螺旋藻复合多糖与银杏提取物对小鼠耐缺氧能力的影响

于蕾妍，邹本革，周 颖，张廷龙，于 雷，王清吉

(1.青岛农业大学海都学院，山东莱阳 265200；2.山东管理学院，山东济南 250100； 3.青岛农业大学，山东青岛 266109)



螺旋藻复合多糖与银杏提取物对小鼠耐缺氧能力的影响

于蕾妍1，邹本革1，周 颖2，张廷龙1，于 雷1，王清吉3*

(1.青岛农业大学海都学院，山东莱阳 265200；2.山东管理学院，山东济南 250100； 3.青岛农业大学，山东青岛 266109)

将螺旋藻多糖(PSP)与银杏叶提取物(GBE)按不同比例复合，以每日200 mg/kg剂量分别灌服小鼠，给药14 d后制作小鼠常压密闭缺氧模型，观察小鼠缺氧存活时间，检测心、肝、脑组织MDA含量，肝、脾SOD活力等生化指标。结果表明，供试药物均可延长小鼠在常压密闭缺氧条件下的存活时间，提高缺氧小鼠肝、脾SOD活力，降低缺氧小鼠心、肝、脑组织MDA含量。说明本试验的供试药物均具有一定的抗疲劳作用。PSP与GBE以2∶1比例复合使用对提高小鼠的抗疲劳能力能产生较好的协同增效作用。

螺旋藻多糖；银杏叶提取物；耐缺氧

螺旋藻多糖(Polysaccharides fromSpirulinaplatensis,PSP)是从螺旋藻中提取得到的水溶性杂多糖，它具有抗氧化、抗自由基、抗疲劳等广泛的生物活性，受到了国内外学者的极大关注[1]。银杏叶提取物(extract ofGinkgobiloba,GBE)主要活性成分为银杏黄酮和银杏内酯，具有抗氧化、清除自由基、抗疲劳、保护心脑血管免受缺氧缺血损伤等多种生理功效[2-3]。很多常见疾病如心脏病、心脑血管疾病、呼吸系统疾病和贫血等都可导致机体缺氧，长时间高强度的脑力劳动也会导致缺氧症的产生。缺氧对机体是一种紧张性刺激，它会影响机体各种代谢活动，严重者会危及生命。因此,本试验将螺旋藻多糖与银杏叶提取物按多种比例复合，研究复合制剂对小鼠抗疲劳能力的影响，并对其抗疲劳作用机理进行初步探讨。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试药物 螺旋藻粉,购自中国科学院南海海洋研究所三亚站。参照文献[4]，提取螺旋藻多糖，多糖含量93%以上。银杏叶提取物(总黄酮含量≥24%，萜内酯含量≥6%)、银杏黄酮、银杏内酯，青岛农业大学生物化学实验室自提。

1.1.2 实验动物 SPF级昆明种小鼠，雄性，体重20 g±2 g，购自青岛市药品检验所。

1.2 方法

1.2.1 动物分组及给药方法 小鼠依体重随机分为空白对照组、阳性对照组、PSP组、银杏黄酮组、银杏内酯组、1∶1复合组、1∶2复合组和2∶1复合组，每组10只。阳性对照选用心得安(盐酸普萘洛尔)，各给药组以灌胃法给予供试药物，对照组以同种方法给予同等体积溶剂。每只小鼠灌服量为每日200 mg/kg，供试药物给予时间14 d。

1.2.2 造模方法 于末次给药后1 h制作小鼠常压密闭缺氧模型：将小鼠放入盛有5 g钠石灰的250 mL磨口瓶内，每瓶1只，用凡士林密封瓶口，盖严，使之不漏气，立即计时，直至小鼠呼吸停止。以小鼠在密闭广口瓶内的存活时间为指标，比较各组小鼠缺氧存活时间的长短。

1.2.3 心、肝、脑组织MDA含量测定 小鼠死后立即剖检，取其心、肝、脑、脾。称取0.5 g 组织，置玻璃组织匀浆器中，加10倍预冷的9 g/L生理盐水，匀浆，然后4 000 r/min离心15 min，上清液即为100 g/L组织匀浆。参照文献方法[5]测定各组织中MDA含量。

1.2.4 肝、脾SOD活力测定 称取0.5 g 组织，置于组织匀浆器中，加20倍预冷的磷酸缓冲液(pH8.3，5×10-2mol/L，K2HPO4-KH2PO4缓冲液)，匀浆，4 000 r/min离心15 min，上清液即为组织SOD酶液，用于酶活测定。参照文献方法[5]测定肝、脾组织中SOD活力。

1.2.5 统计学处理 采用SPASS13.0生物医学统计软件，进行单因素方差分析(LSD)。

2 结果

2.1 小鼠常压密闭缺氧存活时间

结果见表1。由表1可见，各供试药物组和阳性对照组小鼠存活时间均比空白对照组显著延长(P<0.01)，PSP组小鼠存活时间比阳性对照组长。单一成分组作用效果优于复合组；三种比例复合组中，2∶1复合组效果最好；三种单一成分组中，PSP组的作用效果最好。

表1 复合螺旋藻多糖对小鼠常压密闭缺氧存活时间的影响

注：与空白组相比，**P<0.01。

Note：Compared with the blank group，**P<0.01.

2.2 心、肝、脑组织MDA含量

结果见表2。由表2可见，各供试药物组和阳性对照组小鼠心肌MDA含量均比空白对照组显著下降(P<0.01)，且除银杏内酯组外，其他供试药物组小鼠心肌MDA含量均比阳性对照组低。各供试药物组和阳性对照组小鼠肝、脑MDA含量亦均比空白对照组显著下降(P<0.01)，且供试药物组小鼠肝、脑MDA含量均比阳性对照组低。

2.3 肝、脾SOD活力

结果见表3。由表3可见，各供试药物组小鼠肝、脾SOD活力均比空白对照组显著升高(P<0.01)，且比阳性对照组高。阳性对照组肝SOD活力与空白对照组相比差异显著(P<0.05)，脾SOD活力与空白对照组相比差异不显著。复合组作用效果优于单一成分组，以2∶1复合组效果最好。

表2 复合螺旋藻多糖对缺氧小鼠心、肝、脑组织MDA含量的影响

注：与空白组相比，*P<0.05，**P<0.01。

Note：Compared with the blank group，*P<0.05，**P<0.01.

表3 复合螺旋藻多糖对缺氧小鼠肝、脾SOD活力的影响

注：与空白组相比，*P<0.05，**P<0.01。

Note：Compared with the blank group，*P<0.05，**P<0.01.

3 讨论

虽然关于螺旋藻多糖抗缺氧作用的研究尚未见报道，但大量研究表明，螺旋藻多糖具有抗氧化、提高SOD活力、清除自由基、减少脂质过氧化损伤的作用，还具有增强核酸内切酶活性和促进DNA修复合成等功效，对生物大分子具有保护作用，提示螺旋藻多糖具有抗缺氧作用[1，6-7]。

3.1 复合药物作用效果

银杏叶提取物中的主要生物活性成分为银杏黄酮和银杏内酯。胡敏[8]研究证实，银杏叶粗提物具有明显的清除活性氧的效果，其中的黄酮糖苷和银杏萜内酯均具有抗氧化效应，可抑制脂质过氧化反应。李晓莉等[9]研究发现，GBE可以显著延长小鼠在密闭条件下的存活时间，降低缺氧小鼠心、脑组织MDA含量，显著增加小鼠血浆中SOD活性，降低机体中脂质过氧化反应，减缓组织在缺氧时的损伤，有利于保护组织的生理功能。综合以上结果发现，试验选用的供试药物虽然在存活时间的延长上略有偏差，但是心、肝、脑组织的MDA含量相比于空白组显著下降，同时肝、脾的SOD含量提升。其中复合组的用药效果要优于单一成分组。

3.2 复合药物作用机理

螺旋藻多糖主要由D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖和葡萄糖醛酸等构成，这些单糖成分都含有多羟基的醛、酮或二者的缩合物及其衍生物[10]。银杏叶提取物中的主要生物活性成分为银杏黄酮和银杏内酯，银杏黄酮类都含有酚羟基结构；银杏内酯类都是含有多个五元环和酚羟基的萜内酯类化合物。研究发现[11]，将含有相同或相似官能团的化合物进行复合，能够使药物发挥协同增效作用，不同物质所含结构相同或具有类似官能团是其具有复合协同增效作用的前提。螺旋藻多糖和银杏叶提取物都含有羟基和酚羟基结构，这为二者联合使用发挥协同增效作用提供了结构基础。但在本试验中，复合组的效果却不及单一成分组作用，分析其原因可能是复合组的给药剂量不合适所致。

[1] 左绍远.云南产螺旋藻多糖抗氧化抗疲劳作用的实验研究[J].中国生化药物杂志，1995，16(6)：255.

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Effect ofSpirulinaComplex Polysaccharide on Hypoxia Tolerance in Mice

YU Lei-yan1，ZOU Ben-ge1，ZHOU Ying2，ZHANG Ting-long1，YU Lei1，WANG Qing-ji3

(1.HaiduCollegeofQingdaoAgriculturalUniversity,Laiyang，Shandong，265200,China； 2.ShandongManagementUniversity,Jinan,Shandong,250100,China； 3.QingdaoAgriculturalUniversity,Qingdao,Shandong,266109,China)

In order to study the effect ofSpirulinacomplex polysaccharide on hypoxia tolerance in mice,the polysaccharide (PSP) was combined with the extract ofGinkgobiloba(GBE) leaves at different ratios in this experiment.Mice were administrated with 200 mg/(kg·d),and hypoxia mice were adopted in normal pressure confined spaces after administration of 14 d.Compared with the control group,complex compounds could prolong the survival time,enchance SOD activity of the liver and spleen,and reduce MDA content in heart,liver and brain tissues.The test results showed that the tested compunds had an anti-fatigue effect.Moreover,PSP∶GBE=2∶1 composite has a synergic effect to improve the anti-fatigue ability of mice.

polysaccharide fromSpirulinaplatensis(PSP)；extract ofGinkgobiloba(GBE)；hypoxia tolerance

2016-08-30

山东省自然科学基金项目(ZR2009EM009)

于蕾妍(1983-)，女，山东莱阳人，讲师，硕士，主要从事活性物质的提取分离与应用研究。

S859.7

A

1007-5038(2017)04-0072-03

*通讯作者