自拟抑酸止痛方对胃溃疡大鼠胃酸及胃蛋白酶的影响

王 璞 ，王长宏 ，刘明晖*， 赵树华， 张 学，吴思宇 ，尚宇航 ，赵雨杰

(1.吉林大学临床医学院，吉林 长春 130021;2.吉林大学中日联谊医院 中医科)

自拟抑酸止痛方对胃溃疡大鼠胃酸及胃蛋白酶的影响

王 璞1，王长宏2，刘明晖2*， 赵树华2， 张 学2，吴思宇1，尚宇航1，赵雨杰1

(1.吉林大学临床医学院，吉林 长春 130021;2.吉林大学中日联谊医院 中医科)

胃溃疡为临床常见病[1]，目前抑酸剂、胃黏膜保护剂[2,3]等西药方案成熟，疗效确切，但是价格偏贵、毒副作用大等问题仍不容忽视，且停药后复发率高，流行病学数据显示达50%-70%。近年来，中药对胃溃疡治疗作用的实验研究取得了诸多进展[4]，显示出独特的优势。本课题采用实验室常用的醋酸涂抹法复制大鼠消化性溃疡模型，以胃液量、胃酸度及胃蛋白酶活性为观察指标，对抑酸止痛方治疗消化性溃疡的疗效及作用机理进行探讨，现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 药材与试剂 海螵蛸、乳香、没药，由吉林大学中日联谊医院中药房提供，经执业中药师鉴定均为地道药材，质量合格；奥美拉唑肠溶胶囊(沈阳澳华制药股份有限公司，批号：20121013，规格：20 mg/粒)；酚酞(天津永晟精细化工有限公司，批号：20130428，分析纯)；胃蛋白酶测试盒(南京建成科技有限公司，批号：20140310)；NaOH(齐齐哈尔化工总厂，批号：20130528)，水合氯醛(青岛金沙字库化工厂，批号：40448)。

1.2 实验动物 健康Wistar大鼠60只，SPF级，雌雄各半，体重200±20 g，由吉林大学基础医学院实验动物中心提供，合格证号：SCXK(吉)20070003，动物饲养：恒温22℃，大鼠自由进食进水，室内保持自然光暗周期。

1.3 仪器 MP51001型电子秤(上海横平科学仪器有限公司)；5810型低温高速离心机(德国Eppendorf公司)；BlueStar Plus紫外-可见分光光度计(北京莱伯泰科仪器有限公司)。

1.4 方法

1.4.1 药物制备 抑酸止痛方中海螵蛸：乳香：没药按2∶1∶1比例组成，首次加10倍于中药质量蒸馏水浸泡2 h后，常规煎煮2次，每次30 min，滤出药液并加热浓缩成每1 ml药液含原药材2 g，冷却后放置于4℃冰箱备用，待使用时加入蒸馏水稀释至所需浓度。

1.4.2 动物模型制备 将Wistar大鼠60只按随机数字法分成假手术组、模型组、中药大剂量组、中药中等剂量组、中药小剂量组及西药对照组，每组10只，雌雄各半，按照Takagi[5]方法复制大鼠胃溃疡模型：用10%水合氯醛按0.2ml·100 g-1比例对其进行腹腔给药[6]，待麻醉后将大鼠仰卧固定，去毛，用75%乙醇进行消毒，用手术刀从剑突下部沿腹白线打开长度约2 cm的刀口，打开腹腔，于胃黏膜下层注入冰醋酸，生理盐水清洗局部，缝合腹壁；假手术组开腹后于胃黏膜下层注入同体积生理盐水。手术后第3天开始给药，中药大剂量组按1.0 g·kg-1体重日1次灌胃(相当于成人剂量的20倍)；中药中等剂量组按0.5.0 g·kg-1体重日1次灌胃(相当于成人剂量的10倍)；中药小剂量组按0.25 g·kg-1体重日1次灌胃(相当于成人剂量的5倍)；西药对照组以奥美拉唑水溶液4 mg·kg-1体重日1次灌胃；假手术组及模型组给予相同体积的蒸馏水，以上各组给药天数为14 d。

1.4.3 指标检测 胃液检测:给药结束后1天，大鼠背位固定，剪开腹腔，结扎贲门，摘取全胃，于胃大弯处剪一小口，将胃内容物收集于刻度离心管中，记录胃液量。胃总酸度检测 :所收集胃液置于离心管中，以半径4 cm、转速3 000 r/min离心15 min后，吸取上层清液1 ml，加酚酞指示剂1滴，用0.01 mol·L-1的NaOH滴定至指示色不变，根据所消耗NaOH量，由公式总酸度(mol·L-1)=10×耗去NaOH溶液量(ml)可计算胃总酸度。胃蛋白酶活性的检测:依据胃蛋白酶测试盒说明书进行检测，取反应终止后的样本在660 nm波长处测定光密度(OD)，代入回归方程(以标准品胃蛋白酶OD值对质量浓度进行回归分析)计算胃蛋白酶活性(U/ml)。

1.5 统计学方法

2 结果

与模型组对比，各组大鼠胃液量、胃酸总量及胃蛋白酶活性均显著降低(P<0.05)；与奥美拉唑组对比，中药高剂量组各项指标无显著差异(P>0.05)；中药中、低剂量组各项指标高于中药高剂量组及奥美拉唑组(P<0.05)；随着中药剂量的增加，各项观察指标依次降低(P<0.05)，说明抑酸止痛方疗效与剂量成正相关。具体见表1。

表1 抑酸止痛方对大鼠胃液量、胃酸总量 及胃蛋白酶活性的影响

a与b:P<0.05;a与c:P<0.05;b与cP>0.05。

3 讨论

一直以来，“胃酸-胃蛋白酶自身消化”被认为是消化性溃疡的最终形成原因[7，8]，这一观念在“HP时代”仍占主导地位。胃蛋白酶是由胃主细胞分泌的胃蛋白酶原经胃酸激活而形成，它具有降解蛋白质分子的作用，因此对消化道黏膜有侵袭作用[9]。胃液是消化液中的主要成分，胃黏膜壁细胞、主细胞和黏液细胞均能分泌，由胃酸、胃蛋白酶、黏液、氯化钠、氯化钾等成分组成。胃酸有多种作用，其主要功能之一就是激活胃蛋白酶原，使之转变为具有生物活性的胃蛋白酶，同时为胃蛋白酶发挥作用提供适宜的外界环境。当胃内pH值上升超过4.0时[10]，胃蛋白酶即失活，因此胃蛋白酶的活性受到胃内环境制约，我们在探讨消化性溃疡的病因病机及治疗方案时，首先要考虑胃酸的作用[11-12]。综上，胃酸的作用在溃疡发生中占主导地位。

抑酸止痛方是临床验方，方剂组成为海螵蛸、乳香、没药[13]，其中海螵蛸抑酸、定痛、止血、愈疡之功效；乳香行气止痛；没药散瘀结、消肿胀。有研究报道，以海螵蛸、乳香、没药为主要组成的方剂在研究中普遍应用于非甾体型、慢性乙酸性、幽门结扎型和应激型胃溃疡模型，均有显著的抗溃疡作用。

本研究表明，抑酸止痛方对幽门结扎型大鼠胃溃疡模型可显著降低胃总酸度并能够抑制胃蛋白酶活性，且无明显的毒副作用。

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国家中医药管理局全国名老中医药专家传承工作室项目([2014]20) ；吉林大学“大学生创新创业训练计划”项目 (20161100548)；吉林大学课题项目(2016YX285)

1007-4287(2017)02-0311-02

2016-10-10)

*通讯作者