葛根素联合替米沙坦对肥胖性高血压患者血管内皮细胞TLR/NF-κB炎症信号通路的影响

2017-04-01郭亚东邢占良舒宝瑞刘春玲贾子雷

河北医药 2017年3期

郭亚东邢占良舒宝瑞刘春玲贾子雷

郭亚东邢占良舒宝瑞刘春玲贾子雷

目的观察葛根素联合替米沙坦对肥胖性高血压患者血管内皮细胞Toll样受体/核因子-κB(TLR/NF-κB)炎症信号通路的影响。方法选取2013年6月至2015年6月诊治的肥胖性高血压患者160例为病例组，另选取同期进行健康体检的正常人100例为正常组。采用Real time-PCR测定2组血管内皮细胞Toll样受体2(TLR2)、Toll样受体4(TLR4)mRNA表达。将160例肥胖性高血压患者随机分为观察A组和观察B组，每组80例。观察A组给予替米沙坦治疗，观察B组在观察A组基础上加用葛根素治疗，疗程1个月。采用Real time-PCR和Western-blot分别测定TLR2、TLR4、NF-κB及其抑制蛋白IκBa mRNA和蛋白表达。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)水平变化。结果 (1)与对照组比较，肥胖性高血压患者组TLR2、TLR4 mRNA表达显著升高，差异有统计学意义(P<0.05)；(2)经治疗后，观察A组和观察B组TLR2、TLR4、NF-κBmRNA和蛋白表达及TNF-α、IL-6、hs-CRP水平显著下降，IκBamRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05)，但观察组以上指标改善程度优于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论肥胖性高血压患者存在明显的免疫炎性反应紊乱，葛根素联合替米沙坦能够明显下调TLR/NF-κB炎症信号通路的激活及炎性因子释放，进而对血管内皮损伤发挥保护作用。

葛根素；替米沙坦；肥胖性高血压；Toll样受体；NF-κB

肥胖是原发性高血压的最主要危险因素之一，近年来我国肥胖性高血压患病率逐年升高，患者并发心血管疾病的几率较单纯肥胖或单纯高血压患者明显升高[1]。肥胖性高血压的发病机制复杂，可能与胰岛素抵抗、交感神经过度激活、血管内皮细胞损伤、炎症、免疫功能紊乱等有关，但其确切机制尚未阐明[2]。Toll样受体家族(Toll-like receptors，TLRs)是定位于细胞表面的高度保守的跨膜受体，广泛分布于单核细胞、血管内皮细胞、心肌细胞等。TLRs与其配体结合后通过促进核因子-κB(NF-κB)的核转位发挥多种生物学效应。研究发现，TLRs与胰岛素抵抗、血管内皮损伤、免疫炎性反应等病理过程密切相关，其表达上调可能对肥胖性高血压发病起促进作用[3,4]。目前临床治疗肥胖性高血压的药物存在肝脏毒性大、效果不佳等缺点，因此寻找安全有效的药物并探明药物作用的靶点对于治疗该病至关重要。研究显示，替米沙坦具有降压、改善脂质代谢等药理作用，已广泛应用于高血压的临床治疗中[5]。葛根素是从豆科植物野葛、甘葛中提取的有效成份，具有降压、抗血小板聚集、保护心肌细胞等作用[6]。本研究通过观察葛根素联合替米沙坦对肥胖性高血压患者血管内皮细胞TLR/NF-κB炎症信号通路的影响，旨在探讨葛根素联合替米沙坦治疗肥胖性高血压的可能机制，为葛根素在肥胖性高血压治疗领域的应用提供实验依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2013年6月至2015年6月我院门诊及住院的原发性高血压且体重指数(BMI)≥25 kg/m2患者160例为研究对象，符合2004年《中国高血压防治指南》制定的高血压诊断标准，即收缩压(SBP)≥140 mm Hg，舒张压(DBP)≥90 mm Hg。排除标准：(1)严重心、肝、肺、肾等重要脏器功能衰竭者；(2)恶性肿瘤、自身免疫性疾病患者；(3)药物过敏者；(4)近期服用过减肥药及降脂药者；(5)继发性高血压患者。选取同期于我院进行健康体检的正常人100例为对照组。160例患者随机分为观察A组和观察B组，每组80例。观察A组男56例，女24例；年龄40～61岁，平均年龄(57.22±9.13)岁；高血压Ⅰ级20例，Ⅱ级46例，Ⅲ级14例；合并冠心病者22例，合并糖尿病者18例。观察B组男52例，女28例；年龄38～62岁，平均年龄(55.63±8.76)岁；高血压Ⅰ级17例，Ⅱ级48例，Ⅲ级15例；合并冠心病25例，合并糖尿病16例。2组年龄、性别比、高血压分级、合并疾病等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。

表1 2组一般资料比较 n=80

1.2 治疗方法 2组治疗期间均予以限盐、控制饮食、戒烟酒、避免过劳，同时给予降压、调脂、扩血管等常规药物治疗。观察A组在常规治疗基础上给予40mg替米沙坦(上海勃林格殷格翰药业有限公司)，1次/d。观察B组在观察A组基础上加用400mg葛根素葡萄糖注射液(青岛金峰制药有限公司)，静脉滴注，1次/d，疗程1个月。

1.3 观察指标观察2组TLR2、TLR4、核因子-κB(NF-κB)、抑制蛋白IκBamRNA和蛋白表达及血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)水平变化。

1.4 检测方法

1.4.1Realtime-PCR:Trizol提取细胞总RNA，按照试剂盒说明书加样进行逆转录反应，ABI7300型荧光定量PCR仪扩增。由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。用仪器自带的分析软件得到各样本、各基因扩增的Ct值，以β-actin为内参照基因，目的基因表达相对值RQ=2ΔΔCt。见表2。

1.4.2Western-blot:提取细胞总蛋白，半干法电泳转移至PVDF膜，10%脱脂奶粉封闭2h。依次加入特异性一抗和辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG，化学发光法显色、定影。用UVP软件扫描测定蛋白条带IOD值，β-actin作为内参照，以目的蛋白与β-actin吸光度值的比值表示目的蛋白相对表达水平。

表2 Real time-PCR引物序列

1.4.3 酶联免疫吸附实验(ELISA):采用ELISA测定血清TNF-α、IL-6、hs-CRP水平。试剂盒均购自南京建成生物工程技术研究所，严格按照试剂盒说明书操作。

2 结果

2.1 健康人和肥胖性高血压患者血管内皮细胞TLR2、TLR4mRNA表达比较Realtime-PCR结果显示，对照组和肥胖性高血压患者组TLR2、TLR4mRNA表达水平分别为0.69±0.11和4.05±0.60、0.78±0.12和4.13±0.65，观察组TLR2、TLR4mRNA表达水平较对照组显著升高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 对照组和观察组血清血管内皮细胞TLR2、TLR4 mRNA表达比较

注：与对照组比较,*P<0.05

2.2 葛根素联合替米沙坦对肥胖性高血压患者血管内皮细胞TLR2、TLR4mRNA和蛋白表达的影响 2组治疗前TLR2、TLR4mRNA和蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。2组治疗后TLR2、TLR4mRNA和蛋白表达较治疗前有所下降，差异有统计学意义(P<0.05)，但观察B组下降程度优于观察A组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4、5。