高通量血液透析患者淋巴细胞计数及分型表达的分析

王松岩,李春光,马 爽,马寅芙,李 兵,王 磊,张世英*

(1.吉林省人民医院 肾内科，吉林 长春130021；2.长春市中医院)

*通讯作者

高通量血液透析患者淋巴细胞计数及分型表达的分析

王松岩1,李春光2,马 爽1,马寅芙1,李 兵1,王 磊1,张世英1*

(1.吉林省人民医院 肾内科，吉林 长春130021；2.长春市中医院)

维持性血液透析患者各种感染及肿瘤的发病率较普通人群均明显增高，感染和肿瘤的发生与机体的免疫功能低下有一定关系，而淋巴细胞与机体免疫功能相关。本研究旨在探讨高通量血液透析患者淋巴细胞计数及分型表达的变化，并进行分析，为临床上改善患者的免疫功能，减少透析患者感染及肿瘤的发生提供一定的理论依据。

1 资料和方法

1.1 一般资料

选取吉林省人民医院肾内科于2015年1月-2016年9月间住院且临床资料完整的患者共67例为研究对象。按肾功能指标将研究对象分为3组，高通量血液透析组(透析龄大于3个月)、肾功能异常未透析组以及肾功能正常组。回顾性分析三组患者淋巴细胞计数及分型表达的情况。其中高通量血液透析组患者共25例(男女比例8∶17)，年龄29-90岁(平均年龄69.680±14.820岁)。透析龄为4月-16年(平均透析龄为5.733±3.763年)。原发病为慢性肾小球肾炎者11例，糖尿病肾病者5例，高血压良性肾小动脉硬化者3例，慢性肾盂肾炎者1 例，药物性肾损害4例，痛风肾1例。肾衰竭未透析组患者共22例(男女比例9∶13)，年龄39-83岁(平均年龄67.182±12.861岁)。原发病为慢性肾小球肾炎者10例，糖尿病肾病者3例，高血压良性肾小动脉硬化者7例，慢性肾盂肾炎者1 例，药物性肾损害1例。肌酐范围210-1146 μmol/L，平均为487.068±254.036 μmol/L。肾功能正常组患者共20例(男女比例7:13)，年龄28-92岁(平均年龄59.9±15.573岁)。原发病为慢性肾小球肾炎者7例，糖尿病肾病者2例，高血压良性肾小动脉硬化者5例，肾病综合征4 例，动脉硬化2例。

高通量血液透析患者以动静脉内瘘或长期深静脉导管为血管通路。高通量血液透析器采用德国Fresenius公司生产的High-Flux FX-80透析器，膜表面积为1.8 m2。采用标准碳酸氢盐透析液，超纯净透析用水。Fresenius 4008 B透析机，透析液流量500 mL/min，血流量220-280 mL/min，透析温度36.0-37.0℃，透析时间4小时/次，3次/周，以干体重为目标设置超滤量。低分子肝素抗凝。规律血液透析基础上给予常规药物治疗。所有入组患者入组时无感染、肿瘤及应用免疫制剂。

1.2 实验材料

细胞表面标志单克隆抗体CD3/CD4/CD8三标(即CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PE-CY5)、CD3-FITC/CD19-PE、CD3-FITC/(CD16+56)-PE，溶血素Optilyse C等购于Beckman Coulter公司。

1.3 实验方法

所有患者于入院当日或次日空腹静脉采血检测血常规及淋巴细胞分型。其中血常规检查应用日本SYSMEX公司常规血细胞自动分类计数仪；淋巴细胞分型检测应用美国Beckman Coulter公司生产的EPICS XL型流式细胞仪。将100 μl EDTA抗凝全血加20 μl抗体，室温避光孵育15分钟；加入500 μl溶血素，混匀，室温避光孵育10分钟；加入PBS 2 ml，混匀，1 500转/分钟离心5分钟，弃上清液，加500 μl PBS上流式细胞仪检测。

1.4 统计学处理

白细胞计数及淋巴细胞分型属于计量资料，数据以均数±标准差表示，应用SPSS 17.0统计软件进行统计学分析，透析组、未透析组及肾功正常组三组之间比较采用单因素方差分析，检验水准取α=0.05，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组患者白细胞及淋巴细胞总数的变化(见表1) 三组患者白细胞总数均在正常范围，三组比较无明显差异。与肾功能正常组比较，未透析组下降，高通量血液透析组降至最低。高通量血液透析组患者淋巴细胞总数较肾功正常组明显降低，P=0.003，差异显著。高通量血液透析组患者淋巴细胞比率较肾功正常组明显降低，P=0.033，差异显著。

表1 三组患者白细胞及淋巴细胞计数情况

注： 与肾功正常组比较*P<0.01，#P<0.05。

2.2 三组患者淋巴细胞分型表达的变化(见表2) (1)与肾功正常组患者比较，CD3+淋巴细胞所占比率在肾衰未透析组水平升高，P<0.05，差异显著；高通量血液透析组较未透析组有所下降，但与肾功正常组患者比较差异不显著。(2)与肾功正常组患者比较，高通量血液透析组及未透析组患者CD3+CD8+淋巴细胞所占比率有所升高，但差异不显著。(3)高通量血液透析组及未透析组患者CD3+CD4+淋巴细胞所占比率与肾功正常组患者比较无明显差异。(4)随着肾功能进展，NK细胞所占比率呈降低趋势。与肾功能正常组患者比较，肾衰未透析组患者NK细胞所占比率明显降低，差异显著；高通量血液透析组患者NK细胞所占比率较肾衰未透析组水平明显升高，P=0.03，差异显著，基本达到肾功正常组水平。(5)随着肾功能进展，B淋巴细胞所占比率呈降低趋势，与肾功能正常组患者比较，未透析组患者B淋巴细胞所占比率明显降低，高通量血液透析组亦明显降低。三组之间两两比较P=0，差异显著。

表2 三组患者淋巴细胞分型表达情况

注：与肾功正常组比较,*P<0.01，#P<0.05。

3 讨论

研究表明尿毒症毒素及干预性治疗可使尿毒症及血液透析患者出现免疫功能异常[1,2]。本研究将高通量血液透析患者与肾功能正常患者及肾功能异常但未行透析的患者进行比较，来探讨高通量血液透析对患者淋巴细胞计数及分型表达的影响。

既往研究表明血液透析患者与健康对照组相比淋巴细胞减少[3,4]。我们的研究也得出了一致的结果：三组患者尽管白细胞总数均在正常范围，但是随着肾功能进展，淋巴细胞总数呈下降趋势，高通量血液透析患者淋巴细胞计数及比率均较肾功能正常组患者明显下降，差异显著。而关于CD3+、CD3+CD4+及CD3+CD8+所占比率在慢性肾脏病患者与健康对照组的比较，目前不同的研究结果结论尚不完全相同[3,5,6]。本研究结果表明随着肾功能进展，CD3+、CD3+CD4+及CD3+CD8+所占比率呈升高趋势，CD3+淋巴细胞所占比率在肾衰未透析组水平较肾功正常组明显升高，差异显著；高通量血液透析后，CD3+、CD3+CD4+及CD3+CD8+所占比率较未透析组有所下降，但仍高于肾功能正常组，差异不显著。CD4+/CD8+三组间差异不显著。

既往文献报道血液透析患者B淋巴细胞数低于正常对照组[7,8]。在本研究中，三组患者B淋巴细胞所占比率随着肾功能的进展呈降低趋势，与肾功能正常组患者比较，肾衰未透析组患者明显降低，高通量血液透析组患者降至最低，三组之间两两比较差异显著。项方方等曾研究B细胞数和有效肾小球滤过率(eGFR)的关系，并证实二者呈独立正相关[5]，本研究进一步证明了这种相关性。也有体外研究表明尿毒症(包括透析与未透析)患者B淋巴细胞减少可能部分归因于与Bcl-2基因表达下降相关的细胞凋亡[8]。

自然杀伤(NK)细胞为机体提供了针对感染和肿瘤的第一线免疫防御。NK细胞不仅具有杀伤功能，在某些病理条件下还可以分泌细胞因子参与机体的免疫调节。本研究NK细胞分析结果表明：与肾功正常组患者比较，肾衰未透析组患者NK细胞所占比率明显降低，差异显著；高通量血液透析组患者明显升高，基本达到肾功正常组水平。未透析组患者NK细胞计数降低可能与肾脏的清除能力降低相关[9]；而血液透析患者尽管NK细胞计数与肾功正常组比较没有差异，但血液透析患者的慢性炎症状态可使NK细胞zeta链下调，导致NK细胞活性降低[10],这或许是血液透析患者容易发生感染、肿瘤等的一个原因，而长期透析可以改善NK细胞的细胞毒活性[9]。

综上，本研究结果表明，高通量血液透析患者存在淋巴细胞总数及分型表达异常，包括淋巴细胞总数下降及B淋巴细胞所占比率下降等，而NK细胞所占比率尽管与肾功正常组无明显差异，但可能存在活性降低。这些因素可能是导致高通量血液透析患者免疫功能低下，易于发生感染、肿瘤等疾病的一个原因。因此，在临床上可以采取相应的干预措施来调节血液透析患者的淋巴细胞功能，增强免疫力，改善预后。

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1007-4287(2017)03-0519-03

2016-12-22)