芦黄参花胶囊质量标准研究

姚东+包永睿+王帅

[摘要] 目的 建立芦黄参花胶囊的质量标准。 方法 采用薄层色谱法对大黄、黄芪和红花进行薄层鉴别；采用高效液相色谱法测定样品中丹酚酸B的含量。 结果 大黄、黄芪和红花薄层色谱斑点清晰、分离效果良好、阴性无干扰；含量测定中丹酚酸B在0.10～1.00 μg范围内与峰面积线性关系良好（r=0.9999），精密度、稳定性、重复性试验RSD均<3%，平均加样回收率为98.81%，RSD为0.52%（n=6），三批样品含量测定结果分别为0.2221、0.5284、1.7427 mg/g。 结论 所建立的定性、定量方法准确性和重复性良好，可作为芦黄参花胶囊的质量控制方法。

[关键词] 芦黄参花胶囊；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法；丹酚酸B

[中图分类号] R286.0 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）01（a）-0008-04

[Abstract] Objective To establish the quality satandard of Luhuang Shenhua Capsules. Methods The Rhei Radix Et Rhizoma， Astragali Radix and Carthami Flos were identified by TLC. HPLC was conducted for the content of detemination of salvianolic acid B. Results The spots in TLC were clear with good separation and specificity. The linear range of salvianolic acid B was 0.10-1.00 μg（r=0.9999）， RSDs of precision， stablity and reproducibility tests were all lower than 3%. The average recovery was 98.81% （RSD=0.52%， n=6）. The results of the three batches of samples were 0.2221， 0.5284， 1.7427 mg/g. Conclusion The method is simple， specific， accurate and reliable. It can be used in the quality control of Luhuang Shenhua Capsules.

[Key words] Luhuang Shenhua Capsules； Quality standard； TLC； HPLC； Salvianolic acid B

蘆黄参花胶囊是沈阳军区总医院生产的医院制剂，具有消除蛋白尿、血尿，改善水肿及保护肾功能作用。该制剂原有标准偏低，检查项目不足，检验方法落后。为加强该制剂质量控制，保障临床用药安全、有效，提高产品竞争力[1]，本研究采用薄层色谱法（TLC法）对制剂中大黄、黄芪和红花3味药材进行定性鉴别，采用高效液相色谱法测定制剂中丹酚酸B的含量。本研究所建立的质量控制方法快速、简便，可用于该制剂的质量控制。

1 仪器与试药

仪器：高效液相色谱仪（Agilent公司）。

试剂：甲醇（色谱纯，天津大茂公司）；乙腈（色谱纯，广东西陇化工有限公司）；甲酸（分析纯，天津科密欧公司）。

对照品：丹酚酸B对照品（中国食品药品检定研究院，批号：111562-201313）；大黄对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：0902-9806）；黄芪甲苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：0781-200210）；红花对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：907-9204）；芦黄参花胶囊（沈阳军区总医院，批号：130925、140913、140118）。

2 方法与结果

2.1 大黄的薄层鉴别

取本品内容物1 g，研细，加甲醇20 mL，超声提取15 min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 mL使溶解，加盐酸1 mL，超声处理20 min，立即冷却，用水饱和的正丁醇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加二氯甲烷1 mL使溶解，作为供试品溶液[2-3]。另取大黄对照药材0.1 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱试验[4]，吸取上述溶液各10 μL，分别点样同一硅胶G的薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸（30∶10∶0.5）为展开剂[5-6]，展开，取出，晾干，置于氨蒸气中熏至斑点显色清晰。供试品的色谱中，在与对照药材色谱的相应位置上，显相同颜色斑点，阴性对照不存在干扰。见图1。

2.2 黄芪的薄层鉴别

取本品内容物6 g，研细，加甲醇30 mL，超声提取3次，每次15 min，放冷，滤过，合并滤液，蒸干，残渣中加水20 mL使其溶解，用水饱和正丁醇提取4次，每次25 mL，合并正丁醇溶液，氨试液洗涤3次，每次20 mL，弃去氨试液，正丁醇溶液蒸干，残渣中加甲醇5 mL使其溶解，作为供试品的溶液[7-8]。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品的溶液。照薄层色谱试验[4]，吸取上述溶液各10 μL，分别点样同一硅胶G的薄层板上，二氯甲烷-水-甲醇（30∶1∶10）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至薄层斑点显色清晰[9-10]。供试品的色谱中，在与对照品的色谱相应的位置上，显相同颜色斑点，阴性对照不存在干扰。见图2。

2.3 红花薄层鉴别

取本品内容物1.5 g，加80%丙酮溶液5 mL，密塞，振摇15 min，静置，取上清液作为供试品的溶液。另取红花的对照药材0.5 g[11-12]，同法制成对照药材的溶液。照薄层色谱试验[4]，吸取上述溶液各5 μL，分别点样同一硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7∶2∶3∶0.4）为展开剂[13-14]，展开，取出，晾干。供试品的色谱中，与对照药材的色谱相应位置上，显相同颜色的主斑点，阴性对照无干扰。见图3。

2.4 含量测定

2.4.1 色谱条件 色谱柱：Agilent C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-乙腈-1%甲酸水（28∶8∶64）；流速：1 mL/min；检测波长286 nm；进样量10 μL[15-16]。上述色谱条件下，供试品色谱图中丹酚酸B同其他杂质峰分离度大于1.5，阴性对照无干扰。见图4。

2.4.2 对照品溶液制备 取丹酚酸B适量，精密称定，加入75%甲醇使溶解，制成每1 mL含丹酚酸B 50 μg的溶液，作为对照品溶液。

2.4.3 供试品溶液的制备 取本品内容物，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理30 min，放冷，再次称定，以75%甲醇补足失重，摇匀，滤过，取续滤液，即得[17-18]。

2.4.4 阴性样品溶液的制备 按处方取除丹参的各味药材制得阴性样品，按“2.4.3”项下供试品溶液制备方法，制得阴性样品溶液。

2.4.5 标准曲线的制备 精密吸取浓度丹酚酸B对照品溶液（50 μg/mL）2.0、6.0、10.0、14.0、16.0、20.0 μL注入液相色谱仪，以对照品含量为横坐标，峰面积值为纵坐标，求得回归方程：y=1106x-10.987，r=0.9999。结果表明丹酚酸B含量在0.10～1.00 μg范围内与峰面积具有良好的线性关系。

2.4.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液10 μL，连续进样6次，测得峰面积值的RSD为0.85%（n=6），符合要求，仪器精密度效果良好。

2.4.7 稳定性试验 取同一批样品胶囊内容物，研细，取约1 g，精密称定，制备供试品溶液。分别于0、2、4、6、8、10 h进行测定，测得峰面积值的RSD为1.27%（n=6），说明供试品的溶液在10 h内稳定。

2.4.8 重复性试验 取同一批样品胶囊内容物，研细，取约1 g（共6份），精密称定，制备供试品溶液，测定并计算样品中丹酚酸B的含量。结果样品中丹酚酸B平均含量为1.1194 mg/g，RSD为2.97%（n=6），符合要求。

2.4.9 加样回收率试验 取同一批样品取胶囊内容物，研细，取约0.5 g（共6份），精密称定，分别精密地加入丹酚酸B的对照品溶液（0.5 mg/mL）各1 mL，制成加样回收率用供试品溶液，测定并计算样品中丹酚酸B的回收率，结果表明，该样品中的丹酚酸B平均加样回收率为98.81%，RSD为0.52%（n=6），符合要求。

2.4.10 样品测定 取3个批号的样品，按照“2.4.3”项下供试品溶液制备操作，制得供试品溶液，按“2.4.1”色谱条件项下色谱条件分析，测定各样品中丹酚酸B的含量。见表1。

3 讨论

3.1 定性鉴别的优化

芦黄参花胶囊由六味中药组成，为切实保障制剂质量，本研究对该制剂中起主要作用的三味药材进行定性鉴别。由于复方制剂组成复杂，单味药的鉴别方法常存在阴性干扰，不能满足专属性要求。因此通过对供试品溶液的制备方法和薄层鉴别条件进行优化，所建立的薄层鉴别方法可满足专属性要求，且重复性良好。

3.2 含量测定供试品制备条件选择

本研究对丹酚酸B的提取方式、提取溶媒、溶媒用量和提取时间进行单因素考察，最终优化出含量测定供试品溶液的制备方法为25倍75%甲醇，超声提取30 min，该供试品溶液制备方法稳定易行。

3.3 含量测定色谱条件选择

本研究对丹酚酸B的色谱条件进行选择，由于分别考察了甲醇-水，乙腈-水，甲醇-乙腈-水系统[19-20]，确定甲醇-乙腈-水系统可对丹酚酸B进行良好分离，且专属性良好。由于丹酚酸B呈酸性，因此在流动相系统中加入1%甲酸，有效改善峰型。

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（收稿日期：2016-09-30 本文编辑：王红双）