血小板—中性粒细胞聚集体在急性ST段抬高型心肌梗死患者中表达的研究

董海秋，董梅，任法新

冠心病研究

血小板—中性粒细胞聚集体在急性ST段抬高型心肌梗死患者中表达的研究

董海秋，董梅，任法新

目的：本文探讨血小板—中性粒细胞聚集体（PNA） 在急性ST段抬高型心肌梗死（STEMI）患者中的表达。

心肌梗死；血小板聚集；血小板—中性粒细胞聚集体

(Chinese Circulation Journal, 2017, 32:145.)

急性心肌梗死的主要发病机制是由冠状动脉粥样硬化斑块破裂继发血栓形成，突然阻塞冠状动脉管腔，导致心肌缺血坏死引起。在这个过程中，活化的血小板和白细胞发挥了重要作用。大量白细胞和血小板在急性缺血心肌组织中活化[1]，活化后的血小板ɑ颗粒表达释放大量的P-选择素，一方面促进炎症性血小板介质在内皮细胞表面沉积，增强对单核细胞的趋化作用[2]；另一方面与白细胞P-选择素糖蛋白配基-1（PSGL-1）结合形成血小板—白细胞聚集体（PLA）。PLA形成后，通过血小板的桥接作用，促进白细胞在局部损伤内皮细胞的黏附、滚动和渗出，进入内皮细胞下，促进附壁血栓的形成[3]。因此，PLA是反映体内血栓负荷及炎症反应的敏感指标[4]。新近有研究发现，高水平PLA与急性冠状动脉综合征发生风险呈正相关，是预测急性冠状动脉综合征的重要指标之一[5]。也有研究表明，高水平的PLA是急性非ST段抬高型心肌梗死预后不良的标志物[6]。本研究主要探讨血小板—中性粒细胞聚集体（PNA）在STEMI患者中的表达。

1 资料与方法

研究对象：选择2015-10至2016-04在我院心内科住院的急性ST段抬高型心肌枉死（STEMI）患者40例为STEMI组，平均年龄（70.0±5.4）岁。纳入标准：持续性胸痛（>30 min），且对硝酸甘油反应差；12导联标准心电图示两个或两个以上相邻导联ST段抬高≥0.2 mV；肌酸激酶、肌酸激酶同工酶或相对指数≥正常值上限2倍；发病12 h以内。另选择同期体检中心健康查体者30例作为对照组，均不伴冠心病，平均年龄（68.4±1.6）岁。所有入院患者无陈旧性心肌梗死、风湿性心脏病、原发性心肌病、甲状腺疾病、结核病、恶性肿瘤、急性感染、自身免疫病等疾病。

PLA测定方法：纳入患者均在抗血栓治疗前，肘静脉采血3 ml并放入含柠檬酸钠抗凝血试管中，采血时不能压迫压脉带，并弃去开始2 ml，血标本2 h内应用流式细胞仪（BD FACSCanto Ⅱ流式细胞仪）分析检测。根据CD45荧光、CD45-FS(直向散射光)及CD45-SS(侧向散射光)设门，将外周血白细胞分为中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞三群细胞。每群细胞分为CD41a阳性（与血小板结合）和CD41a阴性（无血小板结合）2组亚群，计算相应细胞群中血小板—白细胞数量百分比，分别记录PNA、血小板—单核细胞聚集体（PMA）、血小板—淋巴细胞聚集体（PlyA）值。通过流式细胞仪分析血

统计学处理: 采用SPSS20.0进行统计学分析。计量资料以均数±标准差（）表示，组间比较采用t检验和方差分析，计数资料的比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。清中PNA、PMA、PlyA浓度。心肌肌钙蛋白I检测采用心肌肌钙蛋白I检测卡，肌酸激酶同工酶测定采用酶法。

2 结果

2.1 一般临床资料

两组患者一般临床资料比较（表1）。两组在年龄、性别、冠心病危险因素（如体重指数、吸烟、高血压、糖尿病及高血脂）等方面差异均无统计学意义（P均>0.05）。STEMI组PNA明显高于对照组（P<0.05），STEMI组肌酸激酶同工酶与肌钙蛋白I水平明显高于对照组（P<0.01）；差异均有统计学意义。

表1 两组患者一般临床资料比较（）

表1 两组患者一般临床资料比较（）

注：STEMI：急性ST段抬高型心肌梗死；PNA：血小板—中性粒细胞聚集体；PMA：血小板—单核细胞聚集体； PlyA：血小板—淋巴细胞聚集体

项目 对照组 (n=30) STEMI组 (n=40) P值年龄 (岁) 68.4±1.6 70.0±5.4 0.218男性[例 (%)] 18 (60.0) 26 (65.0) 0.362体重指数 (kg/m2) 24.0±1.9 24.8±1.8 0.972吸烟[例 (%)] 15 (50.0) 23 (57.5) 0.459高血压[例 (%)] 19 (63.3) 23 (71.9) 0.472糖尿病[例 (%)] 10 (33.3) 15 (37.3) 0.851空腹血糖 (mmol/L) 5.1±2.0 5.2±1.5 0.751尿酸 (µmol/L) 326.3±15.6 324.2±15.7 0.918总胆固醇 (mmol/L) 5.5±1.1 5.7±1.2 0.428高密度脂蛋白胆固醇 (mmol/L) 1.1±0.1 1.0±0.4 0.458低密度脂蛋白胆固醇 (mmol/L) 3.4±0.7 3.3±0.7 0.644甘油三酯 (mmol/L) 1.5±0.2 1.5±0.2 0.733血小板计数 (×109/L) 254±47 233±55 0.136白细胞计数 (×109/L) 7.4±3.2 12.1±2.5 0.089 PNA (%) 20.1±18.9 30.6±9.3 <0.05 PMA (%) 77.3±6.2 81.1±11.9 0.312 PlyA (%) 7.7±4.3 8.2±3.7 0.254肌酸激酶同工酶峰值 (ng/ml) 3.6±14.2 187.0±129.0 <0.01肌钙蛋白I (µg/L) 0.3±0.1 15.9±2.4 <0.01

2.2 外周血各型白细胞的流式细胞分析图谱比较

流式细胞分析图谱显示：与对照组相比，入院时STEMI组PlyA水平（P=0.245）和PMA水平（P=0.312）升高，但差异无统计学意义，而PNA水平（P<0.05)明显高于对照组水平，差异有统计学意义。

2.3 相关性分析

PLA水平与肌酸激酶同工酶和肌钙蛋白I相关性的比较（图1、图2）：分析表明，PLA水平与肌酸激酶同工酶（r=0.4992，P<0.01）和肌钙蛋白I（r=0.4365，P<0.01） 呈正相关。

图1 血小板—白细胞聚集体水平与肌酸激酶同工酶的相关性

图2 血小板—白细胞聚集体水平与肌钙蛋白I的相关性

3 讨论

相关报道表明，临床上约有25%的STEMI患者早期发病症状不典型[7]。尽早对该类患者进行诊断并确定治疗方法对改善不典型症状STEMI患者预后具有重要的意义。本研究表明，在STEMI患者中PNA水平明显增高，提示高水平的PNA可以作为急性心肌梗死的新指标，对诊断STEMI具有一定预测价值。

PLA从广义上讲包括PNA、PMA和PlyA。在脑梗死和糖尿病患者中，PLA水平明显升高，而且在一定程度上能够反映斑块稳定性[8,9]。有报道已证实与非急性冠状动脉综合征患者相比，急性冠状动脉综合征患者中PNA、PMA、PlyA水平明显升高，具有显著差异[10-12]。另外，对于非STEMI患者，高水平的PLA提示患者临床预后不佳[6,13]。最近研究表明，在STEMI患者中，增加的白细胞及血小板计数提示临床预后不佳[14]。其原因可能是中性粒细胞在心肌缺血—再灌注过程中分泌多种激素（如血栓素-B2、白三烯-B4），不仅导致血管收缩，同时产生PNA[15]。活化的PNA诱导中性粒细胞胞外诱捕网的释放[16,17]，而中性粒细胞胞外诱捕网通过调节血栓形成过程中的中介产物，参与血栓的形成，导致微血管的堵塞[18,19]。

本研究结果证实在STEMI患者中PNA、PMA、PlyA水平明显升高，这与既往研究结果一致。在STEMI患者中大量血小板和白细胞被激活，PLA水平显著升高，且PLA水平与病情严重程度呈正相关[20,21]。在急性心肌梗死患者中，PLA水平升高是炎症和血栓机制相互作用的结果，炎症可导致局部血栓形成，而血栓形成又可加剧炎症反应，形成恶性循环。本研究从炎症—血栓机制角度探讨PLA与急性心肌梗死的关系，证实PLA对预测STEMI的发生具有一定价值。更重要的是，本研究发现PLA水平与肌酸激酶同工酶和肌钙蛋白I呈正相关，这可能与PNA促进梗死区域处炎症反应有关。

总之，本研究表明，在STEMI患者中，PLA包括PNA、PMA、PlyA水平均较对照组升高，尤以PNA更显著，提示高水平的PLA尤其是PNA可以作为急性心肌梗死的一个新指标，但有关其是否可作为预测急性心肌梗死发生的指标，仍需进一步研究。

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Expression of Platelet-neutrophil Aggregates in Patients With ST-segment Elevation Myocardial Infarction

DONG Hai-qiu, DONG Mei, REN Fa-xin.
Department of Cardiology,Yantai Yuhuangding Hospital Affiliated to Qingdao University Medical College,Yantai (264000), Shandong, China

REN Fa-xin, Email:drren@163.com

Objective: This work studied platelet-neutrophil aggregates (PNA) expression in patients with acute ST-segment elevation myocardial infarction (STEMI).Methods: Our research included in 2 groups: STEMI group, n=40 patients admitted in our hospital and Control group, n=30 normal subjects. Blood levels of PNA, platelet-monocyte aggregates (PMA) and platelet-lymphocyte aggregates (PlyA) were measured by flow cytometry at admission and the results were compared between 2 groups.Results: Compared with Control group, STEMI group had similar blood levels of PlyA and PMA, P=0.245 and P=0.312; while increased blood level of PNA, P<0.05. Correlation analysis showed that platelet-leukocyte aggregates (PLA) level was positively related to CK-MB (r=0.4992, P<0.01) and cTnI (r=0.4365, P<0.01).Conclusion: Blood level of PLA, especially PNA was significantly higher in STEMI patients which suggested that increased PNA might be sued as a new index for AMI diagnosis in clinical practice.

Myocardial infarction; Platelet aggregation; Platelet-neutrophil aggregates

2016-06-08）

（编辑：漆利萍）

山东省自然科学基金联合专项（ZR2015HL004）；烟台市科技发展计划（ 2015WS031）

264000 山东省烟台市，青岛大学医学院附属烟台毓璜顶医院 心血管内科

董海秋 硕士研究生 研究方向为 急性心肌梗死 Email:943118755@qq.com 通讯作者：任法新 Email:drren@163.com

R542.22

A

1000-3614（2017）02-0145-04

10.3969/j.issn.1000-3614.2017.02.008

方法：共计纳入于我院心内科住院的STEMI患者40例为STEMI组，同期收集健康查体者30例为对照组。于入院即刻抽取静脉血，应用流式细胞仪分别检测PNA、血小板—单核细胞聚集体（PMA）和血小板—淋巴细胞聚集体（PlyA）表达水平。比较两组PNA、PMA和PlyA表达水平的差异。

结果：与对照组相比，STEMI组PlyA（P=0.245）和PMA（P=0.312）水平升高，但差异无统计学意义。STEMI组PNA水平明显高于对照组（P<0.05)，差异具有统计学意义。相关性分析表明，血小板-白细胞聚集体（PLA） 水平与肌酸激酶同工酶（r=0.4992，P<0.01）和肌钙蛋白I（r=0.4365，P<0.01）呈正相关。

结论：本研究表明，在STEMI患者中PLA尤其是PNA水平明显增高，提示高水平的PNA可以作为急性心肌梗死的一个新指标。