宫颈癌中自噬标记蛋白Beclin1、p62的表达及其临床意义

陈 飞 余婷婷 李 俊

宫颈癌中自噬标记蛋白Beclin1、p62的表达及其临床意义

陈 飞 余婷婷 李 俊

目的 研究宫颈癌中自噬标记蛋白Beclin1、p62表达的水平及其对临床诊断及治疗的意义。方法 选择子宫颈鳞状细胞癌组织标本140例，对纳入的组织标本使用Beclin1和p62蛋白标记。阳性结果采用半定量评分方法进行判定。Beclin1、p62的表达与患者临床特征相关性分析采用χ2检验。结果 Beclin1主要表达于细胞膜及细胞质，与正常子宫颈上皮相比，Beclin1在宫颈癌组织中的表达明显降低(P<0.05)。但宫颈癌中Beclin1表达量与患者临床病理特征无相关性(P>0.05)。p62在子宫颈鳞状细胞癌组织细胞质中的表达明显升高，且与淋巴结的转移密切相关(P<0.05)。Beclin1和p62的阳性表达率之间未见明显的相关性(P>0.05)。结论 Beclin1、 p62的表达量与子宫颈癌的发生发展相关，且p62的核浆转移与子宫颈癌有相关性。临床上，可根据Beclin1和p62的表达对疾病进展进行评估。

Beclin1；p62；宫颈癌；临床意义

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:218～220)

子宫颈癌是常见女性恶性肿瘤之一，目前逐渐向年轻化发展[1]。子宫颈癌以鳞状细胞癌最为常见，约为85%[2]。肿瘤的发生发展过程相对复杂，不仅仅是单个基因突变，而是多个不同复杂步骤以及环境共同作用的结果[3]。突变的基因不同、强度不同得到的结果也有差异。本次研究纳入孝感市中心医院收治的140例子宫颈鳞状细胞癌组织标本进行Beclin1和p62蛋白标记，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 临床资料

选取2013年8月至2015年8月间医院收治的140例子宫颈鳞状细胞癌患者，年龄27～67岁，平均为(43.2±2.3)岁；其中82例年龄≤45岁，58例年龄>45岁；组织学分型：高分化24例，中分化78例，低分化38例；临床分期：Ⅰ期76例，Ⅲa期64例；58例有淋巴结转移；肿瘤直径：66例≤4 cm，74例>4 cm。选择同一时期40例子宫颈组织标本正常的人群作为正常对照组。

1.2 入选标准[4]

①患者术前进行病理分型为子宫颈鳞状细胞癌，同时临床分期处于Ⅰ～Ⅱa期；②无其他恶性肿瘤。③无糖尿病、高血压病史。④无免疫系统疾病。⑤患者术前未实施过放化疗以及免疫治疗。

1.3 实验室检查

1.3.1 试剂 Beclin1检测应用Anti-Beclin1兔抗人单克隆抗体(abcam公司生产，型号为ab51031)，p62检测应用Anti-p62鼠抗人单克隆抗体(abcam公司生产，型号为ab56416)，试剂盒为SP免疫组化试剂盒(北京中杉金桥生物技术公司生产)，显色剂为DAB(北京中杉金桥生物技术公司)。

1.3.2 方法 首先，石蜡包埋切片处理，之后进行HE染色和DBA显色处理。然后，复染脱水处理。最后，显微镜下观察。通过实验室检查可以得出，Beclin1蛋白在细胞膜及细胞质中表现为棕黄色颗粒物，p62阳性表达为棕黄色颗粒。运用双盲法在光学显微镜下观察切片(高倍×400)。每个高倍视野下计数100个细胞[5]，根据阳性细胞所占比值分为：无阳性细胞0分；阳性细胞所占比例<30.0%1分；阳性细胞所占比例≥30.0%2分。根据阳性细胞表达强弱分为：未出现着色0分，浅黄色或者黄色1分；棕黄色2分；棕褐色3分。将两项的评分进行相乘，阴性为0～1分；阳性为2～6分。

1.4 统计学方法

统计学分析采用SPSS 15.0系统软件，阳性结果采用半定量法判定。用卡方检验对Beclin1、p62的表达与子宫颈鳞状细胞癌患者临床特征之间的关系进行统计分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Beclin1与p62表达水平

宫颈癌组织中Beclin1与p62阳性表达率无相关性(P>0.05)。见表1。宫颈癌组织中Beclin1(膜)阳性率为22.1%、Beclin1(质)阳性率为13.6%；P62(核)阳性率为92.9%、P62(质)阳性率为62.9%。正常对照组Beclin1(膜)阳性率、Beclin1(质)阳性率为30.0%、15.0%；P62(核)阳性率和P62(质)阳性率为25.0%、12.5%。

表1 Beclin1与p62表达水平相关性

2.2 Beclin1、p62与临床指标相关性

Beclin1 (核、质)、p62(核)表达与子宫颈鳞状细胞癌临床特征无显著相关性(P>0.05)。p62(质)表达与淋巴结转移相关(P<0.05)，而与其他指标无关，见表3。

表2 Beclin1与p62表达与临床指标相关/例

3 讨论

子宫颈癌是女性常见的一种恶性肿瘤，在女性生殖系统中发病率最高。地域性对宫颈癌的发病具有很大影响[6]。我国女性患有宫颈癌呈现各省市县连接现象。大体趋势为农村比城市高，山区比平原高。宫颈癌患者平均发病年龄与地区存在一定的差异，我国主要见于40～50岁之间的女性，在60～70岁之间再次出现高峰，而20岁之前相对较少[7]。具体发病机制尚未阐明，子宫颈癌与早育、早婚、性生活紊乱、多产、社会经济地位低下以及HPV病毒感染等因素相关。

自噬是正常存在于真核细胞中的基础代谢过程之一，具有高度保守性，在不同物种间均以双层膜包裹细胞中废弃细胞器或其他物质呈递至溶酶体降解为主要过程，维持细胞内稳定及物质、能量再利用[8]。自噬可在应激或营养缺乏条件下被激活，而许多研究均发现部分肿瘤组织中也存在自噬现象。大量研究指出，自噬在抑制肿瘤中具有不可忽视的作用[9]。Beclin是一种自噬相关蛋白，研究发现Beclin基因敲除的小鼠比野生型小鼠更容易患有恶性肿瘤。然而将两个Beclin小鼠的等位基因去除时，小鼠会出现宫内死亡现象。研究得出，Beclin基因缺失时，细胞多出现异常细胞器及特定蛋白质的积累[10]。自噬标记蛋白p62失去活性会导致自噬功能出现障碍，损伤DNA，将细胞的氧化还原反应破坏，增加退行性疾病出现，缺陷线粒体累及以及炎症性疾病出现，进而导致肿瘤出现。大多数研究指出，在健康的细胞中，自噬的发生发展可对肿瘤生长产生一定影响，起到抑制肿瘤的效果[11]。但与此同时，自噬也可以通过对能量、细胞器等结构的循环为肿瘤生长提供前提条件。

在子宫颈鳞状细胞癌组织，p62主要在细胞质中大量表达，且明显高于周围正常子宫颈上皮的表达，这一结论与其他研究基本相符，这可能与淋巴结转移相关[12]。由此猜想，p62转移至细胞质很可能与子宫颈麟状细胞癌的发生发展存在一定关联。而p62转移过程不能直接通过细胞核的核膜进行转移，可能是经由核孔进出，这主要是由核膜的特性所决定的。

本研究发现，Beclin1和p62不同，不仅在子宫颈鳞状细胞癌细胞质中表达，在细胞膜上也有表达，但其在肿瘤组织中的表达明显低于周围正常宫颈上皮(P<0.05)。但对病理特征分析并未见Beclin1在宫颈癌组织中有表达的特异性。Beclin1和p62的阳性表达率之间未见明显的相关性。研究指出，Beclin1和p62蛋白、对自噬活性进行判断，能够对子宫颈癌的转移以及预后产生预测作用，临床意义显著[13]。

综上所述，Beclin1、 p62的表达量与子宫颈癌的发生发展相关，且p62的核浆转移与子宫颈癌有相关性。临床上，可根据Beclin1和p62的表达对疾病进展进行评估。

[1] 张志平,刘家云,刁艳君,等.链霉亲和素-自噬相关基因融合蛋白的原核表达及纯化〔J〕.标记免疫分析与临床,2014，24(2)：145-146.

[2] 文普帅,高 静.ARRB1融合蛋白表达载体ARRB1-EGFP的构建及其在神经胶质瘤细胞中的表达〔J〕.解放军医学院学报，2014,23(10)：694-695.

[3] 许晓玲,柳 英,陈青阁,等.SA/hI-TAC双功能融合蛋白的制备及其生物学功能鉴定〔J〕.南方医科大学学报，2015,30(12)：123-124.

[4] 张海亮,唐圣松.细胞自噬与肿瘤耐药〔J〕.中国生物化学与分子生物学报,2014,18(3)：160-161.

[5] 李晓妍,周 颖,赵卫东.p62的功能及与肿瘤相关性的研究〔J〕.中国妇幼保健,2014,22(8)：182-183.

[6] 汪生宝,唐淑兰,贺振华,等.细胞自噬在肿瘤中的作用〔J〕.中国肿瘤外科杂志,2013,18(5)：610-612.

[7] 韩正祥,张梦瑾,徐 杰,等.GST-NRP-1融合蛋白的原核表达及纯化〔J〕.中国免疫学杂志,2015,23(10)：345-346.

[8] 陈 静,朱 华,耿建祥,等.宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌组织中HPV感染基因型的对比研究〔J〕.中国妇幼保健,2015,34(36)：748-749.

[9] 孟 斐.组织因子途径抑制物-2在宫颈癌中表达情况的研究分析〔J〕.中国实用医药,2013,20(5)：691-693.

[10] 刘 威,高文霞.宫颈癌患者组织及血清血管内皮生长因子的变化研究〔J〕.中国药物经济学,2013,40(4)：258-259.

[11] 毕建军,杨慧兰.单纯疱疹病毒2型与宫颈癌相关性的研究进展〔J〕.实用医学杂志,2011,6(3)：157-158.

[12] Chen Y,Zhou Y,Qiu S,et al.Autoantibodies to tumor-associated antigens combined with abnormal alpha-fetoprotein enhance immunodiagnosis of hepatocellular carcinoma〔J〕.Cancer Lett,2010,289(1):32-39.

[13] Rodriguez A,Durán A,Selloum M，et al.Diez-Guerra,Juana María Flores,Manuel Serrano,Johan Auwerx,María T.Diaz-Meco,Jorge Moscat.Mature-onset obesity and insulin resistance in mice deficient in the signaling adapter p62〔J〕.Cell Metab,2006,3(3):211-222.

(编辑：甘 艳)

Expression of Cervical Autophagy Marker Protein Beclin1,p62 and Clinical Significance

CHENFei，YUTingting,LIJun.

XiaoganHospitalAffiliatedtoWuhanUniversityofScienceandTechnology,Xiaogan,432000

Objective To study the expression of autophagy marker protein Beclin1,p62 and their significance for clinical diagnosis and treatment.Methods 140 cases of cervical squamous cell carcinoma specimens were selected,tissue samples using the included Beclin1 and p62 protein labeling.Positive results using semi-quantitative scoring method determination.Beclin1,p62 expression and clinical characteristics correlation analysis using χ2test.Results Beclin1 mainly expressed in the cytoplasm and cell membrane,as compared with normal cervical epithelium,Beclin1 expression in cervical cancer was significantly lower(P<0.05).But Beclin1 expression and clinicopathological had no correlation(P>0.05).Expression of p62 in cervical squamous cell carcinoma was significantly higher in the cytoplasm,and was closely related with lymph node metastasis(P<0.05).Beclin1 and positive expression of p62 had no significant correlation(P>0.05).Conclusion The expression of Beclin1,p62 are related with development of cervical cancer,and p62 nuclear transfer plasma is correlated with cervical cancer.Clinically,the disease progression can be assessed based on the expression of p62 and Beclin1.

Beclin1;p62;Cervical cancer;Clinical significance

432000 武汉科技大学附属孝感医院(孝感市中心医院)

李 俊

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.02.013

R737.33

A

1001-5930(2017)02-0218-03

2016-04-08

2016-09-26)