EML4-ALK融合基因在新疆维吾尔族非小细胞肺癌患者中的表达分析及其对预后的影响

玛依拉·阿不都克力木，阿迪拉·斯依提，帕提古力·阿尔西丁

（1.新疆医科大学第六附属医院呼吸科，乌鲁木齐 830002；2.新疆医科大学附属肿瘤医院病理科，乌鲁木齐 830000；3.新疆医科大学附属肿瘤医院内一科，乌鲁木齐 830000）

EML4-ALK融合基因在新疆维吾尔族非小细胞肺癌患者中的表达分析及其对预后的影响

玛依拉·阿不都克力木1，阿迪拉·斯依提2，帕提古力·阿尔西丁3

（1.新疆医科大学第六附属医院呼吸科，乌鲁木齐 830002；2.新疆医科大学附属肿瘤医院病理科，乌鲁木齐 830000；3.新疆医科大学附属肿瘤医院内一科，乌鲁木齐 830000）

目的：探讨EML4-ALK融合基因在新疆维吾尔族NSCLC患者中的表达及其对预后的影响。方法：应用免疫组化法及FISH法检测新疆维吾尔族和汉族NSCLC患者EML4-ALK融合基因表达情况，并分析新疆维吾尔族NSCLC患者EML4-ALK融合基因表达与临床病理特征的关系及对预后的影响。结果：新疆维吾尔族、汉族NSCLC患者EML4-ALK融合基因表达阳性表达率分别为21.00%、9.00%，经统计学检验发现不同民族NSCLC患者EML4-ALK融合基因阳性表达率存在统计学差异，新疆维吾尔族NSCLC患者EML4-ALK融合基因阳性表达率明显高于汉族；新疆维吾尔族NSCLC患者EML4-ALK融合基因表达与年龄、性别、吸烟、临床分期、病理切片类型有关，年龄≤55岁、女性、不吸烟、临床分期高、病理切片类型为腺癌的新疆维吾尔族NSCLC患者EML4-ALK融合基因阳性表达率较高；EML4-ALK融合基因阳性表达的新疆维吾尔族NSCLC患者中位总生存时间为22个月（95%CI，11个月～26个月），不同EML4-ALK融合基因表达总生存时间没有统计学差异。结论：新疆维吾尔族NSCLC患者EML4-ALK融合基因阳性表达率较高，多见于年龄≤55岁、女性、不吸烟、临床分期高、病理切片类型为腺癌者，但EML4-ALK融合基因还不能作为独立的预后影响因素。

EML4-ALK融合基因；新疆维吾尔族；非小细胞肺癌；预后

1 资料与方法

1.1 研究对象 选取2013年1月～2016年3月期间新疆医科大学第六附属医院及新疆医科大学附属肿瘤医院进行手术切除或组织活检的维吾尔族及汉族NSCLC患者组织标本。纳入标准为符合NSCLC诊断标准且均经2名病理学专家独立确诊为NSCLC［5］，所有患者签署知情同意书。排除术前接受过放射治疗、化疗及其他抗肿瘤治疗的患者，肺外有其他肿瘤的患者。

1.2 临床资料采集 根据设计的临床资料采集表，详细记录患者年龄、性别、民族、吸烟与否（吸烟指的是累计吸烟最少100支［6］）、临床分期（按照国际肺癌研究学会第八版的肺癌TNM分期标准［7］）、病理切片类型等资料，由专人质控并保存。

1.3 实验室检查 采取免疫组化法检测组织标本中EML4-ALK融合基因表达情况，弱阳性、阳性标本采取FISH检测法进一步鉴定排除假阳性，从而确定EML4-ALK融合基因在NSCLC患者中的表达率。

1.4 随访 所有患者随访至2016年9月，主要通过门诊随访、电话随访，总生存时间按确诊至死亡时间或者确诊至2016年9月计算。

1.5 资料录入及分析 调查问卷数据采用Epi Data 3.0软件进行录入，核对无误以后采用SPSS 17.0统计软件包进行统计分析。计量资料采用均数±标准差表示，计数资料采用例数（百分比）表示，其比较采用χ2检验或者Fisher精确概率法，生存分析采用Kaplan-Meier生存分析法，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 EML4-ALK融合基因在NSCLC患者中的表达率 本研究严格按照纳入排除标准纳入研究对象，共100例新疆维吾尔族、100例汉族NSCLC患者纳入研究，实验室检查发现21例新疆维吾尔族、9例汉族NSCLC患者EML4-ALK融合基因表达阳性，其阳性表达率分别为21.00%（21/100）、9.00%（9/100），经统计学检验发现不同民族NSCLC患者EML4-ALK融合基因阳性表达率存在统计学差异（P＜0.05），新疆维吾尔族NSCLC患者EML4-ALK融合基因阳性表达率明显高于汉族。

2.2 新疆维吾尔族NSCLC患者EML4-ALK融合基因表达与临床病理特征的关系 新疆维吾尔族NSCLC患者EML4-ALK融合基因表达与年龄、性别、吸烟、临床分期、病理切片类型有关（P＜0.05），年龄≤55岁、女性、不吸烟、临床分期高、病理切片类型为腺癌的新疆维吾尔族NSCLC患者EML4-ALK融合基因阳性表达率较高，见表1。

表1 新疆维吾尔族NSCLC患者EML4-ALK融合基因表达与临床病理特征的关系分析 n（%）

2.3 新疆维吾尔族NSCLC患者不同EML4-ALK融合基因表达对预后的影响 本研究随访至2016年9月，随访时间为6-44个月，中位随访时间为32个月。新疆维吾尔族NSCLC患者EML4-ALK融合基因阳性表达患者21例，其中死亡10例，中位总生存时间为22个月（95%CI，11个月～26个月）；阴性表达患者79例，其中死亡37例，中位总生存时间为24个月（95%CI，15个月～28个月）。经Kaplan-Meier生存分析法分析发现不同EML4-ALK融合基因表达总生存时间没有统计学差异（χ2=0.518，P＞0.05）。

3 讨论

EML4-ALK融合基因是2007年日本学者Soda M等人［8］首先在肺癌患者肿瘤组织中发现的，其编码的蛋白质能促进正常细胞向恶性肿瘤细胞转化，近年来其在肺癌的靶向治疗中发挥了重要的作用［9］，但是其是否存在地理或种族差异尚不明确，本研究通过对EML4-ALK融合基因在NSCLC患者中的表达率进行研究，发现新疆维吾尔族、汉族NSCLC患者EML4-ALK融合基因阳性表达率分别为21.00%（21/100）、9.00%（9/100），经统计学检验发现不同民族NSCLC患者EML4-ALK融合基因阳性表达率存在统计学差异，新疆维吾尔族NSCLC患者EML4-ALK融合基因阳性表达率明显高于汉族，所以EML4-ALK融合基因存在种族差异。

本研究发现新疆维吾尔族NSCLC患者EML4-ALK融合基因表达与年龄、性别、吸烟、临床分期、病理切片类型有关，年龄≤55岁、女性、不吸烟、临床分期高、病理切片类型为腺癌的新疆维吾尔族NSCLC患者EML4-ALK融合基因阳性表达率较高，所以EML4-ALK融合基因阳性的新疆维吾尔族NSCLC患者具有明显的临床病理特征。许多研究均发现EML4-ALK融合基因表达阳性表达倾向于年轻女性、不吸烟NSCLC患者，与本研究结果一致［10-13］，其原因可能是与雌激素有关，雌激素受体在年轻女性、不吸烟的NSCLC的发生、发展中有着重要的作用［14］。许多研究亦发现临床分期高、病理切片类型为腺癌的NSCLC患者EML4-ALK融合基因阳性表达率高［15-17］，与本研究结果一致，进一步说明EML4-ALK融合基因靶向治疗对新疆维吾尔族NSCLC患者中年龄≤55岁、女性、不吸烟、临床分期高、病理切片类型为腺癌的会更有效。

EML4-ALK融合基因阳性的NSCLC患者与EML4-ALK融合基因阴性的NSCLC患者预后比较尚存争议［18］，有研究发现EML4-ALK融合基因阳性的NSCLC患者其预后比EML4-ALK融合基因阴性的NSCLC患者差，但ⅠA 期的EML4-ALK融合基因阳性的NSCLC患者比EML4-ALK融合基因阴性的NSCLC患者有更长的中位无病生存期［19］；也有研究发现EML4 -ALK融合基因阳性的NSCLC患者临床病程比EML4-ALK融合基因阴性的NSCLC患者长，预后好［20］，本研究随访时间为6-44个月，中位随访时间为32个月，发现EML4-ALK融合基因阳性表达的新疆维吾尔族NSCLC患者中位总生存时间为22个月（95%CI，11个月～26个月）；阴性表达患者中位总生存时间为24个月（95%CI，15个月～28个月）。经Kaplan-Meier生存分析法分析发现不同EML4-ALK融合基因表达总生存时间没有统计学差异，所以EML4-ALK融合基因还不能作为独立的预后影响因素，这可能与本研究的随访时间比较短有关，所以还需要进一步的研究来探讨。

综上所述，EML4-ALK融合基因存在种族差异，新疆维吾尔族NSCLC患者EML4-ALK融合基因阳性表达率为21.00%，明显高于汉族，多见于年龄≤55岁、女性、不吸烟、临床分期高、病理切片类型为腺癌的新疆维吾尔族NSCLC患者，为筛选新疆维吾尔族NSCLC EML4-ALK融合基因靶向治疗人群提供了理论依据，但EML4-ALK融合基因还不能作为独立的预后影响因素，还需要进一步的探讨，从而为NSCLC个体化治疗提供理论依据。

［1］ 周满春. 非小细胞肺癌组织的CT肺灌注成像及其与恶性分子表达量的相关性［J］. 海南医学院学报, 2016, 22(4): 377-380, 384.

［2］ Sandjar D, Jaclyn B, Jeffrey SH, et al. Cost effectiveness of EML4-ALK fusion testing and first-line crizotinib treatment for patients with advanced ALK-positive non-small-cell lung cancer［J］. J Clin Oncol, 2014, 32(10): 1012-1019.

［3］ Yamaguchi N, Lucena-Araujo AR, Nakayama S, et al. Dual ALK and EGFR inhibition targets a mechanism of acquired resistance to the tyrosine kinase inhibitor crizotinib in ALK rearranged lung cancer［J］. Lung cancer, 2014, 83(1): 37-43.

［4］ Kawahara A, Akiba J, Abe H, et al. Eml4-alk-positive lung adenocarcinoma with signet-ring cells［J］. Diagn Cytopathol, 2014, 42(5): 460-463.

［5］ 黄受方. 国际肺癌研究协会/美国胸科学会/欧洲呼吸学会国际多学科肺腺癌分类(2011年版)解读［J］. 中华病理学杂志, 2011, 40(12): 793-796.

［6］ Zhang P, Guo R, Li Z, et al. Effect of Smoking on Common Carotid Artery Wall Elasticity Evaluated by Echo Tracking Technique［J］. Ultrasound Med Biol, 2014, 40(3): 643 -649.

［7］ 叶波, 赵珩. 第八版国际肺癌TNM分期修订稿解读［J］. 中国肺癌杂志, 2016, 19(6): 337-342.

［8］ Soda M, Takada S, Takeuchi K, et al. A mouse model for EML4-ALK-positive lung cancer［J］. Proc Natl Acad Sci U S A, 2008, 105(50): 19893-19897.

［9］ Guo FC, Liu X, Qing Q, et al. EML4-ALK induces epithelial-mesenchymal transition consistent with cancer stem cell properties in H1299 non-small cell lung cancer cells［J］. Biochem Biophys Res Commun, 2015, 459(3): 398-404.

［10］ Perez CA, Velez M, Raez LE, et al. Overcoming the resistance to Crizotinib in patients with Non-Small Cell Lung Cancer harboring EML4/ ALK translocation［J］. Lung cancer, 2014, 84(2): 110-115.

［11］ Lazzari C, Spitaleri G, Catania C, et al. Targeting ALK in patients with advanced Non Small Cell Lung Cancer: Biology, diagnostic and therapeutic options［J］. Crit Rev Oncol Hematol, 2014, 89(3): 358-365.

［12］ Hsu SC, Hung TH, Wang CW, et al. Anaplastic lymphoma kinase translocation is correlated with anaplastic lymphoma kinase expression and mutually exclusive with epidermal growth factor receptor mutation in Taiwanese non-small cell lung cancer［J］. Pathol Int, 2015, 65(5): 231-239.

［13］ Xu CW, Wang G, Wang WL, et al. Association between EML4-ALK fusion gene and thymidylate synthase mRNA expression in non-small cell lung cancer tissues［J］. Exp Ther Med, 2015, 9(6): 2151-2154.

［14］ Ota K, Azuma K, Kawahara A, et al. Induction of PD-L1 Expression by the EML4-ALK Oncoprotein and Downstream Signaling Pathways in Non-Small Cell Lung Cancer［J］. Clin Cancer Res, 2015, 21(17): 4014-4021.

［15］ Ali G, Chella A, Lupi C, et al. Response to erlotinib in a patient with lung adenocarcinoma harbouring the EML4-ALK translocation: A case report［J］. Oncol lett, 2015, 9(4): 1537-1540.

［16］ Robesova B, Bajerova M, Hausnerova J, et al. Identification of atypical ATRNL1 insertion to EML4-ALK fusion gene in NSCLC［J］. Lung cancer, 2015, 87(3): 318-320.

［17］ Chun SG, Iyengar P, Gerber DE, et al. Optic Neuropathy and Blindness Associated With Crizotinib for Non-Small-Cell Lung Cancer With EML4-ALK Translocation［J］. J Clin Oncol, 2015, 33(5): E26-E27.

［18］ Borrelli N, Giannini R, Proietti A, et al. KIF5B/RET fusion gene analysis in a selected series of cytological specimens of EGFR, KRAS and EML4-ALK wild-type adenocarcinomas of the lung［J］. Lung cancer, 2013, 81(3): 377-381.

［19］ Alì G, Proietti A, Niccoli C, et al. EML4-ALK translocation in both metachronous second primary lung sarcomatoid carcinoma and lung adenocarcinoma: A case report［J］. Lung cancer, 2013, 81(2): 297-301.

［20］ Hotta K, Kiura K, Tabata M, et al. A Survey of Japanese Thoracic Oncologists' Perception of Diagnostic and Treatment Strategies for EGFR Mutant or EML4-ALK Fusion Non-small Cell Lung Cancer［J］. Chest, 2014, 146(6): e222-e225.

Expression of EML4-ALK fusion gene in non-small cell lung cancer patients in Xinjiang Uygur and its influence on prognosis

Maira·Abduklim1, Ardila·Siyiti2, Patiguli Arsidin3
(1. Department of respiration, The Sixth Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi 830002, China; 2. Department of Pathology, Affiliated Tumor Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi 830000, China; 3. Department of internal medicine, Affiliated Tumor Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi 830000, China)

EML4-ALK fusion gene; Xinjiang Uygur; non-small cell lung cancer; prognosi-s肺癌是发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，其中非小细胞肺癌（NSCLC）占肺癌的80～85%［1］，目前NSCLC的治疗已进入驱动基因指导下的精准医学时代，棘皮动物微管相关样蛋白4-间变淋巴瘤激酶（EML4-ALK）融合基因是NSCLC发生发展过程中又一重要的驱动基因及治疗靶点［2，3］，但是EML4-ALK融合基因在NSCLC中的阳性率是否存在地理或种族差异尚不明确［4］，本研究拟分析新疆维吾尔族和汉族NSCLC患者的EML4-ALK融合基因表达情况、新疆维吾尔族NSCLC患者EML4-ALK融合基因表达与临床病理特征的关系及对预后的影响，从而为新疆维吾尔族肺癌患者治疗提供新思路，指导预后，并为实现精准治疗提供理论依据。

R734.2

A

1673-016X（2017）01-0058-04

2016-12-10

玛依拉·阿不都克力木，E-mail：mayila22@163.com

［Abstract］Objective To investigate the expression of EML4-ALK fusion gene and its effect on the prognosis of NSCLC patients in Xinjiang Uygur. Methods Immunohistochemistry method and EML4-ALK FISH method in Xinjiang Uygur and Han Chinese patients with the expression of NSCLC fusion gene, and analysis of fusion gene in Xinjiang Uygur patients with NSCLC EML4-ALK expression with clinicopathologic features and prognosis. Results Xinjiang Uygur, Han NSCLC patients with EML4-ALK fusion gene positive expression rates were 21%, 9%, the statistical test showed that different ethnic groups with NSCLC EML4-ALK fusion gene positive expression rate had statistical difference, Xinjiang Uygur NSCLC patients with EML4-ALK fusion gene positive expression rate was significantly higher than that of Han nationality; Xinjiang Uygur NSCLC patients with EML4-ALK fusion gene expression and age, gender, smoking, clinical stage, pathological type, older than 55 years of age, female, smoking, high clinical stage, pathological type of prostate cancer in Xinjiang Uygur NSCLC patients with EML4-ALK fusion gene positive expression rate was higher; The positive expression of EML4-ALK fusion gene in Xinjiang Uygur NSCLC patients the median survival time was 22 months(95%CI, 11 ～ 26 months), no statistically significant differences between the different expression of EML4-ALK fusion gene in over all survival. Conclusion Xinjiang Uygur NSCLC patients with EML4-ALK fusion gene positive expression rate is higher, more common in older than 55 years of age, female, smoking, high clinical stage, pathological type is adenocarcinoma, but EML4-ALK fusion gene can not be used as independent prognostic factors.