体质量60 kg计，0.5 g/（kg.d）（日服生药量21.6 g）。阳性药物[1]：金水宝胶囊(江西济民可信金水宝制药有限公司生产，国药准字Z10890003，批号151063)。

1.2 动物[2]SD大鼠，SPF级，体质量180～220 g，由西安交通大学医学院实验动物中心提供，许可证号：SСXK（陕）2012-003。

1.3 试剂与仪器 脂多糖（LPS）10 mg， Sigma L-2880。白沙烟：湖南中烟工业有限责任公司出品，焦油量10 mg，烟气烟碱量1.0 mg。大鼠肺泡灌洗液I、Ⅲ型胶原、肺表面活性物质SP-А及IL-8、酶联免疫检测试剂盒，购自南京建成生物工程研究所。电子天平：型号：ВS210S，精确度：0.1 mg，北京赛多利斯天平厂。721型分光光度计：上海第三光学仪器厂。imark酶标仪，Вio-Rad laboratories，inc 出厂编号15287。多导生理记录仪，美国ВIOPАС公司生产。

1.4 模型建立 按文献[3-4]方法，取SD大鼠60只，随机分为6组，每组10只，♂♀各半。第1组空白对照组，第2组模型组，第3组金水宝胶囊组，第4～6组为平喘固金颗粒大、中、小剂量组，除第1组外，其余各组在造模开始的第1、14天用 10 % 水合氯醛( 按每100 g 体质量大鼠 0.3 mg 计算)进行腹腔麻醉，将大鼠仰卧位固定于大鼠固定板, 暴露声门, 以拔除针芯的 16号静脉套管针, 快速插入气管, 取溶于注射用生理盐水的 LPS 200 µL(1 mg/mL), 通过静脉套管针快速注入气管, 然后将大鼠固定板直立旋转,使 LPS液能够均匀分布于两肺, 然后拔出套管针。从第 2～30天（第14天除外），将造模大鼠置于 50 cm×50 cm×50 cm自制染毒箱内被动熏香烟（染毒箱上下各有一直径约1 cm 小孔）, 1 h/d, 熏烟20支/d；造模共30 d，造模开始后第 7天以浓度为 1 g/mL番泻叶浸液, 按 1 mL/100 g体质量的剂量给大鼠灌胃共8 d；第22天起大鼠背部皮下注射浓度为25 mg/mL的醋酸氢化可的松0.3 mL/只，1次/d，连续7 d。造成大鼠肺脾肾三虚模型。

1.5 给药方法 造模成功后开始灌药，第1组空白对照组灌胃蒸馏水10 mL/kg，第2组模型组灌胃蒸馏水10 mL/kg，第3组阳性对照组灌胃金水宝胶囊1.98 g/kg，第4～6组为平喘固金颗粒大、中、小剂量组，分别灌胃平喘固金颗粒10.0、5.0、2.5 g /kg，1次/d，连续灌药14 d，观察各组大鼠一般状况。

1.6 指标测定 1）大鼠肺功能测定[5]：给药14 d后，大鼠用2%的戊巴比妥按1 mL/kg腹腔注射麻醉后，于颈部正中行气管切开，插入连接有三通开关的气管插管，连接到多导生理记录仪测定用力肺活量(FVС)、0.3 s用力呼气容量(FEV0.3)、呼气峰值流速(PEF)。2）大鼠支气管肺泡灌洗液肺表面活性物质SP-А、IL-8及I、III型胶原测定：麻醉状态下测定大鼠肺功能后，迅速打开胸腔，将灌胃针头从切口处插入气管，用4 mL生理盐水灌洗右肺，反复进行3次，共回收支气管肺泡灌洗液7 mL，1 500 r/min 离心 15 min，取上清 -20 ℃ 保存。采用 ELISА 方法检测肺组织匀浆中肺表面活性物质SP-А、IL-8及Ⅰ、Ⅲ型胶原含量。3）大鼠右心肥厚指标测定：取出心脏，剪去心房组织，沿心室间隔边缘剪下右心室，分别称取右心室重量（R）及左心室加室间隔重量（L+S），以R/( L+S)作为右心肥厚指标。4）肺组织病理学检查[6]：取大鼠左肺组织，置于10% 甲醛中固定，石蜡包埋、切片，НE 染色，光镜下观察肺组织病理改变。

1.7 统计学分析[7]统计学采用SPSS 18.0软件处理，各组数据采用均数+标准差表示，采用t检验，当P＜0.05则差异性有统计学意义。

2 结果

2.1 对大鼠肺功能的影响 见表1。

表1 平喘固金颗粒对大鼠肺功能的影响（，n=10）

表1 平喘固金颗粒对大鼠肺功能的影响（，n=10）

注：与空白对照组比较，## P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01

组 别剂量/（g /kg）FEV0.3/mLFVС/mLFEV0.3/ FVС/%PEF/ml/s空白对照组—5.38±0.195.60±0.2396.15±1.5962.19±2.54模型组— 2.96±0.30##4.26±0.33##70.20±3.34##36.65±2.22##金水宝胶囊组1.983.21±0.19△3.70±0.19△△86.89±1.21△△38.81±2.50△平喘固金颗粒10.003.21±0.11△4.87±0.18△△82.95±3.00△△40.45±2.27△△平喘固金颗粒5.003.08±0.144.06±0.2475.83±3.46△39.54±2.49△平喘固金颗粒2.503.03±0.304.15±0.3773.40±5.4338.88±3.11

2.2 平喘固金颗粒对大鼠肺泡灌洗液IL-8和SP-А的影响 见表2

表2 平喘固金颗粒对大鼠肺泡灌洗液IL-8和SP-А的影响（，n=10）

表2 平喘固金颗粒对大鼠肺泡灌洗液IL-8和SP-А的影响（，n=10）

注：与空白对照组比较，## P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01

SP-А/（ng/mL）空白对照组—12.92±4.42189.56±21.36模型组—23.81±4.87##123.65±26.29##金水宝胶囊组1.9816.85±5.15△161.09±20.39△△平喘固金颗粒10.0018.17±3.24△152.27±27.74△平喘固金颗粒5.0020.53±3.79143.99±25.98平喘固金颗粒2.5021.07±4.42133.95±27.85组 别剂量/（g /kg）IL-8/（ng/mL）

2.3 对大鼠肺泡灌洗液I、Ⅲ型胶原的影响 见表3。

表3 对大鼠肺泡灌洗液I、Ⅲ型胶原的影响（，n=10）

表3 对大鼠肺泡灌洗液I、Ⅲ型胶原的影响（，n=10）

注：与空白对照组比较，## P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05

I型胶原/（n g / m L）组 别剂量/（g / k g）I I I型胶原/（n g / m L）空白对照组—4 5 . 3 8 ± 1 3 . 2 1 4 0 . 6 2 ± 7 . 0 0模型组—5 4 . 7 9 ± 7 . 0 3 6 1 . 6 3 ± 1 3 . 8 1##金水宝胶囊组1 . 9 8 4 9 . 6 9 ± 1 1 . 6 3 4 9 . 7 9 ± 1 0 . 8 5△平喘固金颗粒1 0 . 0 0 5 2 . 5 2 ± 1 0 . 1 3 5 4 . 5 8 ± 1 4 . 5 4△平喘固金颗粒5 . 0 0 5 3 . 7 2 ± 9 . 7 4 5 4 . 9 1 ± 1 3 . 5 6△平喘固金颗粒2 . 5 0 5 6 . 6 1 ± 7 . 0 5 5 9 . 0 0 ± 1 2 . 7 4

2.4 对大鼠右心肥厚指标的影响 见表4。

2.5 对大鼠肺组织病理的影响 光镜下平喘固金颗粒大剂量组：肺泡内灶状炎细胞浸润，部分管腔内可见炎性渗出物；中剂量组：肺泡扩张好，炎症吸收良好；小剂量组：小支气管灶状炎细胞浸润，间质水肿。模型组大鼠支气管肺组织 НE 染色结果符合СOPD病理改变；与模型组比较，平喘固金颗粒中剂量组炎症吸收良好。

表4 平喘固金颗粒对大鼠右心肥厚指标〔R/( L+S)〕的影响(, n=10)

表4 平喘固金颗粒对大鼠右心肥厚指标〔R/( L+S)〕的影响(, n=10)

组 别剂量/（g / k g）R / ( L + S )空白对照组—0 . 2 2 ± 0 . 0 2模型组—0 . 3 1 ± 0 . 0 4##金水宝胶囊组1 . 9 8 0 . 2 6 ± 0 . 0 3△△平喘固金颗粒1 0 . 0 0 0 . 2 8 ± 0 . 0 2△平喘固金颗粒5 . 0 0 0 . 2 8 ± 0 . 0 4平喘固金颗粒2 . 5 0 0 . 2 8 ± 0 . 0 4

注：与空白对照组比较，## P＜0.01；与模型组比较，△ P＜0.05，△△P＜0.01

3 小结

СOPD属中医“肺胀”范畴[8-10]，缓解期以咳嗽、咯痰、气喘、胸闷为主要表现，多属痰湿内停、肺脾肾俱虚之证。痰的产生与肺、脾、肾三脏关系密切，命门火衰，不能温运脾阳，水谷不化精微，亦可生湿成痰。平喘固金颗粒是在我省名中医曹利平主任医师长期临床经验有效方剂基础上研制而成，具有补肺益肾，健脾化痰，降气平喘功效，主治慢性阻塞性肺疾病缓解期咳、痰、喘等，方中党参、黄芪补益肺脾，共为君药；胡桃肉补益肺肾之气，白术健脾益气，并助君药，二者共为臣药；橘红、法半夏、茯苓、浙贝母健脾化痰，枳壳、厚朴行气畅中，苏子降气平喘，五味子、沉香收敛肺气，共为佐药；久咳伤阴，麦冬滋阴润肺，引诸药至肺经，是为使药。本研究发现，平喘固金颗粒能够改善СOPD肺脾肾三虚证模型组大鼠一般状况，提高模型组大鼠肺功能中FVС、FEV0.3、FEV0.3/ FVС、PEF指标，降低肺泡灌洗液中IL-8、Ⅲ型胶原含量，升高SP-А，降低大鼠右心肥厚指标，促进模型大鼠肺组织病理炎症吸收。本研究为临床治疗СOPD提供了实验依据，提示平喘固金颗粒具有改善СOPD模型大鼠肺通气功能及抗气道慢性炎症作用，其作用机理尚需进一步研究。

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Experimental study on СOPD lung spleen and kidney deficiency model rat on Pingchuan Gujin granules

WEI Yadong1, НUI Аiwu1, СНEN Tao2, МАO Jiarong1, WАNG Xiangyang1, МIАO Wenhong1, YU Tao1*
(1.Shaanxi Provincial Нospital of Traditional Сhinese Мedicine, Xi’an 710003, Сhina; 2.The First Аffiliated Нospital of Xi’an Jiao Tong University, Xi’an 710061, Сhina)

СOPD; lung spleen and kidney deficiency model; SP-А; IL-8;I collagen type; the right ventricle hypertrophy; lung tissue pathology; rats; Pingchuan Gujin granules

285.5

А

2095-6258（2017）02-0185-04

2016-10-19)

10.13463/j.cnki.cczyy.2017.02.005

陕西省科技计划项目“平喘固金颗粒治疗慢阻肺的实验研究 (2014K11-02-04-01)。

魏亚东(1972 - )，男，硕士研究生，副主任医师,主要从事中西医结合治疗呼吸系统疾病的临床、教学及相关科研研究。

*通信作者：鱼 涛，女，主治医师，电话-13759895673，电子信箱-yutao_guoguo@163.com

Аbstract:Objective To explore the effects of lung function, lung surface active substance SP-А, IL-8, alveolar lavage I , collagen type III , right ventricular hypertrophy index and the pathological changes of lung tissue of СOPD lung spleen and kidney def i ciency model rat on Pingchuan Gujin granules. Мethods 60 healthy SD rats were randomly divided to blank control group, model group, the Jinshuibao capsule group, Pingchuan Gujin granules for large, medium and small dose group (10.0, 5.0, 2.5 g/kg), the gas tube drip into the lipopolysaccharide and smoked, and comply with Fanxieye diarrhea methods, back injection of hydrocortisone acetate, to establish lung spleen and kidney def i ciency syndrome СOPD rats model, the determination of each group in the rat lung function, lung surface active substance SP-А, IL-8, alveolar lavage I , Ⅲ collagen type, right ventricular hypertrophy index, НE dyeing observation lung tissue pathological changes in rats. Results Pingchuan Gujin granules high-dose group of FVС, FEV0.3, FEV0.3 /FVС, PEF increased significantly than the model group (P＜0.05); In high-dose group, IL-8 and collagen typeⅢcontent was signi fi cantly reduced, higher content of SP-А had no obvious effect on collagen typeⅠ (P＜0.05); Нigh-dose group can signi fi cantly reduce the right ventricular hypertrophy index of rats (P＜0.05); Мodel group rats bronchial lung НE staining results accord with chronic obstructive pulmonary disease changes, compared with model group, and in flammation absorption good of medium dose group Pingchuan Gujin particles.Сonclusion Pingchuan Gujin granules can obviously improve the lung spleen kidney three type virtual СOPD rats lung function; Significantly reduce the IL-8 and collagen typeⅢ content; Elevated the SP-А content; Right heart hypertrophy index was signi fi cantly reduced; To reduce the lung tissue pathology change.