流式细胞术联合阴道镜活检在宫颈癌和癌前病变筛查中的意义

曲亚兰 谢宝芳 李丹阳

流式细胞术联合阴道镜活检在宫颈癌和癌前病变筛查中的意义

曲亚兰 谢宝芳 李丹阳

目的探讨流式细胞术联合阴道镜活检在宫颈癌和癌前病变筛查中的应用价值。方法 选取2014年6月—2016年6月在我院就诊进行宫颈癌检查并有活检结果的705例病例进行研究，并用流式细胞术对此705例患者进行DNA含量分析，以DNA指数(DNA index，DI)、增殖指数(Proliferative index，PI)值作为DNA含量分析的参数。结果 阴道镜拟诊结果显示CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ/CIS、宫颈癌的检出率分别为62.2%、78.0%、100%、100%；流式细胞仪检测DNA倍性在CINⅡ及其以上级别病变(CINⅡ、CINⅢ或CIS和宫颈癌病变)的敏感性为87.7%(213/243)，特异性为90.2%(417/462)。随着宫颈组织病变程度的加重，DI、PI值均呈上升趋势，且各组之间进行比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 流式细胞术联合阴道镜活检可提高宫颈癌和癌前病变诊断率、准确性和敏感性，是适合筛查宫颈癌和癌前病变的工具之一，值得临床推广和应用。

流式细胞术；阴道镜；宫颈癌；筛查

宫颈癌是女性最常见的一种恶性肿瘤之一，近年来其发病率逐年上升并呈年轻化趋势，早诊断、早治疗宫颈上皮内瘤变(Cervical intraepithelial neoplasi，CIN)是积极防止其进一步发展为宫颈癌的关键环节[1-2]。为探讨流式细胞术联合阴道镜活检在宫颈癌和癌前病变筛查中的应用价值，本研究选取2014年6月—2016年6月在我院就诊进行宫颈癌检查并有活检结果的705例病例结果进行了研究，并利用流式细胞术对此705例患者进行DNA含量分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014年6月—2016年6月在我院门诊进行宫颈癌检查并有活检结果的705例病例结果进行了研究，患者年龄分布在23～64岁，平均年龄(43.5±3.6)岁。

1.2 方法

1.2.1 流式细胞术检测 采用阴道窥器暴露宫颈后，用宫颈刷按一定方向旋转3～5圈刷取宫颈脱落细胞后，将宫颈刷刷头浸泡于细胞保存液内，用磷酸盐缓冲液(Phosphate buffered saline，PBS)漂洗细胞2次(800 r/min，离心5 min)后，用70%乙醇于4℃固定过夜后，用400目尼龙网过滤以除去粘连细胞，离心去掉固定液并用PBS洗去乙醇，调整细胞浓度至1×106/mL以制成单细胞悬液，在上述悬液中加入Triton(0.002%)、RNA酶(终浓度为100 μg/mL)、碘化吡啶(Propidium iodide，PI，终浓度为50 μg/mL)于室温避光孵育染色30 min后进行流式细胞仪检测[3-4]，以正常宫颈脱落细胞DNA含量作为二倍体细胞DNA含量的标准。

1.2.2 细胞DNA含量分析 本研究采用DNA指数(DNA index，DI)、增殖指数(Proliferative index，PI)作为DNA含量分析的参数。DI=(待测宫颈细胞G0/G1细胞峰顶荧光道数)/(标准二倍体细胞G0/G1细峰顶荧光道数)，DI=0.9～1.1时为二倍体，超出此范围即视为异倍体。PI=(S+G2/M)/(G0/G1+S+G2/M)×100%[5]。(1)阴性：以正常二倍体细胞为主，未发现异倍体细胞，且增生细胞占检测细胞总数的5%以下；(2)疑似：增生细胞占检测细胞总数的5%～10%，未发现异倍体细胞；(3)阳性：增生细胞占检测细胞总数的5%～10%或发现异倍体细胞。

1.2.3 阴道镜活检 凡是对流式细胞仪检测DNA倍性结果为疑似和阳性或临床可疑的妇女均进行阴道镜检查，以组织病理学诊断为金标准。于患者月经干净后的3 d～7 d，将阴道镜置于其阴道，分别采用盐水、冰醋酸和碘液对宫颈进行擦拭、湿敷和涂抹，于转化区最严重区域钳取宫颈组织。若镜下未见可疑部位，则采取传统四点法进行活检，10%甲醛固定后，送至病理检查[6-7]。

1.2.5 病理学诊断分析 病理学诊断分为：正常、宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(CINⅠ，CINⅡ，CINⅢ或CIS)和宫颈癌[8]。

1.2.6 阴道镜拟诊标准 按照国际宫颈病理与阴道镜联盟(International federation of cervical pathology and colposcopy，IFCPC)的描述，阴道镜拟诊标准为CINⅠ级(镜下可见醋酸白色上皮与点状血管二联征)、CINⅡ级(出现醋酸白色上皮与镶嵌二联征)、CINⅢ级或CIS(出现醋酸白色上皮、点状血管与镶嵌三联征)、宫颈癌(上述三联征同时出现或单独出现，并伴有玻璃状、胶冻状、脑状等上皮改变)[9]。

1.3 统计学处理

所有实验数据录入SPSS 18.0统计学软件包，计量资料比较采用方差分析，计数资料比较采用卡方检验，P<0.05认为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 阴道镜拟诊与阴道镜宫颈活检结果

以阴道镜活检的诊断结果为标准，705例活检结果显示宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ/CIS、宫颈癌患者分别为245例、217例、123例、85例、35例，阴道镜拟诊结果显示CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ/CIS、宫颈癌的检出率分别为62.2%、78.0%、100%、100%(表1)。

表1 阴道镜拟诊与阴道镜宫颈活检结果Table 1 Colposcopy diagnosis and colposcopy cervical biopsy results

2.2 流式细胞仪进行DNA倍性分析的敏感性与特异性

以阴道镜活检的诊断结果为标准，在705例活检病例中，有243例CINⅡ及以上级别的宫颈病变(CINⅡ、CINⅢ/CIS和宫颈癌)。若将DNA倍性检测结果中为阳性和疑似结果的病例，定为筛查后需要做阴道镜活检的标准，则CINⅡ及其以上级别病变(CINⅡ、CINⅢ/CIS和宫颈癌)的敏感性为87.7%(213/243)，特异性为90.2%(417/462)(表2)。

表2 流式细胞仪检测DNA倍性结果Table 2 The DNA ploidy results detected by flow cytometry

2.3 不同宫颈组织之间DNA含量分析比较

DI、PI值均随着宫颈组织病变程度的加重呈上升趋势，且各组之间进行比较，差异均具有统计学意义(P<0.05)(表3)。

表3 不同宫颈组织之间DNA含量分析比较Table 3 DNA content analysis and comparisons between different cervical tissues

Note：Compared between cervicitis group and CINⅠgroup，aP<0.05；Compared between CINⅠgroup and CINⅡgroup，bP<0.05；Compared between CINⅡgroup and CINⅢgroup，P<0.05；Compared between CINⅡgroup and CINⅢgroup，cP<0.05；Compared between CINⅢ group and UCC group，dP<0.05.

3 讨论

宫颈癌前病变并不是必定会发展为宫颈癌，它有向前进一步发展或向后恢复正常的双重性，因此非常有必要从癌前病变中找出具有进一步发展为宫颈癌潜能的这种病变。肿瘤的本质是细胞增殖失控和增殖细胞转移[10]。细胞在癌前病变过程中常处于活跃的增生状态，DNA合成增加，含量发生变化，选用流式细胞仪可以精准检测到DNA含量的细微变化，因此，选用流式细胞仪进行细胞DNA含量分析可以当作一种有效诊断癌前病变发展趋向的手段。本研究采用DI、PI作为DNA含量分析的参数，结果显示，DI、PI值均随着宫颈组织病变程度的加重而呈上升趋势，且各组之间进行比较，差异均具有统计学意义。有学者指出在几乎所有宫颈癌病变中均会出现DNA倍体异常化细胞，且DNA变化早于细胞形态学改变[11-13]，我们的研究结果与此相符，结果显示在CINⅠ及以上均出现DNA倍体异常化细胞，且随着宫颈组织病变程度的加重，异常化细胞越多。因此可对CIN细胞进行DNA含量的倍性分析以判断癌前病变的发展趋向，在CIN中DNA倍体分析已经被证实可作为评估具有向更高级别病变转化的相对风险性的预测因子[14]。在临床工作中可根据流式细胞仪检测的DNA含量分析结果对CIN给予不同的处理方案，对CINⅠ异倍体和CINⅡ、CINⅢ/CIS应当采取积极干预方案，尽最大努力阻止其向恶性方向转变，而CINⅠ二倍体的增殖活性较低，可视作良性病变，密切跟踪其转归即可。本研究结果显示在705例阴道镜活检中，有243例CINⅡ及以上级别的宫颈病变，将流式细胞仪检测DNA倍性在CINⅡ及其以上级别病变(CINⅡ、CINⅢ或CIS和宫颈癌病变)的敏感性为87.7%，特异性为90.2%。结果进一步表明采用流式细胞仪进行DNA含量分析可在不降低检测特异性的情况下提高检测的敏感性，是适合筛查宫颈癌和癌前病变的工具之一。

阴道镜作为一种应用广泛的诊断方法，可通过观察宫颈表面血管上皮的形态结构，明确病变的部位和范围发现肉眼看不到的亚临床病变，在移行带上异常最明显处作定位活检以提高活检的阳性率[15]。本研究中阴道镜拟诊结果显示CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ/CIS、宫颈癌的检出率分别为62.2%、78.0%、100%、100%，因此可以利用阴道镜对观察到的患者病变图像进行拍照，以达到随访患者的目的。

综上所述，流式细胞术联合阴道镜活检可提高宫颈癌和癌前病变诊断率、准确性和敏感性，是适合筛查宫颈癌和癌前病变的工具之一，值得临床推广和应用。

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3 李建业，朱淑霞，宋时莉，等.流式细胞术检测宫颈细胞DNA倍体在宫颈病变中的应用[J].中国妇幼保健，2008，23(1)：85-87.

4 张素贞，张凡，常永霞，等.流式细胞术检测宫颈癌CD105与VEGF-C、nm23表达[J].中国妇幼保健，2011，26(25)：3959-3961.

5 辛海，袁世强，杨幼易.流式细胞术在宫颈癌及其癌前病变中的临床应用[J].放射免疫学杂志，2013，26(6)：781-783.

6 林雪珊，周全，何春妮.阴道镜和高危型HPV-DNA检测在宫颈不典型病变筛查中的应用[J].中华全科医学，2013，11(6)：854-855.

7 邹雪梅.“三阶梯”诊疗程序在4215名妇女宫颈病变普查中的应用[J].中华疾病控制杂志，2010，14(1)：84-85.

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13 王刚，王莉，石松荔，等.DNA 倍体分析技术在宫颈癌早期筛查中的临床应用价值[J].中国肿瘤临床，2012，39(21)：1639-1642.

14 Lorenzato M，Bory JP，Cucherousset J，et al.Usefullness of DNA ploidy measurement on liquid-based smears showing conflicting results between cytology and high-risk human papillomavirus typing[J].Am J Clin Pathol，2002，118(6)：708-713.

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(收稿：2016-09-20)

The clinical application value of flow-cytometry combined with colposcope ultra high frequency electric knife for diagnosis of uterine cervix carcinoma and cervical intraepithelial neoplasia

QUYalan，XIEBaofang，LIDanyang

Department of Obstetrics and Gynecology，Beijing Mentougou District Hospital，Beijing 102300，China

Objective To explore the clinical application value of flow-cytometry combined with colposcope ultra high frequency electric knife for diagnosis of uterine cervix carcinoma(UCC)and cervical intraepithelial neoplasia(CIN).Methods A total of 705 cases was included in this study who were screened from April 2014 to April 2016 and accepted colposcopy biopsy.DNA flow cytometry was performed to determine DNA index(DI)and proliferative index(PI).Results Colposcopy diagnosis results showed that the detection rate of CINⅠ，CINⅡ，CINⅢ/CIS and UCC were 62.2%，78.0%，62.2% and 78.0% respectively.The sensitivity and specificity were 87.7%(213/243)and 90.2%(417/462)for DNA ploidy test using flow-cytometry.DI and PI of CINⅠ，CINⅡ，CINⅢ/CIS and UCC increased gradually with significant differences(P<0.05).Conclusion Flow-cytometry combined with colposcopy biopsy may be a useful tool for cervical cancer screening in developing countries and has a competitive sensitivity and specificity，which is worthy of popularization and application.

Flow cytometry；Colposcopy biopsy；Uterine cervix carcinoma；Screening

北京市门头沟区医院妇产科(北京 102300)

曲亚兰，女，(1983-)，硕士研究生，从事子宫内膜异位症诊治的研究。

曲亚兰，E-mail：quyalan0920@126.com

R711.74

A

10.11904/j.issn.1002-3070.2017.01.006