2013年—2015年宁夏地区牛支原体感染的血清学调查分析

郭亚男，曹思婷，何生虎，王 爽，张 鑫，孙 鹏

(宁夏大学农学院，宁夏银川 750021)



2013年—2015年宁夏地区牛支原体感染的血清学调查分析

郭亚男，曹思婷，何生虎*，王 爽，张 鑫，孙 鹏

(宁夏大学农学院，宁夏银川 750021)

为了摸清宁夏地区肉牛和奶牛牛支原体(Mycoplasmabovis)感染情况及流行趋势，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对2013年—2015年采集自宁夏地区肉牛主要养殖区的57个肉牛场886份血清和奶牛主要养殖区的39个奶牛场1 088份血清进行检测。结果发现，2013年抽检的16个奶牛场阳性率为32.17%(148/460)，场群阳性率100%(16/16)；2014年抽检的银川地区12个奶牛场，阳性率为26.52%(61/230)，场群阳性率100%(12/12)；2015年抽检的11个奶牛场，阳性率为44.97%(179/398)，场群阳性率100%(11/11)；2014年阳性率较2013年和2015年低，2015年最高，2013年与2014年阳性率差异不显著(P>0.05),2015年与2013年和2014年的阳性率差异极显著(P<0.01)。2013年抽检的19个肉牛场，阳性率为7.26%(18/248)，场群阳性率为26.32%(5/19)；2014年抽检的38个肉牛场，阳性率为5.02%(32/638)，场群阳性率为50%(19/38)； 2014年较2013年的阳性率低，但差异不显著(P>0.05)，而且部分地区和肉牛场未检测到牛支原体阳性血清。上述结果表明，宁夏地区奶牛养殖场牛支原体感染状况较为严重，应引起养殖场的高度重视。

牛支原体；血清；调查

牛支原体(Mycoplasmabovis)能够引起牛的肺炎、关节炎、乳房炎、结膜炎、怀孕母牛流产、生殖器感染等多种疾病[1-2]。1961年，美国首次从患乳房炎的病牛乳中分离到牛支原体[3]，1976年被确定为引起牛呼吸系统疾病的病原之一。目前，牛支原体已经在多个国家和地区流行，对养牛业造成严重的经济损失[4]。我国于1983年由黎济申[5]首次报道从乳房炎牛乳中分离到了牛支原体， 2008年湖北省相继报道从肉牛和犊牛肺脏中分离到牛支原体[6-7]。2010年李新民等[8]首次报道宁夏地区从肉牛肺脏分离到了牛支原体，随后宁夏地区多次报道从奶牛和肉牛肺脏、鼻拭子、奶样、关节液中分离到了支原体，在分离到病原的带毒牛中，犊牛起初以关节肿大为主要症状，后期发展为气喘、咳嗽、高热等症状，成年牛主要以乳房炎、肺炎为主要症状，虽然使用多种抗菌药物进行治疗，但是治疗效果不明显。随着宁夏地区奶牛、肉牛业的快速发展，奶牛肉牛的引购和区内的流动频率也越来越大，致使外地病原的引入和区内不同地区间病原的传播。宁夏地区是我国的养牛大省，奶牛养殖主要分布在银川、吴忠和中卫地区，肉牛养殖主要分布在银川、吴忠、中卫、固原、石嘴山地区。

为了调查宁夏地区牛支原体的流行状况，本研究根据宁夏地区肉牛和奶牛分布情况进行血清采集，2013年—2015年对奶牛进行了3年的牛支原体血清学调查，共计奶牛场39个，血清样本1 088份，2013年—2014年对肉牛进行了2年的牛支原体血清学调查，共计肉牛场57个，血清样本886份。通过本次血清学调查，初步了解牛支原体在宁夏的流行状况，为宁夏地区牛支原体感染的防控提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 血清样品 宁夏大学农学院临床兽医实验室工作人员，根据宁夏地区肉牛和奶牛分布情况采集的奶牛血清样品1 088份；肉牛血清886份。

1.1.2 主要试剂 牛支原体EILSA抗体检测试剂盒(Bio-XMycoplasmabovisElisa Kit，SMYC16C18)，比利时Bio-X公司产品。

1.1.3 主要仪器 移液器，德国Eppendorf公司产品；ST70-2微孔板恒温振荡器，上海安亭科学仪器公司产品； Wellwash 4MK2洗板机，杭州米欧仪器有限公司产品；Multiskan MK3酶标仪，上海赛默飞世尔仪器有限公司产品。

1.2 方法

1.2.1 检测方法及结果判定 按照比利时牛支原体ELISA抗体检测试剂盒说明书，对采集的血清进行血清学试验，所得数据参考说明书阴阳性判定方法。

1.2.2 统计分析 利用EXCEL软件和SAS 8.2统计分析软件中的t检验，对数据进行统计分析，P>0.05表示差异不显著，P<0.05表示差异显著，P<0.01表示差异极显著。

2 结果

2.1 2013年—2015年奶牛血清样品检出结果

由表1 可知，2013年共抽检银川、吴忠、中卫16个奶牛场，采集奶牛血清460份，检出阳性血清148份，阳性率为32.17%。16个奶牛场均检测到牛支原体阳性血清，场群感染率达100%，最高阳性率为64.29%，最低阳性率为8.7%，其中银川地区116份血清中，检出阳性血清40份，阳性率为34.48%；吴忠地区255份血清中，检出阳性血清80份，阳性率为31.37%；中卫地区89份血清中，检出阳性血清28份，阳性率为31.46%。

表1 2013年宁夏奶牛主要养殖地区牛支原体血清学调查结果

由表2 可知，2014年共抽检宁夏银川地区12个奶牛场，采集奶牛血清230份，检出阳性血清61份，阳性率为26.52%。12个奶牛场均检出牛支原体阳性血清，场群感染率达100%，最高阳性率为57.14%，最低阳性率为8.7%。

表2 2014年宁夏奶牛主要养殖区银川地区奶牛牛支原体血清学调查结果

由表3 可知，2015年共抽检银川、吴忠11个奶牛场，采集奶牛血清398份，检出阳性血清179份，阳性率为44.97%。11个奶牛场均检测到牛支原体阳性血清，场群感染率达100%，最高阳性率为59.18%，最低阳性率为20.00%，其中银川地区283份血清中，检出阳性血清139份，阳性率为49.12%；吴忠地区115份血清中，检出阳性血清40份，阳性率为34.78%。

表3 2015年宁夏奶牛主要养殖地区牛支原体血清学调查结果

图1 年宁夏地区奶牛牛支原体阳性率检测结果

由图1可知，2013年—2015年宁夏地区奶牛支原体血清阳性率处于26.52%～44.97%，具有较高的阳性率，对比3年的阳性率，2014年阳性率较2013年和2015年低，2015年最高。2013年与2014年相比阳性率差异不显著(P>0.05)，2013年与2015年相比阳性率差异极显著(P<0.01)，2014年与2015年相比阳性率差异极显著(P<0.01)。

2.2 2013年—2015年肉牛血清样品检出结果

由表4 可知，2013年共抽检银川、固原19个肉牛场，采集肉牛血清248份，检出阳性血清18份，阳性率为7.26%。19个肉牛场中共5个牛场检测到牛支原体阳性血清，场群感染率达26.32%，最高阳性率为41.67%，其中银川地区98份血清中，检出阳性血清4份，阳性率为4.08%；固原地区150份血清中，检出阳性血清15份，阳性率为10.00%。

由表5 可知，2014年共抽检银川、吴忠、石嘴山、中卫、固原38个肉牛场，采集肉牛血清638份，检出阳性血清32份，阳性率为5.02%。38个肉牛场中共19个牛场检测到牛支原体阳性血清，场群感染率达50%，最高阳性率为20.00%，其中银川地区464份血清中，检出阳性血清23份，阳性率为4.96%；吴忠地区40血清中，检出阳性血清2份，阳性率为5.00%；石嘴山地区未检测到牛支原体阳性血清；中卫地区20血清中，检出阳性血清1份，阳性率为5.00%；固原地区100血清中，检出阳性血清6份，阳性率为6.00%。

由图2可知，宁夏地区肉牛支原体血清检测阳性率处于8%以下，对比2013年和2014年阳性检测结果，2014年较2013年的阳性率低，但差异不显著(P>0.05)。

表4 2013年宁夏肉牛主要养殖地区牛支原体血清学调查结果

3 讨论

本研究采用比利时牛支原体检测试剂盒进行检测，每一份血清均有阴性对照，减少了在操作过程中因各种因素所造成的误差，检测数据更具有科学性和准确性。因国内尚未有牛支原体相关疫苗的使用，因此可以通过检测牛支原体血清抗体的阴阳性结果判断牛是否被牛支原体感染，但是要判断阳性牛是否为患牛需进一步的病原学分析。2013年—2015年采集的肉牛和奶牛血清样品覆盖了宁夏地区肉牛和奶牛的主要养殖区。对宁夏地区牛支原体感染情况进行调查，为宁夏地区牛场牛支原体净化工作的开展提供了科学的依据。

2013年共抽检16个奶牛场，采集奶牛血清460份，检出阳性血清148份，阳性率为32.17%。最高阳性率为64.29%，最低阳性率为8.7%，银川地区阳性率为34.48%(40/116)，吴忠地区阳性率为31.37%(80/255)，中卫地区阳性率为31.46%(28/89)。2014年共抽检银川地区12个奶牛场，采集奶牛血清230份，检出阳性血清61份，阳性率为26.52%。最高阳性率为57.14%，最低阳性率为8.7%。2015年共抽检11个奶牛场，采集奶牛血清398份，检出阳性血清179份，阳性率为44.97%。最高阳性率为59.18%，最低阳性率为20.00%，银川地区阳性率为49.12%(139/283)，吴忠地区阳性率为34.78%(40/115)。对比2013年—2015年宁夏地区奶牛支原体血清检测阳性率， 2014年阳性率较2013年和2015年低，2015年最高，2013年与2014年相比阳性率差异不显著(P>0.05)，2013年与2015年相比阳性率差异极显著(P<0.01)，2014年与2015年相比阳性率差异极显著(P<0.01)，而且在抽检的所有奶牛场中均检测出牛支原体阳性血清，场群感染率高达100%。以上数据说明宁夏地区牛支原体在奶牛主要养殖区普遍存在，而且较为严重，呈上升的趋势。究其原因可能是因为：奶牛场为了扩大养殖规模，从外地或其他已被牛支原体感染的牛场购买奶牛，没有进行牛支原体等相关疾病的检查，致使病原引入宁夏地区和宁夏不同地区，最终造成宁夏不同地区不同场区均有牛支原体病原的存在；奶牛饲养成本较高，牛场在发现牛支原体感染后，患病牛不淘汰、不隔离，致使该疾病在牛场之中横向传播，其他牛也被感染。

表5 2014年宁夏肉牛主要养殖地区牛支原体血清学调查结果

图2 2013年—2014年宁夏地区肉牛牛支原体阳性率检测结果

2013年共抽检19个肉牛场，采集肉牛血清248份，检出阳性血清18份，阳性率为7.26%，其中5个牛场检测到牛支原体阳性血清，场群感染率为26.32%(5/19)，最高阳性率为41.67%，其中银川地区阳性率为4.08%(4/98)，固原地区阳性率为10.00%(15/150)。2014年共抽检38个肉牛场，采集肉牛血清638份，检出阳性血清32份，阳性率为5.02%，其中19个牛场检测到牛支原体阳性血清，场群感染率为50%(19/38)，最高阳性率为20.00%。银川地区阳性率为4.96%(23/464)，吴忠地区阳性率为5.00%(2/40)，石嘴山地区未检测到牛支原体阳性血清；中卫地区阳性率为5.00%(1/20)；固原地区阳性率为6.00%(6/100)。对比2013年和2014年阳性检测结果，2014年较2013年的阳性率低但差异不显著(P>0.05)，而且部分地区和肉牛场未检测到牛支原体阳性血清。以上数据说明，宁夏地区肉牛养殖场中牛支原体阳性血清率较低，不同地区及部分场区存在牛支原体病原，但对其他牛场也有一定的威胁。其原因可能是由于肉牛养殖周期较短，牛支原体对犊牛的感染症状前期主要表现在关节肿大后期发展为呼吸道症状，最终影响犊牛的生长发育，因此肉牛场在发现犊牛牛支原体感染后立即将其淘汰，致使牛支原体病原在肉牛场中得到一定的净化。

由于牛支原体可通过ON/OFF开关变异机制形成多样化的支原体表面结构，逃避宿主的免疫，而且牛支原体还可以通过抑制淋巴细胞增殖来降低牛机体的免疫水平，激活宿主炎症细胞引发炎症反应，损伤宿主，致使牛体免疫功能降低和造成继发感染[9-11]。因此，牛支原体病原可在牛体持续存在和条件性致病，其引起的疾病在临床上一直缺乏有效的防控手段，国内既无商品疫苗，也无针对牛支原体进行治疗的特效药物，因此针对牛支原体应以预防为主，通过提高饲养管理技术、定期检查进行防控，发现血清阳性牛时及时隔离并进行病原分离鉴定，确诊后立即淘汰，最终达到无免无疫的净化目的。

[1] Stipkovits L,Ripley P,Varga J,et al.Clinical study of the disease of calves associated withMycoplasmabovisinfection[J].Acta Vet Hungarica,2000,48(4):387-395.

[2] 王艳杰，李平安，吴太平，等.牛支原体分离株全基因组序列测定及初步分析[J].动物医学进展，2014，35(8):44-49.

[3] Hale H H,Helmboldt C F,Plastridge W N,et al.Bovine mastitis caused byMycoplasmaspecies [J].Cornell Vet, 1962,52:582-591.

[4] Nicholas R A J,Ayling R D.Mycoplasmabovisdisease,diagnosis,and control [J].Res Vet Sci,2003,74(2):105-112.

[5] 黎济申.牛的霉形体性乳房炎[J].上海畜牧兽医通讯,1983(4):46.

[6] 辛九庆，李 媛，郭 丹，等．国内首次从患肺炎牛肺脏中分离到牛支原体[J].中国预防兽医报，2008，30(9)：661-664.

[7] 郭澍强，蒋 万，罗海峰，等.银川地区某奶牛场牛支原体病的诊断[J].中国预防兽医学报，2015，37(3)：203-206.

[8] 李新民，何生虎，曹 志，等.牛传染性支原体肺炎病的初步诊断[J].黑龙江畜牧兽医，2011(5)：107-108.

[9] 高 铎，孔令聪，贾博岩，等.牛支原体致病机制研究进展[J].动物医学进展，2015，36(7):90-94.

[10] 王海勇，武 华.牛支原体研究进展[J].中国奶牛，2014(7)：36-41.

[11] 郭雨丝，陈颖钰，赵 刚，等.牛支原体病研究进展[J].中国奶牛，2015(14)：36-41.

Serological Investigation and Analysis ofMycoplasmabovisInfection in Ningxia Area during 2013 to 2015

GUO Ya-nan,CAO Si-ting,HE Sheng-hu,WANG Shuang,ZHANG Xin,SUN Peng

(CollegeofAgronomy,NingxiaUniversity,Yinchuan,Ningxia,750021,China)

To investigate the infection and epidemic trend ofMycoplasmabovisand provide scientific basis for prevention and control ofMycoplasmabovisinfection in Ningxia,Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect 886 sera of 39 dairy farms and 1 088 sera of 57 beef cattle farms in the main breeding area,which was collected from 2013 to 2015 in Ningxia.The results showed that in the sera of 16 dairy farms in 2013,the positive rate was 32.17%(148/460),and the positive rate of positive famers was 100% (16/16);in the sera of 12 dairy farms in 2014,the positive rate was 26.52%(61/230),and the positive rate of positive famers was 100% (12/12);in the sera of 11 dairy farms in 2015,the positive rate was 44.97%(179/398),and the positive rate of positive famers was 100% (11/11);the positive rate in 2014 compared with 2013 and 2015 was the lowest,the positive rate was the highest in 2015.In 2013 and 2014,the positive rate was not significantly different (P>0.05),and the difference was very significant (P<0.01) between 2015 and 2013.in the sera of 19 beef cattle farms in 2013,the positive rate was 7.26%(18/248), and the positive rate of positive famers was 26.32% (5/19 );in the sera of 38 beef cattle farms in 2014, the positive rate was 5.02% (32/638),and the positive rate of positive famers was 50% (19/38);The positive rate was lower in 2014 than in 2013,but the difference was not significant (P>0.05),and the positive serum could not be detected in some areas and some beef cattle famers.The result above indicated thatMycoplasmabovisinfection was more serious in dairy farms in Ningxia,which should be highly valued by every dairy farm.

Mycoplasmabovis;serum;survey

2016-07-11

宁夏科技攻关重点专项项目(312-0164)

郭亚男(1991- )，男，河南南阳人，硕士研究生，主要从事兽医临床诊断基础研究。

S852.62;S858.23

B

1007-5038(2017)04-0129-05

*通讯作者