CD117、CD13、CD33在鉴别诊断AML中的临床价值

王承芯，李 薇

(吉林大学第一医院 肿瘤中心，吉林 长春130021)

*通讯作者

CD117、CD13、CD33在鉴别诊断AML中的临床价值

王承芯，李 薇*

(吉林大学第一医院 肿瘤中心，吉林 长春130021)

急性白血病是起源于造血干细胞克隆性疾病，属于高度异质性恶性血液病，疾病正确分型对疾病诊断、化疗方案制定、预后评估均具有重要的临床价值[1]。上世纪七十年代，法、英、美协作组提出关于急性白血病的FAB分型，八十年代MIC分型标准出现，之后世界卫生组织(WTO)对白血病进行单独分类，急性白血病的诊断准确率不断上升[2,3]。本研究以151例急性白血病患者为例，通过流式细胞术进行白血病免疫分型检测，探讨CD117、CD13、CD33在鉴别诊断AML(急性髓细胞白血病) 中的临床价值，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

我院肿瘤中心2014年1月-2015年6月收治的151例急性白血病患者作为研究对象，所有患者均签署知情同意书，患者经检查均符合急性白血病的诊断标准，排除其它罹患器质性疾病(包括：急性白血病之外的其他恶性肿瘤、严重肝肾功能不全、严重心脑血管疾病)、自身免疫系统疾病等患者。其中男89例，女62例，年龄19-85岁，平均年龄(51.2±5.1)岁；其中AML105例，急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)36例，急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)10例。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 所有患者化疗前均采集骨髓或外周静脉血2-5 ml，经肝素钠抗凝处理。标本涂片后采用瑞特-姬姆萨氏染色法进行混合染色，显微镜下进行观察。

1.2.2 仪器与试剂 Cytomics FC 500流式细胞仪(BECKMAN COULTER公司生产)；藻红蛋白(PE)标记物：CD2、CD8、CD10、CD13、CD22、CD33、CD42、CD64、CD117、GIy-A、CD79a；单克隆抗体异硫氰酸荧光素标记：MPO、CD41、CD71、CD34、CD38、CD9、CD15、CD4、CD7、CD1a、CD3；藻红蛋白偶联物(PE-Gy5)标记：TDT、CD123、CD20、HLA-DR、cCD3、CD14、CE19、CA11b 、CD56；藻红蛋白偶联物(PE-Gy7)标记：CD45；破膜剂(BECKMAN COULTER公司生产)、溶血素(BECKMAN COULTER公司生产)、鞘液(BECKMAN COULTER公司生产)。

1.2.3 检测方法 在各种不同标记物试管中分别加入经肝素抗凝后骨髓或外周血标本50 μl，同时根据检测需求在各个试管中加入相应的抗体50 μl，将试管内液体充分摇匀置于正常室温中进行孵育15 min，注意避光。然后在试管中分别添加500 μl溶血素，摇匀后将其置于正常室温中10 min后添加磷酸盐缓冲液 500 μl进行洗涤。随后应用胞浆内抗原检测方法进行检测：在相应试管中加入破膜剂，然后加入相应抗体标记物，之后采用磷酸盐缓冲液进行洗涤。所有样本中最后均加入 500 μl磷酸盐缓冲液重悬上机检测，并于每个试剂中获取10 000个细胞采用CXP分析软件进行检测。

抗体组合包括：CD7/CD10/CD19、CD4/CD64/CD14、CD15/CD13/CD11b、CD3/CD33/CD56、CD38/CD22/CD20、CD9/CD2/CD123、cMPO/cCD79a/cTDT、CD34/CD117/HLA-DR。所有标本经上述试剂检测后，质疑为T-ALL标本需加做CD4/CD8/cCD3、CDla/CD2/CD5抗体检测；质疑为M6、M7标本需要加做CD71/Gly-A或者CD41/CD42。分析数据的过程中，要注意观察CD45/SSC双参数散点图，进行淋巴细胞、幼稚细胞、粒细胞、单核细胞等细胞各群比率计算，分析筛选出异常细胞群，在此基础上对幼稚细胞的免疫表型特点作进一步分析。

1.3 统计学方法

根据SSPS19.0统计学应用软件对收集到的研究资料分析处理，计数资料(%、n)采用χ2检验。P<0.05表明差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CD117、CD13、CD33在急性白血病中的表达水平

CD117、CD13、CD33在AML中的表达水平分别为91.4%、89.5%、95.2%，均明显高于B-ALL、T-ALL，结果具有显著性差异(CD117组间相比，χ2值分别为10.341、8.296；CD13组间相比，χ2值分别为9.136、8.071；CD33组间相比，χ2值分别为9.875、8.547；P<0.05)。 CD117、CD13、CD33在B-ALL、T-ALL中的表达水平差异不显著(χ2值分别为1.214、0.921、1.475；P>0.05)。见表1。

表1 CD117、CD13、CD33在急性白细胞中的表达水平(n,%)

2.2 CD117、CD13、CD33在不同急性髓细胞白血病亚型中的表达水平

CD117、CD13、CD33在急性髓细胞白血病中的共性表达率为47.6%(50/105),其中M0、M1、M2亚型中表达率较高，在M3、M4、M5、M6、M7亚型中表达率稍低。CD117、CD13、CD33在M0+M1+M2亚型中的表达率为66.7%(38/57),明显高于M3+M4+M5+M6+M7亚型中的表达率25.0%(12/48)，结果具有显著性差异(χ2值为7.653，P<0.05)。见表2。

表2 CD117、CD13、CD33在不同急性髓细胞白血病亚型中的表达水平(n,%)

3 讨论

近年多项研究数据表明，白血病细胞细胞膜及细胞质分子免疫标志具有特征性异常改变，可通过细胞免疫表型分类实现血液系统恶性肿瘤疾病精确诊断。应用流式细胞仪检测技术，通过对白血病细胞多种抗原组合免疫表型分析，有助于显著提高急性白血病诊断率[4]。本研究中以151例急性白血病患者为例，着重分析CD117、CD13、CD33在急性髓细胞白血病的表达情况，旨在为临床疾病诊断提供参考。

CD117系髓系细胞分化抗原，主要表达于人类造血祖细胞及不成熟粒细胞。其属于细胞膜跨膜受体，共由976个氨基酸分子组成，与配体干细胞因子(SCF)偶联调节机体造血干/祖细胞增殖、分化及凋亡[5,6]。生理情况下，CD117仅表达于正常干/祖细胞、髓系细胞及内皮细胞。发生急性髓系白血病时，骨髓中原始细胞也会表达较高水平的CD117[7]。本研究结果显示：105例AML患者中，检出CD117表达患者96例，表达率为91.4%，明显高于B-ALL、T-ALL组并具有显著性统计学差异(P<0.05)，可见CD117抗原在AML白血病细胞中高表达，可用于与ALL鉴别诊断。

CD13属于全粒细胞分子，可表达于不同发育阶段的所有粒系细胞，包括粒细胞及其前体细胞，单核细胞也可检测到该抗原，多数AML患者及15%的ALL患者均可见CD13表达，CD13表达敏感度较高[8]。本研究结果显示CD13在AML中的表达水平为89.5%，明显高于B-ALL、T-ALL且具有显著性统计学差异(P<0.05)，可见CD13在AML疾病诊断中具有较高临床价值，也可作为AML与ALL鉴别标准。但因其在ALL疾病中存在较高阳性交叉表达，故特异度较低。杨川艺等[9]人就CD13在AML疾病中表达的灵敏度及特异度进行比较，结果发现其灵敏度及特异度分别为98.0%，53.3% ，特异度明显低于灵敏度。

CD33在各种不同的AML亚型中均可表达，20%左右的ALL患者也伴有CD33表达。CD33由364个氨基酸残基构成，分子量为67KD的跨膜受体，属于免疫球蛋白超家族成员，可通过免疫酪氨酸抑制基序(ITIM)途径诱导白血病细胞发生凋亡[10]。本研究中，CD33在AML中的表达水平为95.2%，明显高于B-ALL、T-ALL组，统计学差异显著(P<0.05)，可见CD33也可用于为AML与ALL鉴别。从灵敏度与特异度方面来进行分析，CD33与CD13有一定的相似性，二者灵敏度均明显高于CD117，但CD117更具有髓系特异性。

本研究中CD117、CD13、CD33在AML中共性表达率为47.6%(50/105),其中CD117、CD13、CD33在M0+M1+M2亚型中的表达率为66.7%,明显高于M3+M4+M5+M6+M7亚型中的表达率25.0%，经分析推测主要与原始细胞数量相关，三者联合检测，能够提高检测的灵敏度，有助于AML分型判断。

综上所述，CD117、CD13、CD33在鉴别诊断AML中的临床价值较高，可作为AML患者诊断分型的重要髓系免疫表型指征，值得临床推广。

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