FOXP3、B7-H4在卵巢子宫内膜异位囊肿组织中的表达及意义

李晓贻，时燕萍，夏亲华

(江苏省中医院，南京210039)

卵巢子宫内膜异位囊肿是指子宫内膜异位症发病过程中，异位的子宫内膜进入卵巢皮质生长，逐步发展而导致的囊肿型病变[1]。研究发现，子宫内膜异位症的发病可能与T细胞介导的免疫逃逸有关，被认为是子宫内膜异位症最重要的机制之一[2]。调节性T细胞(Treg)在肿瘤、器官移植、自身免疫病和病毒性感染等疾病中发挥着重要作用，而叉头状转录因子3(FOXP3)是调控Treg细胞功能的主要转录因子[3]。B7同源体4(B7-H4)作为B7超家族的新成员，可通过抑制IL-2及T细胞增殖来抑制T细胞的免疫应答[4]，调节免疫活性，在肿瘤的发生发展中起着重要作用。但FOXP3、B7-H4在卵巢子宫内膜异位囊肿发病中的作用尚不明确。2014年1月～2016年1月，我们检测了30例卵巢子宫内膜异位囊肿患者囊肿组织FOXP3与B7-H4的表达，并与二者在卵巢癌组织及卵巢良性肿瘤组织中的表达进行比较，探讨二者在卵巢子宫内膜异位囊肿发病中的意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择同期在我院行手术治疗的卵巢子宫内膜异位囊肿患者囊肿组织30例作为囊肿组，患者年龄(35.37±9.55)岁，囊肿直径>5 cm，r-AFS分期>Ⅲ期，术后均经病理检查证实为卵巢子宫内膜异位症囊肿。选取行手术治疗的卵巢癌患者卵巢癌组织20例作为癌症组，患者年龄(37.95±12.73)岁，术后均经病理检查证实为卵巢癌，临床分期Ⅰc～Ⅱ期7例、Ⅲ～Ⅳ期13例。选择行手术治疗的良性卵巢肿瘤患者肿瘤组织20例作为良性组，患者年龄(37.80±10.65)岁，术后均经病理检查证实为良性卵巢肿瘤。三组患者的年龄具有可比性。

1.2 病变组织FOXP3及B7-H4检测方法 采用免疫组化Envision两步法。将组织标本做成蜡块后进行切片，采用二甲苯脱蜡，微波抗原修复后，加入一抗(1∶100稀释鼠抗人FOXP3单抗或1∶150稀释鼠抗人 B7-H4单抗)封闭4 ℃过夜；加入Envision后进行DAB显色，苏木素复染，树脂封片。阴性对照采用PBS作为一抗。FOXP3主要表达于淋巴细胞的细胞核中，B7-H4 主要表达于上皮细胞的胞质和细胞膜中，二者均以出现棕黄色或黄色颗粒为阳性表达。首先按阳性细胞面积占全片的比例计分，≤5%计0分，>5%～25%计1分，>25～50%计2分，>50%～75%计3分，>75%计4分。其次按着色强度计分，无色为0分，淡黄色为1分，黄色为2分，棕色为3分。二者相加为最终得分，以≥3分判定为阳性表达。

1.3 统计学方法 应用SPSS21.0统计软件。计数资料比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman相关分析法。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组病变组织FOXP3及B7-H4表达比较 囊肿组病变组织FOXP3、B7-H4阳性表达率分别为76.7%(23/30)、80.0%(24/30)，癌症组病变组织FOXP3、B7-H4阳性表达率分别为85.0%(17/20)、90.0%(18/20)，良性组病变组织FOXP3、B7-H4阳性表达率分别为0、5.0%(1/20)。囊肿组及癌症组病变组织FOXP3、B7-H4阳性表达率均高于良性组(P均<0.05)，囊肿组与癌症组病变组织FOXP3、B7-H4阳性表达率差异均无统计学意义(P均>0.05)。

2.2 FOXP3、B7-H4在卵巢子宫内膜异位囊肿组织中表达的相关性 卵巢子宫内膜异位囊肿组织中FOXP3、B7-H4表达呈正相关(r=0.915，P<0.05)。

3 讨论

子宫内膜异位症虽属良性病变，却具有近似恶性肿瘤的行为学特点，如侵袭、种植、远处转移等。研究发现，子宫内膜异位症发病后，有15%的内膜细胞可在离开宫腔后避开机体的免疫监视，而在子宫体以外的地方存活，导致各种异位病变的发生，这一组织学变化被认为与免疫逃逸机制有关。如异位子宫内膜进入卵巢皮质生长，长期发展则可导致卵巢子宫内膜异位囊肿的发生[1]。但卵巢子宫内膜异位囊肿的发病是否与免疫逃逸有关，尚不明确。

FOXP3作为除CD4、CD25分子外的T细胞特征性标志物，可以调节T细胞的功能[5]。研究发现，FOXP3可以抑制T细胞因子转录，可以通过直接抑制核转录因子κB(NF-κB)和T细胞核因子(NFAT)的活性，或通过竞争性结合NFAT的DNA结合位点，从而抑制T细胞的细胞因子表达[6]。FOXP3在肿瘤细胞中可起到T细胞的作用，是肿瘤细胞免疫逃逸的机制之一[7]。研究表明，FOXP3可通过影响调节性T细胞的抑制功能，发挥免疫抑制的作用[8]。本研究发现，囊肿组及癌症组病变组织FOXP3阳性表达率均高于良性组，考虑其原因可能为子宫内膜异位囊肿与卵巢癌在转移行为学上相似、与FOXP3免疫逃逸有关所致。

B7-H4是通过生物信息学新发现的属于B7家族的一种协同刺激因子[9]。B7-H4 mRNA在人体的肾、肝等器官中广泛存在[10]，作为细胞弱化因子，可通过负向调节T细胞来让肿瘤细胞避免被攻击，为肿瘤生长提供条件。B7-H4与一个未知的T细胞受体结合，进而抑制肿瘤特异性T细胞的活化和增殖，从而帮助肿瘤细胞逃过机体免疫系统的监视及杀伤。Shi等[11]研究发现，肿瘤上皮细胞过表达B7H4蛋白不仅具有免疫抑制的作用，还能促使上皮细胞突变，导致肿瘤形成。虽然 B7H4 mRNA分布广泛，然而正常组织中B7-H4蛋白的转录或翻译过程受到严格调控，因此其表达的蛋白在正常组织中表达较少[12]。研究表明， B7-H4蛋白移植入小鼠体内后，可使小鼠的肿瘤细胞增殖，并抑制肿瘤细胞的凋亡，表明其具有抑制肿瘤细胞凋亡的作用。相关研究表明，阻断 B7-H4 表达可增强癌组织内免疫细胞的杀伤力[13]。另外，B7-H4抗体也可通过抑制IL-10/Treg依赖性来抑制小鼠或人体T细胞反应，从而达到治疗自身免疫性疾病的目的，也说明B7-H4有削弱机体免疫反应的作用[14]。研究表明，B7-H4可通过促进上皮恶性转化、肿瘤形成及抑制肿瘤细胞凋亡等作用促进卵巢癌的发生发展。但B7-H4在卵巢子宫内膜异位囊肿发病中的作用尚不明确。本研究发现，囊肿组及癌症组病变组织B7-H4阳性表达率均高于良性组，表明卵巢子宫内膜异位囊肿及卵巢癌组织中B7-H4均明显高于卵巢良性肿瘤组织，考虑B7-H4也可能通过免疫逃逸使子宫内膜上皮细胞逃过机体免疫从而种植转移。

大量研究证实，在卵巢癌组织中，巨噬细胞及卵巢癌细胞均表达B7-H4。巨噬细胞表面的B7-H4可将FOXP3+、CD25+、CD4+T细胞的抑制信号传递给外来抗原，此外巨噬细胞分泌的趋化因子22也可以让T细胞定向转移至肿瘤微环境中。因此，FOXP3及B7-H4在免疫逃逸机制中具有协同作用。本研究结果显示，OXP3和B7-H4在卵巢子宫内膜异位囊肿和卵巢癌中均为高表达，且二者表达呈正相关。因此，FOXP3和B7-H4可能成为诊断子宫内膜异位囊肿的新靶点。