成釉细胞瘤中基质金属蛋白酶12和细胞角蛋白7的表达及其临床病理学研究Δ

王禹锟，郭婧玉，秦 喜，吴 婷

(牡丹江医学院第二附属医院口腔科，黑龙江 牡丹江 157000)

·论 著·

成釉细胞瘤中基质金属蛋白酶12和细胞角蛋白7的表达及其临床病理学研究Δ

王禹锟*，郭婧玉，秦 喜，吴 婷#

(牡丹江医学院第二附属医院口腔科，黑龙江 牡丹江 157000)

目的：探讨成釉细胞瘤中基质金属蛋白酶12(MMP-12)和细胞角蛋白7(CK-7)的表达及其临床病理学意义。方法：收集39例成釉细胞瘤患者的手术标本，均经组织病理证实，设为观察组；同时，收集40例正常口腔黏膜组织作为对照组。利用标本制作石蜡切片，实施苏木精-伊红染色，并利用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法测定MMP12和CK7的表达。结果：MMP-12在对照组中无阳性表达(阳性表达率为0)，在观察组中呈现出一定的阳性表达[阳性表达率为74.36%(29/39)]，2组的差异有统计学意义(P<0.05)；CK-7在对照组中的阳性表达率为2.50%(1/40)，显著低于观察组的61.54%(24/39)，差异有统计学意义(P<0.05)。对不同病理情况下的MMP-12与CK-7表达情况进行统计，结果显示，随着肿瘤的复发与恶变，MMP-12与CK-7的阳性表达水平相应地不断升高，病理程度越高，相应的，MMP-12与CK-7的阳性表达率也越高，且组间两两比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：成釉细胞瘤中MMP-12和CK7会呈现出明显的阳性表达，且与临床病理情况之间存在密切的联系，随着肿瘤的复发与恶变，MMP-12与CK-7的阳性表达水平也不断升高。

成釉细胞瘤； 基质金属蛋白酶； 细胞角蛋白； 病理学

成釉细胞瘤是一种口腔颌面部十分常见的肿瘤，具有很高的复发率，多会表现出局部侵袭性生物学行为[1]。分析成釉细胞瘤局部侵袭性原理，涉及到多方面的内容[2-3]。本研究从成釉细胞瘤局部侵袭性相关因素入手，探讨成釉细胞瘤中基质金属蛋白酶12(MMP-12)和细胞角蛋白7(CK-7)在成釉细胞瘤组织的表达水平及其临床意义，进而从分子层面上解读成釉细胞瘤局部侵袭性的机制，为成釉细胞瘤的诊治提供更多的参考依据。

1 资料与方法

1.1 资料来源

收集39例成釉细胞瘤患者的手术标本作为观察组，均经组织病理证实，其中男性患者20例、女性患者19例，中位年龄58.15岁；按照病理情况，将观察组细分为原发性成釉细胞瘤组(n=13)、复发性成釉细胞瘤组(n=21)、恶性成釉细胞瘤(n=6)。同时，收集40例正常口腔黏膜组织作为对照组，其中男性20例、女性20例，中位年龄59.35岁。观察组与对照组参与者的性别、年龄等基线资料的均衡性较高，具有可比性。本研究的相关研究形式和内容等均向医院伦理学部门进行汇报，接受审核，并经批准准予实施。

1.2 方法

1.2.1 石蜡切片制作：每例标本行4 μm连续切片4张，分别行苏木精-伊红染色，MMP-12与CK-7行免疫组化染色。

1.2.2 苏木精-伊红染色：切片常规脱蜡，二甲苯 Ⅰ、二甲苯 Ⅱ、100%酒精Ⅰ、100%酒精Ⅱ各10 min；95%酒精、90%酒精、80%酒精、70%酒精各10 min，蒸馏水冲洗；苏木素染色1 min，自来水冲洗；1%盐酸分化，自来水冲洗；常规酒精脱水，伊红染色2 min；梯度70%、80%、90%、95%酒精脱水，100%酒精 Ⅰ、100%酒精Ⅱ各10 min，二甲苯透明，中性树胶封片。

1.2.3 免疫组化染色链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法：利用3%甲醇-双氧水于室温(25 ℃)环境下对切片进行孵育，孵育10 min后利用蒸馏水进行洗涤；进行微波抗原修复，并自然冷却；待恢复至室温(25 ℃)条件后，添加10%正常山羊血清，置于37 ℃环境下进行反应；添加一抗，置于4 ℃环境下过夜；过夜后利用0.01 mol/L磷酸盐缓冲液进行洗涤，添加生物素标记的二抗进行水浴；添加0.01 mol/L磷酸盐缓冲液进行洗涤，并滴加过氧化物酶标记链霉卵白素工作液(三抗)水浴；以0.001 mol/L磷酸盐缓冲液洗涤后添加二氨基联苯胺进行显色，并利用自来水对显色予以终止；利用梯度酒精进行脱水处理，添加二甲苯予以透明处理，常规中性树胶封片。阴性对照片用0.01 mol/L磷酸盐缓冲液代替一抗，其余步骤同上。

1.2.4 结果判定：MMP-12阳性染色为胞质内出现黄色颗粒状物质，CK-7阳性染色为胞质内出现棕黄色或棕褐色颗粒。

1.3 统计学方法

采用EpiData 3.1.0软件对各项数据结果予以完整输入，并采用双人录入法，配合一致性检验工具，以保证数据录入的准确性。数据录入之后采用SPSS 19.0软件对数据进行统计学分析，并将P<0.05设定为两组数据之间经比较差异存在统计学意义的判定标准。

2 结果

2.1 两组组织中MMP-12的表达情况

经检测，MMP-12在对照组组织中无阳性表达，在观察组组织中呈现出一定的阳性表达，两组组织中MMP-12 阳性表达率的差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 两组组织中MMP-12的表达情况Tab 1 Expression of MMP-12 in different tissues of two groups

2.2 两组组织中CK-7的表达情况

经检测，CK-7在对照组组织中的阳性表达率显著低于观察组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 两组组织中MMP-12的表达情况Tab 2 Expression of MMP-12 in different tissues of two groups

2.3 不同病理情况下MMP-12与CK-7的表达情况

对不同病理情况下MMPV12与CK-7的表达情况进行统计，结果显示，随着肿瘤的复发与恶变，MMP-12与CK-7的阳性表达水平不断升高，病理程度越高，对应的MMP-12与CK-7阳性表达率也越高，且组间两两比较，差异均有统计学意义(P均<0.05)，见表3。

表3 不同病理情况下MMP-12与CK-7的表达情况[例(%)]Tab 3 Expression of MMP-12 of two groups under different pathological conditions[cases(%)]

注：与原发性成釉细胞瘤组进行组间比较，*P<0.05；与复发性成釉细胞瘤组进行组间比较，#P<0.05

Note：vs. primary hemangioma group,*P<0.05；vs. recurrent hemangioma group,#P<0.05

3 讨论

成釉细胞瘤是一种临床上常见的牙源性上皮性良性肿瘤，是牙齿在发育过程中，由于发育牙体的组织退化不完全，残留在颌骨组织里，在某些因素刺激下形成的[4]。成釉细胞瘤如果切除不彻底，复发率很高。多次复发易恶变。成釉细胞瘤侵袭性的机制是多因素的[4-5]。

随着分子肿瘤学及相关学科的飞速发展，临床开始积极地从分子学角度对相关的肿瘤侵袭复发机制进行研究[6-7]。CK-7为人细胞角蛋白家族中一个十分重要的亚型，主要表达于腺上皮，包括胰腺、膀胱等，在胃肠腺上皮中一般不表达[8]。有研究结果显示，部分胃肠道腺癌中CK-7表达阳性[9-10]。MMP-12属于基质金属蛋白酶家族中的巨噬细胞金属弹性蛋白酶，作用底物为弹性蛋白、型胶原及纤维连接蛋白[11-12]。肿瘤的侵袭转移在很大程度上依赖于微环境的允许作用，各种蛋白水解酶在其中发挥了十分重要的作用。基质金属蛋白酶是一个大家族，在细胞的增殖、血管形成、肿瘤侵袭和转移中发挥了重要作用[13]。根据底物专一性，基质金属蛋白酶可分为胶原酶、明胶酶、基质降解素和模型基质金属蛋白酶等4大类[14-15]。本研究结果显示，MMP-12在对照组中无阳性表达，在观察组中呈现出一定的阳性表达(阳性表达率为74.36%)；CK-7在对照组中的阳性表达率为2.50%，显著低于观察组的61.53%，差异均有统计学意义(P<0.05)。本研究还对不同病理情况下MMP-12与CK-7的表达情况进行了分析，结果显示，随着肿瘤的复发与恶变，MMP-12与CK-7的阳性表达水平也呈现出不断升高的趋势，且组间比较，差异有统计学差异(P<0.05)。上述结果也表明，MMP-12与CK-7的表达与成釉细胞瘤的临床生物学行为之间存在着一定的密切联系。提示，临床在对成釉细胞瘤的病理学情况进行分析的时候，可以检测上述指标，以获得更多的参考依据。

综上所述，通过本研究可以初步证实，釉细胞瘤中MMP-12和CK-7会呈现出明显的阳性表达，且其与临床病理情况之间存在密切的联系，随着肿瘤的复发与恶变，相应的MMP-12与CK-7的阳性表达水平也不断升高。

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Expression of MMP-12 and CX-7 in Enamel Cells and Clinical Pathological Significance StudyΔ

WANG Yukun, GUO Jingyu, QIN Xi, WU Ting

(Dept.of Dental, the Second Affiliated Hospital of Mudanjiang Medical University, Heilongjiang Mudanjiang 157000, China)

OBJECTIVE：To probe into the expression and clinical pathological significance of MMP-12 and CX-7 in enamel cells. METHODS: The surgical specimens of 39 patients with tumor of the enamel collected and confirmed by histopathology were set as observation group. Meanwhile, 40 cases of normal tissue were collected as control group. The paraffin sections were made and HE staining was carried out. MMP-12 and CK-7 were determined by SP method. RESULTS: There was no positive expression of MMP-12 in normal tissues in control group(the positive rate was 0), yet the positive rate in observation group was 74.36%(29/39), with statistically significant difference(P<0.05). The positive rate of CK-7 in control group was 2.50%(1/40), significantly lower than that of observation group [61.54%(24/39)], with statistically significant difference(P<0.05). According to the statistical expression data of MMP-12 and CK-7 under different pathological conditions, with recurrence and malignant transformation of tumor, the expression level of MMP-12 and CK-7 increased, the positive rate were increasing with the degree of pathology, with statistically significant difference between two groups(P<0.05). CONCLUSIONS: MMP-12 and CK-7 in enamel cells shows positive expression significantly, which has close relationship between the clinical pathological conditions. With tumor recurrence and malignant transformation, the positive expression level of MMP-12 and CK-7 are increasing.

Hemangioma; Matrix metalloproteinases; Keratin; Pathology

黑龙江省教育厅科学技术研究项目(No.12541851)

R739.81

A

1672-2124(2017)03-0309-03

2016-12-12)

*主治医师。研究方向：成釉细胞瘤侵袭性相关因素研究。E-mail：52927597@qq.com

#通信作者：副主任医师。研究方向：牙周病促进因素相关研究。E-mail：wyukun456@126.com

DOI 10.14009/j.issn.1672-2124.2017.03.007