急性冠脉综合征患者血清miRNA-208与血小板功能的关系*

李 恩，汪 涛，张丽华，简立国，孙利强，牛少辉#

1)郑州大学第二附属医院心血管内科 郑州 450014 2)郑州大学第二附属医院干部病房 郑州 450014

急性冠脉综合征患者血清miRNA-208与血小板功能的关系*

李 恩1)，汪 涛2)，张丽华1)，简立国1)，孙利强1)，牛少辉1)#

1)郑州大学第二附属医院心血管内科 郑州 450014 2)郑州大学第二附属医院干部病房 郑州 450014

#通信作者，男，1977年11月生，硕士，副主任医师，研究方向：冠心病的预防与治疗，E-mail:ln1025asdfgh@sohu.com

急性冠脉综合征；miRNA-208；血小板分布宽度；平均血小板体积

目的：探讨急性冠脉综合征(ACS)患者血清miRNA-208与血小板功能的关系。 方法：选取2014年1月至2015年9月郑州大学第二附属医院收治的ACS患者60例(ACS组)和非ACS患者20例(对照组)，根据诊断结果将ACS组进一步分为心肌梗死组(n=32)和不稳定心绞痛组(n=28)。入院即刻对3组患者进行静脉血液采集，测定血小板计数(PLT)、血小板分布宽度(PDW)及平均血小板体积(MPV)；利用实时荧光定量PCR法测定血清miRNA-208。结果：与对照组比较，心肌梗死组和不稳定心绞痛组血清miRNA-208、PDW、MPV升高，差异有统计学意义(P<0.05)。与不稳定心绞痛组比较，心肌梗死组血清miRNA-208、PDW、MPV升高，差异有统计学意义(P<0.05)。ACS患者血清miRNA-208与PDW和MPV呈正相关(r=0.828、0.766,P<0.05)。结论：ACS患者血清miRNA-208与血小板活化密切相关， miRNA-208参与了血小板活化的调控。

miRNA是一类生物进化过程中高度保守的非编码小分子RNA，其并不编码蛋白质，但通过对基因表达、蛋白质翻译及靶RNA的稳定性进行调控从而发挥作用。近年来，miRNA在心血管疾病领域的研究成为热点，研究[1]证实miRNA-208属于心脏特异性的miRNA，它可以调控心血管系统细胞的生成、发育、损伤修复等生理和病理过程。急性冠脉综合征(acute coronary syndrome，ACS)的病理基础是继发完全或不完全闭塞性血栓形成，该类患者伴随血小板的激活、聚集。该研究检测了ACS患者血清中miRNA-208的表达情况以及血小板计数(PLT)、血小板分布宽度(platelet distribution width，PDW)、平均血小板体积(mean platelet volume，MPV)，以探讨ACS患者miRNA-208与血小板功能的关系。

1 对象与方法

1.1 研究对象及分组 选取2014年1月至2015年9月郑州大学第二附属医院收治的ACS患者60例作为ACS组，其中男37例，女23例，年龄50～72岁；不稳定心绞痛28例，心肌梗死32例(ST段抬高型心肌梗死26例，非ST段抬高型心肌梗死6例)。另选取同期收治的非ACS住院患者20例作为对照组，其中男12例，女8例，年龄48～70岁；稳定型心绞痛患者15例，X综合征患者3例，心血管神经官能症2例。根据诊断结果将ACS组进一步分为心肌梗死组(n=32)和不稳定心绞痛组(n=28)。入选标准:根据WHO规定的ACS诊断标准进行诊断，患者均常规行冠状动脉造影、ECG、动态心电图检查，均接受正规药物治疗，并根据冠状动脉造影结果行PCI术。排除标准：合并脑血管意外史，凝血疾病和血小板减少症病史，血液免疫系统疾病，严重心律失常，严重感染性疾病，肝、肾功能衰竭，恶性肿瘤。所有研究资料的获取均取得患者同意，并通过郑州大学第二附属医院伦理委员会审查。

1.2 血清PLT、PDW、MPV和miRNA-208的检测

入院即刻对各组患者进行静脉血液采集，分离血清，测定PLT、PDW及MPV。利用实时荧光定量PCR法测定血清miRNA-208，用Trizol试剂提取血液中的总RNA，取2 μL总RNA用随机引物反转录成15 μL cDNA，取标准样品2 μL，加试剂SYBR Premix Ex TaqTM，在GeneAmp 5700 Sequence Detector 仪进行扩增，其产物用于标准曲线的制作。用目的基因的定量结果除以管家基因(GAPDH)的定量结果就可以得到目的基因的相对表达量。引物序列如下：miRNA-208上游引物5’-CTTTTGGCCCGGGTTATAC-3’，下游引物5’-CTGACATCCTCTAGGCTGG-3’；GAPDH上游引物5’-GCTGATGCCCCCATGTTTG-3’，下游引物 5’-GGGTGGTGGACCTCATGGC-3’。

1.3 统计学处理 采用SPSS 11.5进行统计学处理。3组间miRNA-208、PLT、PDW、MPV的比较采用单因素方差分析和LSD-t检验；ACS组和对照组一般情况的比较采用两独立样本的t检验或χ2检验；ACS患者miRNA-208与PLT、PDW、MPV的相关性采用直线相关进行分析。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 ACS组与对照组一般情况的比较 结果见表1。由表1可知，2组的年龄、性别构成、吸烟史、高血压病史、糖尿病病史、体重指数(BMI)、总胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、肌酐(Scr)比较，差异均无统计学意义。

表1 ACS组与对照组一般情况的比较

2.2 各组血清miRNA-208、PLT、PDW、MPV的比较 与对照组比较，心肌梗死组和不稳定心绞痛组血清miRNA-208、PDW、MPV升高，差异有统计学意义；与不稳定心绞痛组比较，心肌梗死组血清miRNA-208、PDW、MPV升高，差异有统计学意义；各组血清PLT比较，差异无统计学意义(表2)。

2.3 ACS患者miRNA-208与PLT、PDW、MPV的相关性分析 ACS患者miRNA-208与PLT无关(r=-0.223,P=0.086);miRNA-208与PDW和MPV呈正相关(r=0.828、0.766,P<0.05)。

表2 各组血清miRNA-208、PLT、PDW、MPV的比较

*：与对照组比较，P<0.05；#：与心肌梗死组比较，P<0.05。

3 讨论

ACS是冠心病患者冠状动脉粥样硬化斑块不稳定破裂所致的一系列临床综合征，分为心肌梗死和不稳定型心绞痛，严重危害人类健康[2-3]。ACS的病理基础是继发完全或不完全闭塞性血栓形成，血栓在形成过程中伴随着血小板的激活、黏附、聚集。血栓形成的过程消耗大量血小板，从而使血小板数量减少，进而刺激骨髓巨核细胞加快血小板生成[4]。血小板在ACS发展过程中发挥了关键作用，血小板既能促进斑块的形成和破裂，在斑块破裂后又迅速聚集，促进血栓形成。血小板的体积大小反映了其功能和活化状态[5]，活化状态的血小板体积增大。MPV是血小板活化的一个重要指标，MPV的大小反映了骨髓中巨核细胞增生与血小板生成的情况，其与血循环中血小板的寿命、超微结构及功能密切相关。年轻血小板的MPV大，富含蛋白、酶及血小板颗粒，其活性、聚集性强，随着血小板存活时间的延长，颗粒物质不断脱出，MPV逐渐变小，活性减弱[6]。有研究[7]发现，冠心病患者MPV变大，血小板活化增强，参与冠状动脉血栓形成。还有文献[8]指出，MPV与血小板活性呈正相关，伴随着MPV的升高，血小板活性增强。PDW 是反映血液内血小板容积变异的参数，以测得的血小板体积大小的变异系数表示。ACS发生时，血小板大量活化，大体积血小板增多，血小板体积差异程度增大，导致PDW 增大[9]。

miRNA是一类生物进化过程中高度保守的非编码小分子RNA，其并不编码蛋白质，但通过对基因表达、蛋白质翻译及靶RNA的稳定性的调控，参与到许多重要的生物过程中。miRNA-208是心脏特异性的miRNA，它可以调控心血管系统细胞的生成、发育、损伤修复等生理和病理过程，并且在血液中含量稳定[1]。有研究[10]发现，急性心肌梗死后miRNA-208在心脏中明显升高，且升高的时间变化规律与cTnI相似。还有研究[11]发现，相较miRNA-1、133、499，miRNA-208具有更高的心脏特异性，其在正常心肌中无表达。

该研究旨在探讨ACS患者血清miRNA-208表达情况与血小板功能之间的关系。结果显示，与对照组比较，心肌梗死组和不稳定心绞痛组血清miRNA-208、PDW、MPV明显升高，差异有统计学意义；与不稳定心绞痛组比较，心肌梗死组血清miRNA-208、PDW、MPV升高，差异有统计学意义；各组血清PLT比较，差异无统计学意义。另外，ACS患者miRNA-208与PDW和MPV呈正相关。该研究中作者发现，随着miRNA-208的升高，PDW和MPV均升高。PDW、MPV是反映血小板活化的重要指标，因此作者认为， miRNA-208参与了血小板活化的调控，为ACS患者抗血小板治疗提供了新的靶点。

综上所述，作者认为在ACS患者中，miRNA-208与血小板活化密切相关，参与了血小板活化的调控，其具体机制需进一步研究探讨。

[1]SATOH M,MINAMI Y,TAKAHASHI Y,et al.Expression of microRNA-208 is associated with adverse clinical outcomes in human dilated cardiomyopathy[J].J Card Fail,2010,16(5):404

[2]LI E,SUN LQ,DING TB,et al.miR-10a inhibits cardiac hypertrophy after myocardial infarction in mice by targeting HDAC4[J].Int J Clin Exp Pathol,2016,9(3):3203

[3]郭瑄,张春艳,王聪霞,等.非ST段抬高ACS患者血浆 sCD40L和Lp-PLA2水平对冠脉病变程度及危险性的评估价值[J].西安交通大学学报(医学版),2016,37(3):322

[4]牛少辉，张丽华，简立国，等.平均血小板体积对回旋支病变的预测作用[J].中华急诊医学杂志，2013,22(7)：716

[5]RASOUL S，OTTERVANGER JP,DAMBRINK JH,et al.Are patients with non-ST elevation myocardial infarction undertreated?[J].BMC Cardiovasc Disord,2007,7:8

[6]NURKALEM Z,ALPER AT,ORHAN AL,et al.Mean platelet volume in patients with slow coronary flow and its relationship with clinical presentation[J].Turk Kardiyol Dern Ars,2008,36(6):363

[7]LIPPI G,FILIPPOZZI L,SALVAGNO GL,et al.Increased mean platelet volume in patients with acute coronary syndromes[J].Arch Pathol Lab Med,2009,133(9):1441

[8]BATH PM,BUTTERWORTH RJ.Platelet size: measurement, physiology and vascular disease[J].Blood Coagul Fibrinolysis,1996,7(2):157

[9]SHATTIL SJ,NEWMAN PJ.Integrins: dynamic scaffolds for adhesion and signaling in platelets[J].Blood,2004,104(6):1606

[10]JI X,TAKAHASHI R,HIURA Y,et al.Plasma miR-208 as a biomarker of myocardial injury[J].Clin Chem,2009,55(11):1944

[11]WANG GK,ZHU JQ,ZHANG JT,et al.Circulating microRNA: a novel potential biomarker for early diagnosis of acute myocardial infarction in humans[J].Eur Heart J,2010,31(6):659

(2016-08-19收稿 责任编辑姜春霞)

Relationship between serum miRNA-208 and platelet function in patients with acute coronary syndrome

LIEn1)，WANGTao2)，ZHANGLihua1)，JIANLiguo1)，SUNLiqiang1)，NIUShaohui1)

1)DepartmentofCardiovascularInternalMedicine,theSecondAffiliatedHospital,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450014 2)CadreWard,theSecondAffiliatedHospital,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450014

acute coronary syndrome;miRNA-208;platelet distribution width;mean platelet volume

Aim: To investigate the relationship between serum miRNA-208 and platelet function in patients with acute coronary syndrome(ACS). Methods: A total of 60 cases of ACS(ACS group) and 20 cases of non-ACS(control group) were collected,and the ACS group was further allocated into myocardial infarction group(AMI group,n=32) and unstable angina pectoris group(UA group,n=28). Platelet(PLT), platelet distribution width(PDW) and mean platelet volume(MPV) were measured. The serum miRNA-208 was measured by real-time fluorescence quantitative PCR method.Results: Compared with control group, the serum level of miRNA-208, PDW and MPV were significantly higher in the AMI group and the UA group(P<0.05).Compared with the UA group, the serum level of miRNA-208, PDW, MPV were significantly higher in the AMI group(P<0.05). In patients with ACS, the serum level of miRNA-208 was correlated with PDW and MPV(r=0.828,0.766,P<0.05).Conclusion: miRNA-208 is closely related to platelet activation and involves in the regulation of platelet activation in patients with ACS.

10.13705/j.issn.1671-6825.2017.02.020

*郑州市普通科技攻关计划项目 141PPTGG453；河南省高等学校重点科研项目 15A320019

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