复方木香丸质量标准的提高

2017-04-06赵军徐媛王庆伟刘梅

中国医药导报 2017年6期

赵军+徐媛+王庆伟++刘梅

[摘要] 目的提高并完善复方木香丸的质量标准。方法采用薄层色谱法分别对青皮、莱菔子、姜黄、草豆蔻、香附进行定性鉴别；以高效液相色谱法测定橙皮苷的含量。分析采用C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相甲醇-水（48∶52），体积流量1.0 mL/min；柱温30℃；检测波长284 nm。结果各药材在相应的薄层色谱条件下斑点清晰，分离度好，阴性无干扰。橙皮苷在17.5～350 μg范围内线性关系良好（R2=0.9995），平均加样回收率为102.88%，RSD为1.22%（n=6），3批样品含量测定结果均值为12.41 mg/g。结论该鉴别方法专属性强、灵敏度高；定量方法简便快速、结果准确且重复性好，可用于控制复方木香丸的质量。

[关键词] 复方木香丸；青皮；莱菔子；姜黄；草豆蔻；香附；橙皮苷；薄层色谱；高效液相色谱

[中图分类号] R284 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）02（c）-0146-05

复方木香丸由青皮、木香、草豆蔻、姜黄、莱菔子、香附、白术、荜澄茄及砂仁组成，功能主治为补脾益胃、理气解郁、止痛调经，用于食积不消、不思饮食、脘腹胀满、气郁不舒、月经不调、乳肿、乳核等症。该制剂所含药味种类众多，成分非常复杂，原标准仅有木香的薄层色谱（TLC）鉴别。为更全面控制该制剂的内在质量，本研究采用TLC法鉴别青皮、姜黄、草豆蔻、莱菔子、香附；以青皮中有效成分橙皮苷[1]为指标成分，应用高效液相色谱（HPLC）法对其进行定量测定，为复方木香丸质量控制提供一定的科学依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Agilent1260高效液相色谱仪，ZF-2C型暗箱式自动紫外分析仪（上海安灵），BT125D电子天平（sartorius），HK5200DV超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）。

1.2 材料

橙皮苷、小豆蔻明、芥子碱硫氰酸盐、莱菔子对照药材、姜黄素、姜黄对照药材、香附对照药材，均由中国食品药品检定研究院提供，批号分别为110721-201316、110763-201403、111702-201504、121074-201304、110823 -201405、121188-201304、121059-201407，复方木香丸（批号：20141207、20150314、20150509，解放军第一医院），甲醇为色谱纯（Fisher），其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 TLC鉴别

2.1.1 青皮取本品5 g研细，加甲醇20 mL超声20 min，滤过取滤液5 mL浓缩至2 mL作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。照TLC法[2]吸取上述溶液各2 μL分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（100∶17∶13）为展开剂展开至5 cm，取出晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（20∶10∶1∶1）的上层溶液为展開剂展至约8 cm，取出晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365 nm）下检视，结果见图1，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2.1.2 姜黄取本品2 g研细，加乙醇20 mL静置10 min，时时振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取姜黄对照药材0.2 g，同法制成对照药材溶液；再取姜黄素对照品，制成0.5 mg/mL的乙醇溶液作为对照品溶液。照TLC法[2]吸取供上述溶液各1 μL分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水（100∶2∶0.7）为展开剂展开，取出晾干分别置日光和紫外光灯（365 nm）下检视。结果见图2，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点或荧光斑点。

2.1.3 草豆蔻取本品5 g研细，加甲醇20 mL静置5 min，时时振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解作为供试品溶液。另取小豆蔻明对照品，制成3 mg/mL的甲醇溶液作为对照品溶液。照TLC法[2]吸取上述溶液各2 μL分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇（15∶4∶1）为展开剂展开，取出晾干，100℃加热至斑点显色清晰，喷以5% FeCl3乙醇溶液，结果见图3，供试品色谱中，在于对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2.1.4 莱菔子取本品3 g研细，加乙酸乙酯50 mL超声15 min，弃去乙酸乙酯溶液，药渣挥干，加甲醇40 mL超声15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解作为供试品溶液。另取莱菔子对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。再取芥子碱硫氰酸盐对照品制成1 mg/mL的甲醇溶液作为对照品溶液。照TLC法[2]吸取上述溶液各3 μL分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水（10∶2∶3）的上层溶液为展开剂展开，取出晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视，结果见图4，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显示相同颜色荧光斑点。

2.1.5 香附取本品2 g研细，加环己烷30 mL超声30 min，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解作为供试品溶液。取香附对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。照TLC法[2]吸取上述溶液各1 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-乙酸（100∶1∶0.5）为展开剂展开，取出晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视，结果见图5，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2.2 HPLC含量测定

2.2.1 色谱条件 Inertsil ODS-3色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-水（48∶52，v/v）；流速1.0 mL/min；柱温30℃；检测波长284 nm。

2.2.2 对照品溶液的制备精密称定橙皮苷对照品适量，制成0.1 mg/mL的甲醇溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备取本品0.3 g研细，精密称定，置三角瓶中，精密加入甲醇50 mL，摇匀，超声处理30 min，放冷，甲醇补足重量，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 专属性试验按复方木香丸处方比例及工艺，同法制成不含青皮的阴性样品，按“2.2.3”项下方法制备阴性样品溶液，精密吸取对照品、供试品及阴性样品溶液各10 μL，进样分析。结果见图6，供试品与橙皮苷对照品均在8.4 min显相同的色谱峰，而阴性样品在此无相关峰出现，表明此方法的专属性良好。

2.2.5 线性与范围精密称定橙皮苷对照品，加甲醇制成350 μg/mL的储备液。精密吸取储备液适量，用甲醇稀释成系列浓度对照品溶液（17.5、87.5、131.3、175、262.5、350 μg/mL）。测定橙皮苷峰面积，分别以浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，得回归方程Y=14.658X+106.64，R2=0.9995（n=6），橙皮苷在17.5～350 μg/mL范围内具有良好的线性关系。

2.2.6 精密度试验取同一供试品溶液重复进样6次，测定橙皮苷峰面积，RSD为0.23%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.2.7 稳定性试验分别取放置0、2、4、6、8、16、24 h的供试品溶液，测定橙皮苷的峰面积，RSD为0.45%，结果表明供试品溶液在室温下24 h内稳定。

2.2.8 重复性试验取同批（批号：20150509）样品，按“2.2.3”项下的方法平行制备6份供试品溶液，分别测定，RSD为1.3%，表明此方法的重复性良好。

2.2.9 加样回收率取同一批已知含量的复方木香丸（批号：20150509）6份，研细，每份取约0.3 g，精密称定，分别精密加入橙皮苷对照品（对照品加入量与所取供试品中待测成分量之比控制在1∶1），按“2.2.3”方法制备样品溶液，用6个测定结果进行评价。结果见表1，平均回收率为102.88%，RSD为1.22%（n=6）。

2.2.10 样品测定取样品3批（批号：20141207、20150314、 20150509），按“2.2.3”项下的方法制备供试品溶液，测定橙皮苷的含量。

3 讨论

3.1 青皮的鉴别考察

青皮具有疏肝破气、消积化滞的功效[3]，中医用于治疗胸肋胀痛、胃部痞满、疝气、食积、乳肿、乳核等症[4]。现代药理研究表明，青皮具有促进胃肠运动、利胆、松弛支气管平滑肌等作用[5]。《中国药典》中青皮鉴别的前处理采用回流的方式[6]，试验中发现超声与回流处理的效果相当，故采取更为简便的超声处理；药典中鉴别青皮采用二次展开的方法，首次展距为3 cm[6]，橙皮苷薄层斑点比移值Rf < 0.2，不是十分合理；将首次展距调整为为5 cm后，橙皮苷薄层斑点比移值Rf约为0.4，有助于结果的观察和判断。

3.2 草豆蔻的鉴别考察

草豆蔻主治燥濕健脾、温胃止呕[7]，近年药理研究表明，草豆蔻能够镇吐、保护胃黏膜[8]及治疗胃溃疡的作用，临床上用于治疗脘腹胀满冷痛、嗳气呕逆、不思饮食等[9]。《中国药典》中草豆蔻鉴别的前处理采用水浴的方式[6]；试验表明静置与水浴处理的效果相当，故采取更为简便的静置处理；药典中采用小豆蔻明和山姜素两种对照品作为草豆蔻的鉴别指标[6]，实际在阴性样品中具有明显的山姜素干扰斑点，而小豆蔻明专属性较好，因此在草豆蔻鉴别中只采用小豆蔻明作为鉴别指标。

3.3 莱菔子的鉴别考察

莱菔子具有消食除胀、降气化痰的功效[10]，用于饮食停滞，脘腹胀痛，大便秘结，积滞泻痢，痰壅喘咳[11]。现代药理研究表明，莱菔子具有促进胃肠动力、抗结肠癌、降压等作用[12]。《中国药典》中莱菔子的鉴别中前处理采用易燃易爆试剂乙醚回流处理[6]，用乙酸乙酯代替乙醚后取得相同的效果，故采用更安全的乙酸乙酯作为前处理试剂；同时前处理方法由更简便的超声提取替代回流提取，处理时间由2 h缩短为30 min。

3.4 姜黄的鉴别考察

姜黄具有破血行气、通经止痛之功效[13]，在临床上用于胸胁剌痛、闭经、癓瘕等疗效卓著[14]。现代药理研究表明，姜黄具有辅助保护胃黏膜、保护肝脏等作用[15]。《中国药典》中姜黄的鉴别中展开剂为三氯甲烷-甲醇-甲酸（96∶4∶0.7）[6]，由于三氯甲烷毒性较大，并具有潜在的致癌性[16]，故用毒性较低的二氯甲烷替代，调整展开剂比例为二氯甲烷-甲醇-甲酸（100∶1∶0.7），取得了较好的效果，因此采用更安全的二氯甲烷-甲醇-甲酸（100∶1∶0.7）作为展开剂。

3.5 香附的鉴别考察

香附主要具有疏肝解郁、调经止痛的功效[17]，现代研究表明，香附挥发油具有抗抑郁[18]、促胃肠动力、保护胃黏膜等药理活性[19]。《中国药典》中香附的鉴别中使用三氯甲烷-乙酸乙酯-乙酸（80∶1∶1）作为展开剂[6]，斑点不清晰，并且对实验人员的危害较大，因此用毒性较低的二氯甲烷替代三氯甲烷，并调整展开剂比例为二氯甲烷-甲醇-甲酸（100∶1∶0.7），结果具有良好的专属性和重现性。药典中前处理采用易燃易爆试剂乙醚静置1 h的方法[6]，为了提高实验的安全性及缩短处理时间，改用环己烷超声30 min的前处理方法，取得了相同的效果。

3.6 橙皮苷的含量测定

橙皮苷是柑橘类药用植物果实的主要药效成分[20]，橙皮苷具有降压、改变体内酶活性、改善微循环等生理功能[21]。《中国药典》对青皮的含量测定以橙皮苷为标准品，流动相为甲醇-水（25∶75）[6]，实际操作中使用该流动相运行1 h无相关峰出现，调整流动相比例为甲醇-水（48∶52），橙皮苷出峰时间在8.4 min，峰形较好，阴性无干扰，稳定性、重复性俱佳，故最终采取甲醇-水（48∶52）作为橙皮苷含量测定的流动相。

复方木香丸原质量标准制订时间较早，没有有效成分含量测定项；其鉴别项仅有木香的鉴别，且没有阴性样品作对照，因而不够严谨，不能作为判定药品质量的依据。现结合中医药理论选择了方中5味中药做鉴别，占据处方药味的1/2以上。在TLC鉴别中，采用对人和环境更安全、更环保的试剂，缩短工作时间，提高了实验效率。由于处方中药材大多含有挥发油成分，且含量较高，君药木香的含量测定指标木香烃内酯和去氢木香内酯[6]在阴性样品中有明显干扰，且通过调整前处理方法及色谱条件无法排除，因此选取臣药青皮的有效成分橙皮苷作为含量测定指标。在实际操作中发现现行药典方法不是十分理想，甚至出现明显错误，随后对其进行优化，最终确定了行之有效的檢测条件。本实验建立了复方木香丸的质量标准，该方法操作简单，重复性良好，准确可靠，从不同角度全面规范了该制剂的质量控制方法，保证了安全性与有效性，为同类药物的质量研究提供了参考。

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