二甲双胍对快速老化模型SAMP8小鼠体重及血液学参数的影响

田 枫 , 张 颖 ， 李文婷 ， 周淑佩

(北京大学医学部实验动物科学部，北京海淀100191)

二甲双胍对快速老化模型SAMP8小鼠体重及血液学参数的影响

田 枫 , 张 颖 ， 李文婷 ， 周淑佩

(北京大学医学部实验动物科学部，北京海淀100191)

为探讨二甲双胍对SAMP8小鼠体重及血液学参数的影响，将40只雄性SAMP8小鼠分为二甲双胍低剂量(50 mg/kg体重)、中剂量(100 mg/kg体重)、高剂量(200 mg/kg体重)实验组及空白对照组，实验组每日按小鼠体重灌胃不同剂量的二甲双胍，空白对照组每日灌胃生理盐水，观察小鼠的体重及血液细胞学和血清生化指标。结果显示，3个实验组与空白对照组相比，仅低剂量组和中剂量组小鼠AST 较空白对照组显著降低(P<0.05)，小鼠体重、血液学细胞学指标和其他血清生化指标均与正常对照组相比无显著性差异。试验结果表明，二甲双胍对SAMP8小鼠体重及血液学参数影响较小。

二甲双胍 ； SAMP8小鼠 ； 体重 ； 血液学

医药界经过50年的临床验证，二甲双胍作为一种经济、安全有效的药物不仅在糖尿病治疗领域发挥独特的作用，并且其在抗衰老、减肥、治疗非酒精性脂肪肝等方面亦都显示出一定的疗效[1-2]。二甲双胍作为抗衰老药物使用时，是否会对机体的血糖、体重、肝功、肾功、血脂等指标产生影响，是本文关注的重点。试验以目前公认的比较理想的自然衰老痴呆模型SAMP8小鼠作为研究对象，观察二甲双胍对SAMP8小鼠体重及血液学参数的影响，为二甲双胍作为抗衰老药物的应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 清洁级SAMP8小鼠，40只，雄性，26～28w，26～32g，由北京大学医学部实验动物科学部提供，合格证号：SCXK(京)2011-0012。饲养于北京大学医学部实验动物科学部屏障环境中，合格证号：SYXK(京)2011-0039。饲喂全价SPF 级大、小鼠繁殖饲料，由北京科澳协力饲料有限公司生产，许可证号为SCXK(京) 2014-0010。

1.2 试验药品 盐酸二甲双胍，美仑生物，Lot:A0830A。0.9%氯化钠注射液，石家庄四药有限公司，批号为141231425。血清生化指标测定试剂盒，均购自Mindray公司。

1.3 试验分组及给药方法 SAMP8小鼠随机分为4组，每组10只小鼠，即二甲双胍低剂量组(50 mg/kg体重)、二甲双胍中剂量组(100 mg/kg体重)、二甲双胍高剂量组(200 mg/kg体重)及空白对照组。实验组共30只小鼠，每日上午固定时间按照体重灌胃不同剂量的药物，空白对照组灌胃等体积的生理盐水连续灌胃30 d。试验操作过程中按照动物福利的原则给予人道的关怀。

1.4 体重测定 各组小鼠自试验开始，每周上午固定时间测定体重1次，直至小鼠12月龄时试验结束。1.5 血液细胞学指标的测定 停药2周后进行血液细胞学检测。小鼠眼眶静脉丛取全血20 μL 加入3 mL血球稀释液中应用NIKON自动血球计数仪进行白细胞总数(WBC) 、红细胞数(RBC) 、血红蛋白(HGB) 、血细胞比容(HCT) 、平均红细胞体积(MCV)、平均血红蛋白量(MCH)、平均血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞体积 (RDW)、血小板计数(PLT)、血小板比积(PCT)、平均血小板体积(MPV)、血小板平均分布宽度 (PDW)、淋巴细胞数(LYM)、中间细胞数(MID)、嗜中性粒细胞数 (GRN)、淋巴细胞百分比(LYM%)、中间细胞百分比(MID%)、嗜中性粒细胞百分比(GRN%)的测定。1.6 血液生化指标的测定 停药2周后进行血清生化指标的检测。小鼠禁食12 h，眼眶静脉丛取血，离心分离血清，应用Mindray BS-180全自动生化分析仪测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)，天门冬氨酸氨基转移酶(AST)，，总胆固醇(TC)，甘油三酯(TG)，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)，肌酐(CREA)，尿素氮(UA)，葡萄糖(GLU)。

1.7 统计学分析数据分析采用GraphPad Prism 5统计软件，结果x±s表示，组间差异采用双尾Student'st检验，P<0.05为组间有统计学差异。

2 结果与分析

2.1 二甲双胍对SAMP8小鼠体重的影响 试验结果显示，自SAMP8小鼠6月龄试验开始时，3组试验小鼠给药过程中及停药后直至小鼠12月龄试验结束时，其体重与空白对照组相比均无显著变化(见中插彩版图1)。

2.2 二甲双胍对SAMP8小鼠血液细胞学参数的影响 试验结果显示，各实验组各项血液细胞学参数与空白对照组相比均无显著性差异，见表1。

表1 二甲双胍对SAMP8小鼠血液细胞学参数变化 (n=10)

(续表1)

组别MCHpgMCHCg/LRDW/%PLT×109/LPCT/%空白对照组17．0±0．6363．0±11．015．0±1．4834．0±167．30．4±0．1低剂量组16．9±1．6356．3±18．515．1±3．1568．5±64．30．2±0．1中剂量组16．0±0．5349．6±19．515．2±0．7841．7±150．10．3±0．1高剂量组16．8±0．6358．7±6．414．6±1．3829．0±144．50．4±0．1

(续表1)

组别MPV/%PDW/%LYM×109/LMID×109/LGRN×109/L空白对照组4．3±0．214．8±0．16．9±4．31．9±1．05．2±1．4低剂量组4．1±0．115．0±0．45．4±2．62．4±1．85．9±1．9中剂量组3．9±0．114．2±0．63．6±1．50．9±0．34．8±2．3高剂量组4．4±0．214．9±0．76．2±2．23．1±1．87．0±3．1

(续表1)

组别LYM/%MID/%GRN/%空白对照组46．0±12．513．8±3．640．1±14．7低剂量组44．9±12．315．7±7．339．4±6．6中剂量组36．5±20．010．0±1．253．5±19．4高剂量组37．4±11．213．5±4．843．6±21．2

2.3 二甲双胍对SAMP8小鼠血清生化指标的影响 结果显示，除低剂量组和中剂量组的AST与空白对照组相比显著降低(P<0.05)外，二甲双胍对SAMP8小鼠其他各项血清生化指标均无显著影响，结果见表2。

表2 二甲双胍对SAMP8小鼠小鼠血清生化指标 (n=10)

续表2

组别LDL⁃Cμmol/LUAμmol/LCREAμmol/LGLUμmol/L空白对照组0．6±0．19．7±0．452．5±1．34．6±0．6低剂量组0．7±0．110．8±1．454．3±3．54．6±1．5中剂量组0．6±0．19．2±2．755．2±5．24．5±1．8高剂量组0．7±0．110．4±2．657．7±3．64．5±0．9

*：P<0.05，与空白对照组相比

3 讨论

关于二甲双胍可延长寿命的研究，在线虫、小鼠乃至人类的试验中均有报道[3-4]，在应用快速老化模型SAMP8小鼠的抗衰老的研究中，我们的试验结果亦显示，二甲双胍确实对延长SAMP8小鼠的寿命有作用(另文报道)。二甲双胍是一种被普遍认可的降糖药物，那么二甲双胍在用于抗衰老药物时，其是否有副作用，是否会对体重正常的小鼠有降低体重的作用，对血液学指标方面有无影响，其作为抗衰老药物的安全性如何是需要探讨的问题。

二甲双胍目前己经被证实可以降低血糖、减轻体重、改善血脂，主要是改善TG 、 LDL-C及TC水平[5]。那么我们的试验结果是否与之一致呢？

血清学检测试验结果显示，对于血糖正常、血脂正常的SAMP8小鼠，在给予1个月的二甲双胍药物后，无论低、中、高实验组的小鼠与空白对照组相比均无显著变化，提示二甲双胍并不会对不患有糖尿病及高血脂症小鼠的血糖、血脂有降低的作用。

在对肝功能指标AST、AST检测后发现，低剂量组和中剂量组的AST与空白对照组相比显著降低(P<0.05)，但仍在正常范围值之内，由此提示二甲双胍对小鼠的肝功指标亦无不良影响。有文献报道，二甲双胍在治疗非酒精性脂肪肝患者时可显著降低血清转氨酶的水平，有50%患者恢复正常，同时胰岛素敏感性提高，肝脏的体积减少约20%，相似的结果在动物研究中也得到了证实[5]。，但这是指对血清转氨酶升高情况下降低作用而言的。另外在临床上虽然有服用盐酸二甲双胍致肝损害的个例报道，但应该属于个例现象[6-7]。

在对肾功能指标CREA、UA 检测后发现，3个试验组与空白对照组相比两个参数均无显著变化，由此推断二甲双胍亦不会对小鼠肾功能产生负面作用。而且有文献报道，二甲双胍对糖尿病肾病小鼠的肾脏还具有保护作用[8]。

至于二甲双胍在减肥中的应用，本试验观察了SAMP8小鼠 从6月龄到12月龄的体重情况，包括服用1个月二甲双胍期及停药后的后续5个月的情况，发现3个实验组与空白对照组相比体重均无显著变化。尽管灌胃二甲双胍后，可能是二甲双胍在胃内快速溶解后高浓度附着在消化道黏膜上，从而产生了刺激作用，实验组出现了胃肠道反应的不良现象，但实验组小鼠体重并未显著降低，对于二甲双胍用于减肥的研究，还有待进一步探讨。

在对SAMP8小鼠血液细胞学指标观察比较后发现，各实验组与空白对照组在各项参数上均无显著差异，表明二甲双胍对小鼠的血液细胞学的指标亦无明显影响。

4 结论

综上所述，二甲双胍在作为抗衰老的药物时，对血糖正常、体重正常、血脂、肾功等指标正常的小鼠并无显著影响，说明其安全性较好，副作用较小，可能是一种适宜长期使用的抗衰老药物。

[1] 甘立霞. 二甲双胍的临床作用及研究进展[J].现代医药卫生，2016，32(11)：1601-1605.

[2] Barzilai N, Crandall J P, Kritchevsky S B,etal. Metformin as a Tool to Target Aging[J].Cell Metab., 2016，23(6)：1060-1065.

[3] 齐赫，刘婷婷，李国荣.二甲双胍延长寿命的作用及其作用机制[J].中国临床药理学与治疗学杂志，2012，17(11)：1295-1301.

[4] 董丹，张立，邹洪斌.衰老与EMT关系及限食和二甲双胍对二者作用[J].中国公共卫生，2011，21(11)：1439-1441.

[5] 秦颖. 二甲双胍临床应用概述[J].继续医学教育，2012，26(3)：46-48.

[6] 任爱民，李红，沈淑风，等.滥服盐酸二甲双肌减肥致肝损害[J].药物不良反应杂志，2012， 14( 3)：167-168.

[7] 毛璐.二甲双肌致肝损害个案汇总分析[J].中国医院药学杂志，2012，32( 10)：814-815.

[8] 刘林卉，董成龙，苏东明.二甲双肌对糖尿病肾病小鼠肾脏保护作用[J].江苏医药，2016，42(5)：504-508.

Effects of Metforminon on Body weight, Hematology Indexes in SAMP8 Mice

TIAN Feng ， ZHANG Ying ， LI Wen-ting ， ZHOU Shu-pei

(Department of Laboratory Animal Science, Peking University Health Center，Beijing 100191,China)

The experiment was designed to investigate the effects of metforminon on body weights, and hematology indexes in SAMP8 mice, Forty male SAMP8 mice were randomly divided into three experimental groups according to different doses and blank control group. Ten experimental mice in each group were administrated by means of intragastric administration with 50mg/kg, 100mg/kg, 200mg/kg metformin in accordance with the body weight daily, respectively.At the same time the control mice were treated with saline.Results showed that AST of 50mg/kg and 100mg/kg experimental group was higher than that of control group. However, the three doses had no significant effect on body weights and other hematology indexes in SAMP8 mice.

Metformin ; SAMP8 mice ; Body weight;Hematology indexes

ZHOU Shu-pei

2016-12-05

北京高等学校青年英才计划项目(YETP0057)

田枫(1973-)， 女，副主任技师，博士，主要从事实验动物研究工作，E-mail:fengtian_38@163.com

周淑佩，E-mail:13521690926@163.com

S853

A

0529-6005(2017)03-0100-03