类风湿关节炎患者外周血单个核细胞中B10细胞比例及临床意义

李晓燕，吴贵福，张慧琴

(陕西省人民医院，西安710068)

类风湿关节炎患者外周血单个核细胞中B10细胞比例及临床意义

李晓燕，吴贵福，张慧琴

(陕西省人民医院，西安710068)

目的 观察类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)中B10细胞比例，并探讨其临床意义。方法 选取疾病活动期RA患者56例(RA组)和体检健康者25例(对照组)，取外周静脉血，采用流式细胞术检测两组PBMC中的B10细胞(表达CD19+CD5+CD1dhi并分泌IL-10的细胞亚群)，分析其与RA患者临床指标的关系。结果 RA组PBMC 中B10细胞比例为0.46 %±0.24%，低于对照组的1.98%±0.45%(P<0.05)。PBMC中B10细胞比例与RA患者病程、压痛关节数、肿胀关节数、C反应蛋白、红细胞沉降率、病情活动程度DAS28评分、类风湿因子、抗环瓜氨酸肽抗体均呈负相关(r分别为-0.73、-0.46、-0.52、-0.44、-0.61、-0.58、-0.72、-0.66，P均<0.05)。结论 RA患者PBMC中B10细胞比例降低，且其水平可反应病情活动及炎症反应程度。

类风湿关节炎；B10细胞；外周血单个核细胞；病情活动；炎症反应

研究表明，B细胞在类风湿关节炎(RA)的发生、病情进展中扮演致病的角色。但有学者也发现，在B细胞缺陷小鼠模型中可出现关节炎症状加重现象，提示B细胞中可能存在着一群发挥免疫抑制作用的细胞[1]。这种具有负性免疫调节的B细胞亚群被称为调节性B细胞(Breg)[2]。Breg可通过分泌细胞因子和细胞间接触的方式发挥作用，而细胞因子IL-10是其介导免疫抑制的主要方式。为区别于分泌其他细胞因子的Breg亚群，这群表达CD19+CD5+CD1dhi并分泌IL-10的细胞亚群称为B10细胞[3～5]。2015年1月～2016年6月，我们观察了RA患者外周血单个核细胞(PBMC)中B10细胞比例变化，并分析探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取陕西省人民医院同期收治的RA患者56例(RA组)，男40例、女16例，年龄18～75岁，病程5～50个月；压痛关节数4～28个，肿胀关节数4～28个；C反应蛋白(CRP) 0.8～19.5 mg/dL，红细胞沉降率(ESR)19～140 mm/h，病情活动程度DAS28评分3.05～8.16分，类风湿因子(RF)0～7 630 IU/mL，抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体0～1 750 RU/mL。患者未经任何治疗或仅服用非甾体类抗炎药，排除感染、恶性肿瘤、传染病以及心、肝、肾功能异常等患者。选取年龄及性别相匹配的健康人25例作为对照组。本研究获医院伦理委员会批准，研究对象均签署知情同意书。

1.2 PBMC中B10细胞检测方法 抽取外周静脉血，采用Percoll密度梯度离心法分离外周血PBMC；调整细胞密度为1×107/ mL，用流式细胞术(FACSort；BD Biosciences)检测。采用细胞膜与细胞内细胞因子共染色，抗CD19/CD5/CD1d抗体细胞膜染色、抗CD19细胞膜/IL-10胞内染色阳性细胞为B10细胞。

2 结果

2.1 两组PBMC 中B10细胞比例比较 RA组PBMC 中B10细胞比例为0.46 %±0.24%，低于对照组的1.98%±0.45%(P<0.05)。

2.2 RA患者PBMC 中B10细胞比例与各临床指标的关系 PBMC中B10细胞比例与RA患者病程、压痛关节数、肿胀关节数、CRP、ESR、DAS28评分、RF、抗CCP抗体均呈负相关(r分别为-0.73、-0.46、-0.52、-0.44、-0.61、-0.58、-0.72、-0.66，P均<0.05)。

3 讨论

RA是一种系统性、致残率高的自身免疫性疾病，其发病有众多炎性细胞和细胞因子的参与[6,7]。近年来以T细胞、B细胞和各种炎性细胞因子为治疗靶点的生物制剂不断出现[8]，这极大改善了RA 患者的预后。然而，一些难治性RA患者经上述治疗后仍不能缓解。因此，需进一步深入研究RA的发病机制。

随着研究的深入，各种T细胞亚群如Th1/Th2、Th17、Foxp3+Treg细胞在RA发病中的作用逐渐受到重视。但对于发病机制复杂的RA，主要以Th1细胞介导发病的胶原诱导的小鼠关节炎模型在反映整个RA的病理过程方面存在局限性。因此，近年来 B细胞在RA发病中的作用备受重视[9]。研究表明，B细胞通过多种方式参与RA发病：①分泌自身抗体参与机体的体液免疫。早在上世纪90年代，人们发现RA患者血清中存在多种自身抗体，如抗Ⅱ型胶原抗体、抗CCP抗体等。②提呈抗原作用。可活化T细胞，诱导后者产生TNF-α，进而活化巨噬细胞。③分泌细胞因子。可分泌TNF-α、IL-6等细胞因子，进而刺激固有免疫反应细胞活化，增强RA炎症反应。④在RA患者滑膜组织内参与形成滤泡外生发中心，参与关节局部破坏。此外，B淋巴细胞刺激因子对B细胞的调节异常也会促进B细胞的恶性增殖，导致疾病的发生和进展。

研究发现，激活后的B10细胞主要通过分泌细胞因子和细胞接触等多种方式发挥免疫抑制作用，而分泌IL-10是B10介导免疫抑制的主要方式。动物研究表明，给予自身免疫病动物体内输入少量的B10细胞即可达到较长时间的保护作用，提示B10细胞可能在体内增殖，同时或也可能激活了其他免疫抑制细胞，诱导免疫抑制“瀑布效应”的形成。B10细胞不仅抑制Th17/Th1细胞的反应，而且能够抑制活化的CD4+T细胞的功能并上调Treg细胞的表达，也可使效应性T细胞转化为分泌IL-10的调节性T细胞[10]。目前，关于B10细胞表面标记还未完全达成一致[11]， 但是其能够分泌IL-10却是公认的。动物实验发现，B10细胞可缓解炎性肠病[12]、系统性红斑狼疮[13]等小鼠模型的症状。近期研究发现，多种自身免疫性疾病患者体内B10细胞表达异常。本研究结果发现，RA患者体内B10细胞水平较正常人显著降低，初步提示B10细胞在RA的发病中起抑制作用；并且，进一步研究结果证实B10水平与患者病程、病情活动度、炎症指标呈负相关。因此，B10细胞可作为RA发病及病情评估的重要指标，这为探索B10治疗RA的可能提供了理论基础。但是，B10细胞是如何参与RA的发病，对RA患者T细胞、B细胞、单核细胞等炎性细胞是如何调节，以及是否具有过继免疫治疗作用，尚需进一步研究。

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陕西省科学研究计划项目(S2016YFJQ1621)。

张慧琴(E-mail: zhq1589173@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.18.030

R593.22

B

1002-266X(2017)18-0083-03

2016-11-16)