高血压状态下长期使用葛根素对大鼠血生化等指标的影响

施伟丽，徐 浩，丛伟红，陈可冀

高血压状态下长期使用葛根素对大鼠血生化等指标的影响

施伟丽，徐 浩，丛伟红，陈可冀

目的 探讨长期高血压状态下使用葛根素对自发性高血压大鼠(SHR)红细胞、肝肾功能的影响。方法 Wistar kyoto(WKY)大鼠为对照组，自发性高血压大鼠随机分为模型组、氯沙坦钾组、葛根素高剂量组80 mg/(kg·d)和葛根素常规剂量组40 mg/(kg·d)，给药10周，检测血常规、肝肾功相关指标。结果 与模型组比较，葛根素高剂量组和常规剂量组均能明显减少红细胞数量、降低红细胞压积，减少血红蛋白量(P<0.05或P<0.01)，氯沙坦钾组与模型组比较上述指标无显著变化(P>0.05)；氯沙坦钾组天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶、尿素、尿素氮水平较模型组明显降低(P<0.05或P<0.01)，高剂量葛根素组上述指标与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)，但有下降趋势；常规剂量葛根素组天门冬氨酸氨基转移酶较模型组明显降低(P<0.05)；各组间胆红素水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 长期给药对高血压损伤的肝肾功能、红细胞有保护作用，本实验中未见明显溶血反应。

高血压；葛根素；红细胞；胆红素；肝功能；肾功能；自发性高血压；大鼠

葛根素是从中药葛根中提取的一种单一成分，广泛用于冠心病、心绞痛、高血压、缺血性脑血管病等，并取得较好的疗效，但临床也有一些不良反应出现，最常见的不良反应是急性血管内溶血和对肝肾功能的影响。高血压状态下机体的生理病理有其自己的特征，为了解葛根素对高压状态下血液生化等指标的影响。本实验以自发性高血压大鼠(SHR)为模型，观察长期使用葛根素对SHR血细胞、胆红素、肝肾功能的影响，以期为葛根素临床用药提供参考。

1 材料与方法

1.1 动物 9周龄京东SPF级WKY雄性大鼠10只，SPF级自发性高血压雄性大鼠SHR 45只，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，动物合格证号：11400700158084，许可证号：SCXK(京)：2012-0001。饲养于西苑医院SPF级动物房，适应性饲养1周后随机分为5组，对照组(WKY)10只，模型组15只，氯沙坦组10只、葛根素高剂量组10只、葛根素常规剂量组10只。

1.2 药物 氯沙坦钾片(每片100 mg)由杭州默沙东制药有限公司提供，生产批号：L016172；注射用葛根素冻干粉剂(每瓶0.2 g)由山东瑞阳制药有限公司提供，生产批号：16041418。

1.3 耗材及仪器 2 mL EDTA K3采血管，生产批号D160433W；5 mL 血清促凝管(Z)，生产批号A16013WC，由西苑医院提供；全自动血液分析仪(日本东亚SYSMEX株式会Sysmex XE-5000)、全自动生化分析仪(瑞士罗氏公司Cobas8000)由西苑医院检验科提供。

1.4 给药方法 对照组、模型组每天予生理盐水1 mL生理盐水腹腔注射，氯沙坦钾片组按31.5 mg/(kg·d)灌胃，高剂量葛根素组按80 mg/(kg·d)腹腔注射，常规剂量组给药剂量40 mg/(kg·d)，给药10周。

1.5 观察指标

1.5.1 大鼠体质量及一般情况观察 各组大鼠每周称量体重一次，观察各组大鼠体重变化，每天给药时观察大鼠精神状态、活动情况及毛色。

1.5.2 大鼠溶血指标检测 实验结束后腹主动脉采血，检测血浆红细胞数量、红细胞压积、平均红细胞体积、红细胞分布宽度；血红蛋白量、平均血红蛋白含量、平均血红蛋白浓度；血清直接、间接胆红素及总胆红素水平(因检验前剔除了凝固的血样，故血常规相关指标的样品数量与生化指标不一致)。

1.5.3 大鼠肝肾功能指标检测 肝功能指标：天门冬氨酸氨基转移酶 、丙氨酸氨基转移酶、γ谷氨酰转肽酶；肾功能指标：肌酐、尿酸、尿素、尿素氮。

2 结 果

2.1 大鼠一般情况及体重观察 对照组大鼠比较安静，喜睡，胆小易惊，毛色发黄；模型组大鼠易受外界影响，活跃，毛色发白，给药组与模型组比较未见明显不同。对照组体重较模型组显著升高(P<0.05或P<0.01)，药物组各组间体重比较差异无统计学意义(P>0.05)。详见表1。

g

2.2 葛根素对SHR溶血指标的影响 红细胞数量、形态变化及胆红素水平是间接反映溶血状态的常用指标，与对照组比较，模型组红细胞数量、红细胞平均体积显著升高(P<0.01)；葛根素大剂量组、常规剂量组红细胞数量、红细胞压积与模型组比较明显降低(P<0.05或P<0.01)；氯沙坦钾组红细胞各项指标与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)；模型组血红蛋白、平均血红蛋白浓度与对照组比较无统计学意义(P>0.05)，但均有升高趋势；葛根素大剂量组常规剂量组血红蛋白较模型组显著降低(P<0.05)，氯沙坦钾组血红蛋白各项指标与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)；各组间胆红素指标比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。详见表2、表3、表4。

组别n红细胞计数(×1012/L)红细胞压积(L/L)红细胞平均体积(fl)红细胞分布宽度(%)对照组77.90±0.24 0.37±0.0147.21±1.2416.82±1.96模型组148.57±0.261)0.37±0.0143.76±1.861)20.40±4.84氯沙坦钾组78.48±0.35 0.37±0.0143.91±1.5518.80±2.43葛根素高剂量组78.17±0.402)0.35±0.013)43.65±1.6022.50±6.61葛根素常规剂量组98.21±0.482)0.36±0.022)44.04±1.1122.02±5.83 与对照组比较,1)P<0.01;与模型组比较,2)P<0.05,3)P<0.01。

组别n血红蛋白(g/L)平均血红蛋白含量(pg)平均血红蛋白浓度(g/L)对照组7127.57±4.79 16.12±0.21341.57±8.56模型组14130.28±3.17 15.20±0.331)347.78±9.31氯沙坦钾组7130.71±3.90 15.41±0.25351.57±7.52葛根素高剂量组7124.28±5.622)3)15.22±0.13348.71±11.94葛根素常规剂量组9124.55±8.172)3)15.15±0.22344.33±7.23 与对照组比较,1)P<0.01;与模型组比较,2)P<0.05;与氯沙坦钾组比较,3)P<0.05。

组别n间接胆红素(μmol/L)直接胆红素(μmol/L)总胆红素(μmol/L)对照组100.39±0.250.50±0.320.89±0.47模型组150.33±0.260.66±0.361.00±0.51氯沙坦钾组100.29±0.240.72±0.301.01±0.39葛根素高剂量组100.41±0.260.67±0.301.08±0.48葛根素常规剂量组100.34±0.260.64±0.340.98±0.40

2.3 葛根素对SHR肝功能的影响 模型组天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)与对照组比较均明显升高(P<0.01)；与模型组比较，氯沙坦钾组AST、ALT显著降低(P<0.05或P<0.01)；葛根素常规剂量组AST较模型组明显降低(P<0.05)；葛根素高剂量AST、ALT与模型组比较差异无显著性(P>0.05)；各组间谷氨酰转肽酶(GGT)较模型组差异无统计学意义(P>0.05)，但药物组与模型组比较有下降趋势。详见表5。

组别nAST(U/L)ALT(U/L)GGT(U/L)对照组10121.76±15.98 36.46±4.05 0.70±0.31模型组15227.66±32.491)48.26±3.661)1.00±0.78氯沙坦钾组10196.30±40.832)42.38±4.323)0.80±0.38葛根素高剂量组10211.91±44.18 47.02±6.244)0.64±0.46葛根素常规剂量组10200.40±32.852)46.10±5.93 0.63±0.59 与对照组比较,1)P<0.01;与模型组比较,2)P<0.05,3)P<0.01;与氯沙坦钾组比较,4)P<0.05。

2.4 葛根素对SHR肾功能的影响 与对照组比较，模型组尿酸、尿素、尿素氮明显升高(P<0.01)，血肌酐水平显著降低(P<0.01)；与模型组比较，葛根素组各项指标差异无统计学意义(P>0.05)，但有下降趋势；氯沙坦钾组尿素、尿素氮水平较模型组明显降低(P<0.05)。详见表6。

组别n肌酐(μmol/L)尿酸(μmol/L)尿素(mmol/L)尿素氮(mg/dL)对照组1037.40±3.1026.10±2.42 5.94±0.4516.63±1.25模型组1528.47±3.741)70.07±34.451)8.61±0.961)24.12±2.701)氯沙坦钾组1028.30±2.5858.20±27.497.38±0.832)20.66±2.322)葛根素高剂量组1028.00±5.2359.10±24.307.64±1.6721.39±4.68葛根素常规剂量组1027.40±2.6347.30±19.148.07±1.0222.60±2.84 与对照组比较,1)P<0.01;与模型组比较,2)P<0.05。

3 讨 论

葛根素是从中药葛根中提取的主要成分，有降低心肌耗氧量、减慢心率、抗氧化应激、保护内皮等功能[1]，在冠心病、心肌缺血再灌注损伤、缺血性脑卒中、高血压病、老年性痴呆等心脑血管疾病的治疗中取得较好的疗效。同时葛根素的不良反应也不容忽视，其中最重要的是急性血管内溶血及对肝肾功能的损伤。临床高血压具有潜伏期长、病因复杂、迁延不愈等特点。

本实验以自发性高血压大鼠为模型，给药10周，观察了葛根素注射液对大鼠外周血红细胞、血红蛋白、血清胆红素这三个溶血指标的影响，同时检测了肝肾功能相关的指标。葛根素水溶性、脂溶性均较差，口服生物利用度低，静脉注射是临床常用给药方式，但由于大鼠自身特征，静脉不宜给药，参考文献后予腹腔注射给药[2- 3]。

本实验中葛根素大剂量组、常规剂量组与模型组比较，红细胞数量、红细胞压积、血红蛋白含量减少，猜测有两种可能，其一可能与葛根素溶血反应相关，葛根素致血管内少量红细胞溶解，使红细胞数量、压积及血红蛋白减少，但本实验中葛根素虽然降低了红细胞数量、红细胞压积、血红蛋白含量，但胆红素、平均血红蛋白浓度、平均血红蛋白含量与模型组比较均无明显改变，即葛根素组的溶血指标没有出现趋势一致的显著变化。另一种可能是葛根素的药效作用使红细胞数量、红细胞压积、血红蛋白含量减少。李偲偲等[4-8]研究证明红细胞与高血压密切相关，红细胞结构和功能的改变促进高血压的发生发展，如红细胞变形能力的降低，红细胞数量、黏度增加，红细胞增宽，红细胞膜黏弹性改变可损伤内皮功能，促进外周血管阻力增加，从而升高血压，同时因有效红细胞数量减少，血红蛋白代偿性增加。本实验中模型组红细胞计数较正常对照组明显升高，红细胞分布宽度、血红蛋白较对照组有升高趋势，提示红细胞形态改变参与了高血压的发生，与冯冰等[5]的研究相符。

葛根素治疗其他疾病的药理研究也提示，葛根素能降低红细胞黏度、改变红细胞变形能力、减少在病理状态下代偿性升高的血红蛋白[9-11]。临床葛根素注射液致溶血的不良反应确实存在，但目前机制仍不清楚。有学者认为葛根素注射液引起的溶血反应可能是因不溶性微粒引起的，或与葛根素原料中的异黄酮或三甲氧基葛根素有关[12- 13]，也可能与其辅料相关，因葛根素水溶性和脂溶性较差，医用丙二醇是葛根素最常用溶媒。孙露等[14]认为葛根素和丙二醇可能增加对方所致溶血概率。此外制剂生产厂家、研究对象以及给药方式等也可能是葛根素导致溶血反应的原因。

另外本实验中SHR体重明显低于其对照品系WKY组，而药物组对大鼠体重没有影响；同时模型组肝功能、肾功能指标也较对照组升高，提示随着血压的升高，模型组肝肾功能出现损伤，而氯沙坦、葛根素组降低肝肾功能相关指标，提示葛根素能保护肝肾功能，这与付荣国等[15-17]研究的葛根素对肾脏的保护作用及杨晓敏等[18-20]研究的葛根素保护肝功能的作用一致。但本实验中药物对肝肾功能的保护作用源于药物本身还是依赖于药物降压后的效果尚待深入研究。分析文献中报道的临床中使用葛根素后出现肝肾损伤的案例可能与病人体质本身差异、伴随其他疾病或者联合使用其他药物有关，尤其对已经发生肝、肾功损伤的个体应谨慎用药。

本实验数据提示，长期高血压状态下大鼠的肝肾功会出现损伤，红细胞相关指标发生异常，葛根素长期腹腔注射能改善高血压大鼠的肝肾功能，调节红细胞水平。本实验中葛根素未发现明显的不良反应事件，以上数据谨为葛根素在高血压病的临床应用提供参考。

[1] Zhou Y，Zhang H，Peng C.Puerarin：a review of pharmacological effects[J].Phytother Res，2014，28(7)：961-975.

[2] Li W，Zhao W，Wu Q，et al. Puerarin improves diabetic aorta injury by inhibiting NADPH oxidase-derived oxidative stress in STZ-induced diabetic rats[J].J Diabetes Res，2016，2016：8541520.

[3] Zou ZJ，Liu ZH，Gong MJ，et al. Intervention effects of puerarin on blood stasis in rats revealed by a (1)H NMR-based metabonomic approach[J].Phytomedicine，2015，22(3)：333-343.

[4] 李偲偲，胡元会，魏艺，等.老年高血压病人舒张压与血红蛋白、红细胞比容的相关性分析[J].中西医结合心脑血管病杂志，2016，14(9)：936-939.

[5] 冯兵，何作云，丁秋华，等.高血压病红细胞流变特性改变及卡普托利干预[J].中国血液流变学杂志，1994，4(3)：7-10.

[6] Chien S.The Benjamin W.Zweifach Award Lecture.Blood cell deformability and interactions： from molecules to micromechanics and microcirculation[J].Microvasc Res，1992，44(3)：243-254.

[7] 王佳洁，匡泽民，王绿娅，等.红细胞分布宽度与高血压靶器官损害研究进展[J].现代生物医学进展，2016，16(5)：998-1000.

[8] Plasenzotti R，Stoiber B，Posch M，et al. Red blood cell deformability and aggregation behaviour in different animal species[J].Clinical Hemorheology and Microcirculation，2004，31(2)：105.

[9] 龚志刚，石向群，卢普连.葛根素对运动大鼠血液流变及运动能力的影响[J].中国康复医学杂志，2012，27(7)：639-642.

[10] 梅建华，胡昌盛.葛根素注射液与复方丹参注射液治疗不稳定型心绞痛的疗效比较[J].医药导报，2007，26(4)：375-377.

[11] 邵邻相.葛根素对游泳训练小鼠红细胞和血红蛋白升高的消退作用[J].体育科学，2005，25(2)：70-72.

[12] Zhang H，Yang X.Profiling and quantification of isoflavone-C-glycosides impurities in puerarin injection by liquid chromatography coupled to ESI-ion trap mass spectrometry[J].Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，2009，49(3)：843-847.

[13] 邓培媛，张力.葛根素注射液上市后安全性监测的探索(二)——不良反应信号的发现与监管[J].中国药物警戒，2008，5(4)：208-211.

[14] 孙露，丁选胜，张东蕾.丙二醇对葛根素溶血率影响的研究[J].南京中医药大学学报，2012，28(6)：570-573.

[15] 付荣国，马力群，薛荣亮，等.葛根素注射液对大鼠短暂缺血-再灌注损伤的保护作用[J].中国中西医结合急救杂志，2002，9(4)：194-196.

[16] 金婉冰.葛根素对庆大霉素致大鼠肾毒性的保护作用[J].中国临床药理学与治疗学，2013，18(8)：864-867.

[17] 朱永红，顾振纶，金小红.葛根素对糖尿病大鼠肾脏的保护作用[J].交通医学，2011，25(4)：333-336.

[18] 杨晓敏，张天娇，许可嘉，等.葛根素、大豆素、槲皮素及芦丁对CCl-4诱导小鼠急性肝损伤保护作用的比较研究[J].世界科学技术-中医药现代化，2015，17(10)：2024-2028.

[19] 郝原青，郭晓雪，丁雅珊，等.葛根素对大鼠酒精性肝纤维化的干预作用以及对肝星状细胞增殖活化的影响[J].天津中医药大学学报，2016，35(2)：132-135.

[20] 刘娟，郭宇，胡孟洋，等.葛根素固体脂质纳米粒抗肝损伤作用研究[J].中国现代应用药学，2016，33(9)：1102-1106.

(本文编辑王雅洁)

Effects of Puerarin on Blood Biochemistry of Spontaneously Hypertensive Rats in the Condition of Long-term Hypertension

Shi Weili，Xu Hao，Cong Weihong，Chen Keji

Corresponding Author：Cong Weihong Xiyuan Hospital，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100091，China

Objective To investigate the effects of Puerarin on blood biochemistry of spontaneously hypertensive rats (SHR) in the condition of long-term hypertension.Methods Wistar Kyoto (WKY) rats were given normal saline by intraperitoneal injection as control group and SHR were randomly assigned to four groups including model group， losartan group， high dose puerarin group and normal dose puerarin group.All the rats were treated for ten weeks and relevant indexes of blood routine， liver and kidney function were observed.Results Compared with model group， the number of erythrocytes， hematocrit and hemoglobin significantly reduced in high dose puerarin group and normal dose puerarin group (P<0.05 or P<0.01).The levels of alanine amino-transferase (ALT)， aspartate aminotransferase (AST)， urea and blood urea nitrogen (BUN) in losartan group were lower than that in model group (P<0.05 or P<0.01).The level of AST in normal dose puerarin group was lower than that in model group (P<0.05).Conclusion Long term intraperitoneal injection of puerarin had protective effect on liver function， renal function and erythrocyte damage.There was no obviously hemolytic reaction happened in this study.

hypertension；puerarin；erythrocyte；bilirubin；liver function；renal function；spontaneously hypertensive rats

北京市“十病十药”研发专项(No.Z141100002214011)气血并治颗粒的制剂开发研究

中国中医科学院西苑医院心血管病研究所(北京 100091)

丛伟红，E-mail：congcao123@yeah.net

R285.5 R256.2

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2017.06.011

1672-1349(2017)06-0676-05

2016-12-19)

引用信息：施伟丽，徐浩，丛伟红，等.高血压状态下长期使用葛根素对大鼠血生化等指标的影响[J].中西医结合心脑血管病杂志，2017，15(6)：676-680.