粉防己甲素缓释微球的制备及其释放度研究

宋艳博 刘 轩 史一杰

辽宁省锦州医科大学药学院，辽宁 锦州 121000

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粉防己甲素缓释微球的制备及其释放度研究

宋艳博 刘 轩 史一杰*

辽宁省锦州医科大学药学院，辽宁 锦州 121000

目的：制备粉防己甲素缓释微球制剂并探讨其释放特性。方法：以乙基纤维素为载体，分别考察乳化剂浓度，致孔剂用量，药物-载体质量比以及油水体积比对微球质量的影响，设计开发粉防己甲素缓释微球。结果：当乳化剂用量为10%，致孔剂用量2%，药物-载体质量比1∶3，油水体积比为6∶1时，制得的缓释微球在不同溶出介质中6h内完全释放，且无明显突释效应，具有良好的缓释作用。结论：制备的粉防己甲素缓释微球释放行为良好，是1种具有工业前景的缓释制剂。

粉防己甲素；缓释微球；单因素考察；释放度

粉防己甲素(Tetrandrine, TET) 又名粉防己碱、汉防己甲素，提取自千金藤属防己科植物粉防己的干燥块根中，属双苄基异喹啉类生物碱，具有抗心肌、脑、肾缺血，抗心律失常、降低门静脉高压、抗缺氧性肺动脉高压、抗肿瘤、抗肝、肺纤维化、抗炎等多种药理作用。临床上主要用于肝硬化门脉高压、矽肺等的治疗[1～2]。研究表明[3]，粉防己甲素为低溶解度高跨膜率药物，其溶解速率影响药物的吸收速度，且过高浓度会引起多重不良反应。将其制备成缓、控释制剂后，药物能够在体液作用下稳定溶解并释放，使得胃肠道中药物浓度稳定且迅速吸收，既增加药物在体内的滞留时间和生物利用度，同时减少药物因吸收-消除不平衡引起的不良反应，有利于增加患者的依从性[4]。既具有广阔的市场经济前景，同时也具有可观的社会收益。本研究以乙基纤维素为载体材料，采用单因素考察法优化处方，制备出粉防己甲素6h缓释微球，为开发粉防己甲素新制剂提供新的思路。

1 仪器与材料

1.1 仪器 UV-2450紫外可见分光光度计(日本岛津公司)；RCZ-8型智能溶试验仪(上海黄海药检仪器有限公司)；透析袋(MV：1000-3000，美国spectrum公司)；FA1004N电子天平(上海精密科学仪器有限公司)；TGL-1613台式离心机(上海安亭科学仪器厂)；DF-101S恒温磁力搅拌器(巩义市予华仪器有限责任公司)；WH-2微型涡旋混合仪(上海沪西分析仪器厂)。

1.2 试药 粉防己甲素(大连富生天然药物开发有限公司,批号：20130709)；乙基纤维素(山东聊城阿华制药有限公司)；氯化钠(天津市博迪化工有限公司)；Span60(天津市科密欧化学试剂有限公司)；无水乙醇(分析纯，天津永晟精细化工有限公司)；戊二醛50%水溶液(分析纯，沈阳市华东试剂厂)；磷酸二氢钾(天津市博迪化工有限公司)；磷酸氢二钾(天津市博迪化工有限公司)；去离子水(自制)。

2 方法

2.1 粉防己甲素标准溶液的配制 精密称取干燥至恒重的粉防己甲素置于50 mL量瓶中，以0.l mol/L盐酸溶液溶解并稀释，配制成浓度为0.5 mg/mL的储备液，4 ℃保存备用。

2.2 粉防己甲素测定波长的确定 将“2.1”项下标准溶液稀释成浓度为20μg/mL的粉防己甲素水溶液，按紫外-可见分光光度法[5]于200～400nm波长范围内进行扫描，结果见图1。粉防己甲素具有较强的末端吸收，此外，在279nm处另有最大吸收峰。由于末端吸收处受介质或其他杂质的紫外吸收影响较大，测定存在干扰，因此将279nm作为粉防己甲素测定波长。

2.3 粉防己甲素标准曲线的建立 精密量取0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、5.0mL粉防己甲素标准溶液置于50mL量瓶中，用0.lmol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，制得梯度浓度为5、10、15、20、30、40、50μg/mL的系列标准溶液，以pH6.8磷酸盐缓冲液替换盐酸稀释液，按上述浓度配制梯度浓度溶液，分别于279nm波长处测定吸光度，以吸光度(A)为纵坐标，浓度(C)为横坐标分别绘制标准曲线，得回归方程为(1)0.1mol/L盐酸溶液：A=0.0123C+0.0159，r=0.9991。(2)pH6.8磷酸缓冲溶液：A=0.0125C-0.0289，r=0.9993。由此可见，在5.0～50.0 μg/mL范围内，粉防己甲素溶液紫外吸光度(A)与浓度(C)呈良好的线性关系。

2.4 粉防己甲素缓释微球的制备 将处方量乙基纤维素、粉防己甲素和氯化钠分散溶解于乙醇中作为水相，将适量乳化剂Span60加入至液体石蜡中，作为油相，将水相注入至油相中，快速搅拌3min形成较为稳定的W/O型乳剂，缓慢滴加20%的戊二醛溶液适量，于温和搅拌下交联固化4h，减压抽滤收集微球初产品，所得微球用无水乙醚洗涤，丙酮脱水挥干，即得粉防己甲素-乙基纤维素微球。

2.5 单因素考察法 优化粉防己甲素缓释微球处方以“2.4”项下制备方法为基础，确定其他试验条件不变，分别考察不同乳化剂浓度，致孔剂用量，药物-载体质量比以及油水体积比对微球外观，分散性及包封率的影响。

2.6 粉防己甲素缓释微球释放度测定 取自制缓释微球适量(相当于主药含量20mg)，采用250mL溶出介质(0.1 mol/L HCl，pH6.8磷酸盐缓冲溶液)；温度(37±0.5)℃；转速50r/min。依法操作，在设定时间点分别取样2.5mL，同时补加同体积溶出介质，0.8μm微孔滤膜过滤，取续滤液1.5mL置于5mL容量瓶中，用释放介质定容至刻度，按紫外分光光度法在279nm处测定吸光度，以外标法计算不同时间样品浓度，求算药物的累积释放百分率。

3 结果

3.1 单因素考察法优化粉防己甲素缓释微球处方

3.1.1 乳化剂浓度对微球质量的影响改变 Span60浓度为5%，10%，15%，固定其他工艺参数和处方用量不变，分别制备粉防己甲素缓释微球，观察微球的外观，分散性，测定其包封率，结果见表1。

由表1可知，乳化剂浓度为10%和15%时制得的微球外观基本呈规则球形，圆整度较好，但用量较少时，因成乳性较差，外观稍显不规则，包封率随乳化剂用量的增多，先增加后减少。说明乳化剂用量过大形成的乳滴不利于对药物的包裹，故选择乳化剂用量为10%。

表1 乳化剂浓度对微球质量的影响

3.1.2 致孔剂用量对微球质量的影响改变 氯化钠用量分别为2.0%、2.5%、3.0%，固定其他工艺参数和处方用量不变，分别制备粉防己甲素缓释微球，观察微球的外观，分散性，测定其包封率，结果见表2。

由表2可知，微球的包封率随致孔剂用量的增加而减少，微球的圆整度随致孔剂用量的增大而不规则，最终选择致孔剂用量为2.0%。

表2 致孔剂用量对微球质量的影响

3.1.3 药物-载体质量比对微球质量的影响 以投药量20 mg/50 mL乳浊液为基准，改变乙基纤维素的用量，使药物-载体质量比为1∶1，1∶3，1∶5，固定其他工艺参数和处方用量不变，分别制备粉防己甲素缓释微球，观察微球的外观，分散性，测定其包封率，结果见表3。

表3 药物-载体质量比对微球质量的影响

由表3可知，随着载体质量的增加，微球的包封率不断增大，药物利用率提高，但当载体用量继续增大时，对药物包封率的影响减弱，因此选择药物-载体比为1∶3。

3.1.4 油水体积比对微球质量的影响改变 油水体积比为1∶1，3∶1，6∶1，固定其他工艺参数和处方用量不变，分别制备粉防己甲素缓释微球，观察微球的外观，分散性，测定其包封率，结果见表4。

由表4可知，随着油水体积比的增加，微球的包封率不断增大，外观形态更为规则圆整，因此选择油水体积比为6∶1。

表4 油水体积比对微球质量的影响

3.2 处方优化确证 由单因素考察结果优化制得三批微球，并对其进行外观、分散性，包封率及粒径的测定，结果显示三批微球外观及分散性良好，三批微球的平均包封率为63.12%，粒径为213μm，含量为17.41 mg/100 mg微球，处方优化良好。

3.3 粉防己甲素缓释微球释放度测定体外释放度 结果显示，分别以0.1 moL/L HCl，pH6.8磷酸盐缓冲溶液为释放介质时，药物粉末释放速度均快于缓释微球，受介质pH影响，0.1 moL/L HCl中药物释放极快，而粉防己甲素-乙基纤维素微球于6h内可缓慢释放完全，与原料药相比基本无突释效应。

4 讨论

通过单因素考察试验筛选优化了粉防己甲素缓释微球的处方，其粒径大小主要受形成乳滴的粒径的影响，根据优选获得最佳制备条件，制备所得3个批次微球外观及分散性良好，平均粒径为213μm，随后对粉防己甲素缓释微球在不同介质中的体外释放度进行了考察，释放行为良好，无明显突释效应，整个释放过程中缓释微球在不同介质中均可以缓慢释放，提示在体内条件下可以使药物在缓释时间内维持稳定血药浓度，起到控制药物缓慢释放作用。

由释放度结果可知，粉防己甲素在胃部溶解迅速，但多以离子形式存在，因此不利于药物的吸收，制成缓释微球后，药物的释放速率明显降低，可以保证大量药物以原型进入小肠部位释放并吸收。受小肠部位pH值影响，传统的治疗剂量下，药物会以固体形式或离子型药物再结晶的方式通过小肠段，导致药物浓度过低不易发挥治疗作用，制成缓释微球后，药物可以在整个小肠段缓慢释放药物，维持肠道内分子型药物浓度的稳定，有利于增加分子型药物在体内的吸收和滞留，从而提高药物疗效，如可以进一步开发，将成为既具有广阔的市场经济前景，也具有可观的社会收益的新一代粉防己甲素制剂。

参考文献

[1]邢志博,王凤梅,王翠平，等.粉防己有效成分的药理活性研究进展[J].中国实验方剂学杂志，2014, 20(9):241-246.

[2]曹金,杨兆文,李凤，等.汉防己甲素的临床应用进展[J].世界临床药物，2013,34(2):75-79.

[3]张颖,姜倩,张焓，等.汉防己甲素的表观溶解度、油水分配系数和解离常数的测定[J].华西药学杂志，2013,28(5):501-503.

[4]田振,张晶,周欣，等.口服中药多组分同步缓释制剂的研究进展[J].中草药，2011, 42(10):2130-2134.

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典(四部)[S].北京:中国医药科技出版社，2015.

辽宁省大学生创新训练项目(NO：201410160005)

宋艳博(1992-)，男，汉族， 本科在读。

史一杰(1985-)，女，汉族，研士，副教授，研究方向为中药新制剂研究。E-mail:shiyijie119@163.com

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1007-8517(2017)04-0017-03

2016-12-06 编辑：梁志庆)