HPLC法测定七味清肠胶囊中大黄素和大黄酚的含量

李 姗 张 华 文芳杰 游绍雪 王先坤

1．黔南州中医医院，贵州 都匀 558000；2.黔南州食品药品检验所，贵州 都匀 558000

HPLC法测定七味清肠胶囊中大黄素和大黄酚的含量

李 姗1张 华2*文芳杰1游绍雪1王先坤1

1．黔南州中医医院，贵州 都匀 558000；2.黔南州食品药品检验所，贵州 都匀 558000

目的：建立七味清肠胶囊中大黄素和大黄酚的含量测定方法，以控制该产品的质量。方法：采用Wondasil C18柱(4.6mm×150mm，5μm)；以甲醇-0.1%磷酸(85∶15)为流动相；检测波长为254nm；柱温为30℃；流速为1.0mL/min。结果：大黄素和大黄酚分别在0.013248～0.079488μg和0.021366～0.128016μg范围内，线性关系良好；平均回收率分别为97.25% (RSD=1.73%)和99.15%(RSD=1.55%)。结论：该方法简便、可靠、准确、重复性好，可作为七味清肠胶囊的质量控制方法。

高效液相色谱法(HPLC)；七味清肠胶囊；大黄素；大黄酚

七味清肠胶囊为我院的院内制剂，由无花果、大黄等7味中药组成，具有滋阴增液，清热除燥，润肠通便的功效；主要用于肠燥津亏所致的大便秘结，状如羊屎，口干少津，腹胀不舒，食少无味，舌红苔少，脉细稍数等。方中大黄为主要药味，具有明显泻下作用。研究发现，以大黄素、大黄酚为代表的蒽醌类是大黄的主要有效成分[1]。为控制本品的质量，本研究采用高效液相色谱法测定了大黄素和大黄酚的含量，作为内在质量控制指标之一。

1 仪器与材料

1.1 仪器 日本岛津LC-15C高效液相色谱仪(SPD-15C型紫外可见检测器，LCsolution Lite工作站)；AUW120D型电子天平(日本岛津)；FA-1004型电子天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)；电热恒温水浴锅(上海医疗器械五厂)。

1.2 材料 七味清肠胶囊(0.45g/粒，批号：20141110、20141118、20141126黔南州中医医院制剂室)；大黄素(批号：110756-200110，中国药品生物制品检定所)；大黄酚(批号：20130111，天津士兰科技有限公司)。水为娃哈哈纯净水；甲醇为色谱纯；其余试剂均为分析纯。

2 方法

2.1 色谱条件[2]Wondasil C18柱(4.6mm×150mm，5μm)；流动相：甲醇-0.1%磷酸(85:15)；检测波长：254nm；柱温：30℃；流速：1.0mL/min；理论板数按大黄素峰计算应不低于3000。

2.2 溶液的配制

2.2.1 对照品溶液的配制 分别精密称取大黄素、大黄酚对照品适量，加入无水乙醇-乙酸乙酯(2∶1)溶液制得每1mL含大黄素0.3312mg、含大黄酚0.1778mg的对照品溶液。分别精密量取上述对照品溶液1mL、3mL置50mL量瓶中，加无水乙醇-乙酸乙酯(2∶1)混合溶液稀释至刻度，摇匀，即得(每1mL含大黄素6.624μg、大黄酚10.668μg)。

2.2.2 样品溶液的制备[3-4]取本品10粒，倾出内容物，混匀，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50mL甲醇，密塞，称重，回流提取1h，放冷，再称定重量，用甲醇补重后，摇匀，滤过。精密量取续滤液5mL，蒸干，残渣先后加入10mL盐酸(1→10)，与10mL三氯甲烷，水浴水解1h后，取出，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷萃取3次，每次15mL，合并萃取液，蒸干，残渣用无水乙醇-乙酸乙酯(2∶1)溶解后转移至10mL量瓶中，定容至刻度。摇匀，静置，上清液过0.22μm微孔滤膜，作为样品溶液。

2.2.3 阴性样品溶液的制备 按处方比例称取除大黄外的其余各药材，按制剂制备工艺制成阴性制剂，再按“2.2.2”方法制备成缺大黄的阴性对照溶液。

2.3 标准曲线的绘制 精密量取混合对照品溶液(大黄素6.624μg/mL、大黄酚10.668μg/mL) 2、4、6、8、10、12μL，按2.1色谱条件测定峰面积，分别重复进样3次，以峰面积值(Y)对进样量(X)进行线性回归。

2.4 精密度考察 精密量取同一浓度的混合对照品溶液(大黄素6.624μg/mL、大黄酚10.668μg/mL)10μL，测定各成分峰面积值，重复进样6次。

2.5 稳定性考察 取同一样品(批号：20130114)溶液，于0、1、2、4、6、8h进样分析，测定峰面积值。

2.6 重复性试验 取七味清肠胶囊(批号：20130114)6份，按“2.2.2”方法制备成样品溶液，分别进样测定。

2.7 加样回收试验 精密称取已知含量的样品(批号：20130114)6份，每份约0.25g，精密加入一定量的大黄素对照品溶液(0.3312mg/mL)和大黄酚对照品溶液(0.1778mg/mL)，按“2.2.2”方法制备成样品溶液，分别测定各成分的含量并计算加样回收率。

2.8 样品含量测定 取不同批次七味清肠胶囊，按“2.2.2”方法制备成样品溶液，照2.1色谱条件测定含量。

3 结果与分析

3.1 专属性试验 由图1可知，色谱图基线平稳，混合对照品及样品中大黄素和大黄酚与相邻成分分离完全，分离度均大于1.5；拖尾因子均小于1.05；阴性样品在同一保留时间处无相应色谱峰出现。

3.2 标准曲线的绘制 大黄素和大黄酚分别在0.013248～0.079488μg和0.021366～0.128016μg范围内，峰面积值与进样量有良好的线性关系。其回归方程与标准曲线见图2。

3.3 精密度考察 由表1可知，大黄素和大黄酚的RSD值分别为0.76%、0.92%。表明仪器精密度好。

表1 精密度试验结果 (n=6)

3.4 稳定性考察 由表2可知，大黄素和大黄酚的RSD值分别为1.76%和2.00%。表明样品溶液在8h之内基本稳定。

表2 稳定性试验结果 (n=3)

3.5 重复性试验 由表3可知，大黄素和大黄酚的平均含量分别为0.7052mg/g(RSD=1.39%)和1.3967mg/g(RSD=1.74%)。说明，本方法测定大黄素和大黄酚的重复性好。

表3 重复性试验结果 (n=2)

3.6 加样回收试验 由表4可知，大黄素和大黄酚的加样回收率分别为97.25%和99.15%，RSD分别为1.73%和1.55%。

表4 回收率试验结果 (n=6)

3.7 样品含量 通过测定，不同批次七味清肠胶囊中大黄素和大黄酚的含量和为0.9372～0.9785mg/粒。

表5 七味清肠胶囊中大黄素和大黄酚含量测定结果 (n=2)

4 讨论

大黄素和大黄酚的含量测定方法文献报道极多，本文参照大黄药材含量测定方法，采用测定波长为254nm。

在提取溶剂的选择上，应尽可能提取本品中全部大黄素及大黄酚，除去其它杂质。因此，试验前期进行了酸不同水解时间的比较，以大黄素和大黄酚的提取量为指标，结果，酸水解处理1h后，样品中大黄素和大黄酚提取量变化不明显，因此，采用酸水解1h。

通过测定三批中试样品，可知大黄素和大黄酚的含量和为0.9372～0.9785mg/粒。但是，考虑到药材产地、制剂生产以及贮藏等因素，因此，质量标准中暂定本品每粒含大黄以大黄素(C15H10O5)和大黄酚(C15H10O4)的总量计，不得少于0.75mg(80%)。

[1]唐大轩,谭正怀,梁媛媛,等.大黄蒽醌致泻作用及其机理的初步研究[J].时珍国医国药,2007,18(6) :1312-1314.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：中国医药科技出版社,2015:23.

[3]宁颖,潘琼,桂洪芹,等.高效液相色谱法测定妇炎消片中大黄酚和大黄素含量[J].中国药业,2012,21(9):21-22.

[4]刘丽娟,郭玉晶.高效液相色谱法测定乙肝解毒胶囊中大黄素和大黄酚含量[J].中国药业,2008,17(10):33.

Determination of emodin and chrysophanol in Qiwei Qingchang capsules by HPLC

LI Shan1ZHANG Hua2*WEN Fangjie1YOU Shaoxue1WANG Xiankun1

1.Qiannnan Hospital of Traditional Chinese Medicine，Duyun 558000，China； 2. Qiannnan institute for Food and Drug Control，Duyun 558000，China

Objective To establish a method for determination of emodin and chrysophanol in Qiwei Qingchang capsules.Methods The HPLC separation was performed on Wondasil-C18(4.6mm×150mm,5μm) column with a mixture methanol-0.1% phosphoric acid(85∶15) as the mobile phase, at a flow rate of 1.0 mL/min. Detection wavelength was 254nm and column temperature was 30℃.Results The linear range of emodin and chrysophanol were 0.013248～0.079488μg(r=0.9999) and 0.021366～0.128016μg(r=0.9999).The average recoveries were 97.25% (RSD=1.73%) and 99.15%(RSD=1.55%).Conclusion It is a simple,reliable,accurate and reproducible method in determination of emodin and chrysophanol in Qiwei Qingchang capsules.

HPLC; Qiwei Qingchang Capsules; Emodin; Chrysophanol

李姗(1987-)，女，汉族，硕士，主营中药师，研究方向为中药新剂及新剂型。E-mail:303630441@qq.com

张华(1987-)，男，汉族，硕士，主管中药师，研究方向为中药质量评价。E-mail:495539629@qq.com

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1007-8517(2017)04-0013-04

2016-12-01 编辑：梁志庆)