气相色谱法测定经大孔树脂醇制备的二仙汤样品中残留有机溶剂

2017-04-18李燕思司梁宏

实用医药杂志 2017年4期

关键词：对二甲苯二仙庚烷

李燕思，鲁毅，杨波，司梁宏

药学

气相色谱法测定经大孔树脂醇制备的二仙汤样品中残留有机溶剂

李燕思，鲁毅，杨波，司梁宏＊

气相色谱法；有机溶剂残留；二仙汤

二仙汤是张伯讷教授50年代创制的方剂，全方由温肾益精养血药仙茅、淫羊藿、八戟天、当归和滋阴泻火药知母、黄檗组成，主要用于更年期综合征的治疗和抗衰老，临床应用40余年，疗效确切，载入多部中医方剂学著作。近年来其药理活性不断有文献报道，而有关提取、洗脱工艺及质量标准的报道却较少。大孔树脂作为一种有效的分离纯化手段，运用于中药有效成分的提取分离中，并取得了良好的效果。但有不少人提出大孔树脂苯系列残留物安全性问题［1，2］。因此，为了考察经大孔树脂制备的中药二仙汤样品中残留物乙醇、正己烷、苯、甲苯、对二甲苯、苯乙烯和二乙烯苯等七种有机溶剂的安全性，采用气相色谱（GC）法进行测定。

1 材料与仪器

1.1 仪器岛津GC-14B气相色谱仪，FID检测器，N2000色谱工作站；Mettler AE 240型电子天平（瑞士梅特勒—托利多有限公司）；KQ3200型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药二仙汤样品（四五四医院自制）；乙醇、正己烷、苯、甲苯、对二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯、正庚烷、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验SupeLcoWAX10 30m×0.25mm×0.25μm毛细管柱，FID检测。载气为高纯氮（99.99%），分流比30∶1，进样量为0.2μl。毛细管柱初始柱温60℃，进样口温度180℃，检测器温度220℃。升温程序为60℃恒温1.1min，40℃/min升温至200℃，保持5min［3］。在上述色谱条件下，正己烷、乙醇、苯、甲苯、对二甲苯、苯乙烯和二乙烯苯色谱峰的理论塔板数不低于5000；且与内标物正庚烷的色谱峰分离度均>1.5，对照品及供试品的色谱图见图1。

图1 二仙汤GC色谱图

2.2 溶液配制

2.2.1 供试品溶液精密称取醇提二仙汤原料药1.0 g，用DMF溶解并定容于10.0ml量瓶中，依法配制成待测供试品溶液。

2.2.2 对照品溶液精密称取正己烷502.8mg、无水乙醇507.9mg、苯10.78mg、甲苯505.6mg、对二甲苯507.6mg、苯乙烯503.2mg和二乙烯苯502.6mg，以DMF溶解并定容至100ml量瓶中，作为标准对照品储备液；精密称取分析纯正庚烷509.1mg，以DMF溶解并定容于100ml量瓶中，作为内标物储备液。

2.3 线性关系考察精密吸取上述标准对照品储备液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0和10.0ml，分别置于6个50ml量瓶，加入2.0ml内标物储备液，DMF定容至刻度，混匀，配制成标准溶液系列。依法进行测定，以待测组分与内标物的峰面积比（A）与对相应的待测组分浓度（C）进行线性回归，分别得标准曲线方程及线性范围：A正己烷=0.0083C-0.0456（r=0.9999），10.06～1006.0μg/ml；A乙醇=0.0051C+0.0574 （r= 0.9977），10.16～1016.0μg/ml；A苯=0.1183C+0.0342（r=0.9968），0.2156～21.56μg/ml；A甲苯=0.0115C+ 0.1705 （r=0.9975），10.11～1011.0μg/ml；A对二甲苯= 0.0116C+0.1556（r=0.9975），10.15～1015.0μg/ml；A苯乙烯=0.012C+0.1493（r=0.9975），10.05～1005.0μg/ ml；A二乙烯苯=0.0098C+0.1477 （r=0.9979），10.05～1005.0μg/ml。

2.4 检测限考察精密移取“2.3”项下的最低浓度标准溶液，通过不同比例稀释后进行测定，信噪比值约为3时，为最低检测限。正己烷检测限约为5.030μg/ml，乙醇约为 5.080μg/ml，苯约为0.1294μg/ml，甲苯约为5.055μg/ml，对二甲苯约为5.075μg/ml，苯乙烯约为5.03μg/ml，二乙烯苯约为5.540μg/m l。

2.5 精密度试验精密移取“2.3”项下的中间浓度标准溶液，按气相色谱测定条件连续进样5次，计算正己烷、乙醇、苯、甲苯、对二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯和内标物正庚烷的峰面积比值，结果表明RSD分别为2.80%，3.48%，2.39%，3.97%，3.40%，4.83%，3.45%。

2.6 稳定性试验精密称取供试品原料药，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，室温放置，分别于0、4、8、12、24 h按“2.1”项下色谱条件分析。计算正己烷、乙醇、苯、甲苯、对二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯和内标物正庚烷的峰面积比值，结果表明RSD分别为 2.83%，2.52%，3.70%，3.16，%，0.97%，2.18%，3.24%。

2.7 加样回收率试验精密称取已知含量的供试品1.0 g，加入一定量的标准对照品储备液和内标储备液，按“2.2.1”项下方法配制成加样回收率溶液，进行测定，结果见表1。

2.8 含量测定按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，测定3个批次的有机溶剂残留量，见表2。

表1 加样回收率测定结果

3 讨论

3.1 溶剂的选择由于待测的有机溶剂种类多且含量少，导致峰面积较小，故先后摸索了几种溶剂，如水、DMF和DMSO。考虑二仙汤原料药难溶于水，大多数有机溶剂在水中溶解度小，在DMF、DMSO中溶解度较大，但DMSO对眼睛、皮肤等更具刺激性，且故采用DMF作为溶剂。

3.2 进样方式的选择顶空进样适用于容易挥发的样品［4］，待定的有机溶剂种类较多，沸点差距较大；若采用顶空进样法，平衡时间较长［5，6］，考虑检测效率，采用直接进样方式。

表2 醇提二仙汤原料药残留量测定结果（μg/m l）

3.3 程序升温速率的选择对不同程序升温速率（10、30、40、60、80℃/min）进行比较，发现升温速率越快，基线的漂移就越严重，乙醇峰和苯峰会出现重叠［7，8］，为了缩短分析时间且各峰不相互干扰，最终选定40℃/min程序升温，使7种有机溶剂得到完全分离，60℃保持1min，让沸点低的溶剂正己烷和正庚烷（内标）析出，40℃/min升温至200℃，让乙醇、苯、甲苯、对二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯依次分离，200℃保持5min，让沸点高杂质溶剂冲出柱子，以确保试验准确，选用正庚烷做内标不仅可以和待测组分有效分离，又能避免由于进样体积误差对测定结果的影响，从而获得比外标法更好的测定精密度和回收率［9］。

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［2016－09－18收稿，2016－10－15修回］

［本文编辑：刘一洋］

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