结核感染T细胞检测应用于结核杆菌感染的研究

范伟光,孟 娟 ,苏苗苗,刘 洋,石荣亚,石鹏辉,马金彤

(保定市传染病医院，河北 保定071000)

*通讯作者

结核感染T细胞检测应用于结核杆菌感染的研究

范伟光,孟 娟*,苏苗苗,刘 洋,石荣亚,石鹏辉,马金彤

(保定市传染病医院，河北 保定071000)

目的 评价结核感染T细胞检测(免疫斑点法)(T-SPOT.TB)的等效性,指导结核病的临床诊治。方法 对受试者进行T-SPOT.TB、痰涂片、LDH、ADA、hs-CRP、ESR检测，对结果进行观察、比较、分析。 结果 结核性疾病组T-SPOT.TB的阳性率均显著高于非结核性疾病组和正常对照组T-SPOT.TB的阳性率，差异有统计学意义(P<0.05)；而非结核性疾病组和正常对照组T-SPOT.TB的阳性率差异无统计学意义(P>0.05)；结核性疾病组中痰涂片阳性的T-SPOT.TB检测阳性率为85.0%，痰涂片阴性的T-SPOT.TB检测阳性率为86.7%，两者比较差异无统计学意义(P>0.05)；结核相关生化指标(LDH、ADA、hs-CRP)和ESR检测在T-SPOT.TB阳性组的表达量均显著高于T-SPOT.TB阴性组的表达量，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 T-SPOT.TB为判断是否感染结核的可靠指标。

结核分枝杆菌；肺结核;结核感染T细胞斑点试验

(ChinJLabDiagn,2017,21:0220)

结核病是机体被结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)感染，引发的一种传染病，主要经过上呼吸道传播，属于慢性消耗性疾病。结核病是全球最为严重的卫生疾病之一，据WHO相关数据分析，全球有约20亿人感染过结核分枝杆菌，每年有约200万人死于结核[1，2]。早在2000年，国家卫生部第4次结核流行病学调查中显示，我国全年龄组结核分枝杆菌(MTB)感染率已达到44.5%,全国大约有5.5亿人次感染了该菌，感染率高于全球人口感染率约1/3水平[3]。结核病是能治愈的，特别是早期进行治疗可明显降低病死率。近年来，新发展的一种以T细胞检测为基础的结核感染T细胞检测(T-SPOT.TB),被美国、欧洲等多国的临床诊疗指南所推荐。本研究拟对所有受试者，进行结核感染T细胞斑点试验,同时进行痰涂片抗酸染色，结核相关生化指标(LDH、ADA、hs-CRP)检测和ESR测定，以评价T-SPOT.TB 的等效性,指导结核病的临床诊治。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选择自2014年7月至2015年3月在保定市传染病医院住院、门诊的结核患者110例。其中男62例，女48例，平均年龄为(31.25士16.67)岁，所有入选本研究的病例患者治疗时间均小于1周，经临床或细菌学检查确诊[4]。其中肺结核患者80例，肺外结核患者30例。非结核组患者为住院、门诊确诊为其他传染病的43例病例，男27例，女16例，平均年龄为(39.15士20.23)岁。健康对照组50例为排除结核病的健康体检者，男26例，女24例，平均年龄为(29.01士13.54)岁。

1.2 试剂和仪器 主要试剂：结核感染T细胞检测试剂盒(免疫斑点法)(T-SPOT.TB)购自上海复星长征医学科学有限公司；乳酸脱氢酶(L法)检测试剂盒购自北京九强生物技术股份有限公司；腺苷脱氨酶测定试剂盒(过氧化物酶法) 购自北京九强生物技术股份有限公司；超敏C-反应蛋白测定试剂(免疫比浊法) 购自北京利德曼生化股份有限公司。主要仪器： HFsafe-1500 CLASS II TYPE B2生物安全柜、AU-640生化分析仪等。所有试验均严格按照试剂操作规程执行。

1.3 统计处理 应用SPSS19.0软件进行统计学数据分析，计数资料：采用χ2检验；计量资料：根据数据方差齐性检验，选择采用t检验或者t’检验，检验水准：α=0.05。

2 结果

2.1 对110例结核患者、43例非结核患者和50例健康体检者的T-SPOT.TB阳性率进行统计学分析，采用χ2检验。结果见表1。

表1 各组间T-SPOT.TB阳性率的比较

注：*χ2=203.457,P <0.05，▲χ2=0.346,P>0.05

2.2 对110例结核患者痰涂片结果和T-SPOT.TB检测结果进行统计学分析，采用χ2检验。结果见表2。

表2 结核患者痰涂片分析和T-SPOT.TB的结果比较

注：χ2=0.001,P>0.05

2.3 对T-SPOT.TB阳性组和T-SPOT.TB阴性组的结核相关生化指标(LDH、ADA、hs-CRP)检测和ESR检测结果进行统计学分析，采用t检验。结果见表3。

表3 相关生化指标和ESR在T-SPOT.TB 阳性组与T-SPOT.TB阴性组的比较分析

3 讨论

近年来，中国地区结核病发病上升趋势十分明显，已严重影响我国人民生活质量和健康保健。潜伏感染者和结核患者被尽早发现，对其进行干预至关重要，是控制结核病传染源，切断结核病传播途径的关键。结核病明确诊断需要将临床表现、影像学与病原免疫学检查、组织病理学和对抗痨药治疗反应等结合起来进行评估。至今没有一种准确、快速、可靠检测结核分枝杆菌的方法[5]。痰涂片抗酸染色阳性对诊断肺结核有比较重要的临床意义，该方法技术要求低，不需特殊仪器设备，但是非常容易漏检，需要连续多次进行镜检，并且该方法敏感性过低，不能区分死菌和活菌，即使没有发现抗酸杆菌也不能说明没有感染结核。结核相关生化指标(LDH、ADA、hs-CRP)检测虽然在结核感染期间都有不同程度的高表达，但并不能特异性的说明是结核感染。ESR可作为了解肺结核患者病情的参考，在一定意义上又可以反映肺结核的活动程度，但是需要其他试验方法的综合判断。

T-SPOT.TB是以T细胞为基础的体外IFN-γ反应测定方法[6]。以T细胞免疫应答为基础的T-SPOT.TB，其原理为机体初次感染结核分枝杆菌后会行成致敏的T淋巴细胞，当机体再次感染结核分枝杆菌时，致敏的T淋巴细胞会释放较高水平的细胞因子，其中最重要的为γ-干扰素(IFN-γ)。高水平的IFN-γ反应可提示结核分枝杆菌感染[7，8]。T-SPOT.TB选用RD1区编码的两种早期分泌蛋白:培养滤过蛋白-10( CFP-10)与早期抗原靶-6( ESAT-6)，它们在结核分枝杆菌感染早期就能够被机体的免疫系统识别，引发专一性的细胞免疫反应，是特异性非常高的蛋白[9]，其避免了非特异性表位(如非结核分枝杆菌及卡介苗)的影响[10]。T-SPOT.TB为英国原装进口试剂 (Oxford Immunotec,UK)，是应用ELISPOT技术测定产生IFN-γ的T细胞的个数。

本研究显示结核性疾病组、非结核性疾病组、正常对照组T-SPOT.TB的阳性率分别为86.4%、7.5%、4.0%。结核性疾病组T-SPOT.TB的阳性率均显著高于非结核性疾病组和正常对照组T-SPOT.TB的阳性率，差异有统计学意义(P<0.05)，可见T-SPOT.TB的敏感性很高；而非结核性疾病组和正常对照组T-SPOT.TB的阳性率差异无统计学意义(P>0.05)，可见T-SPOT.TB的特异性也很高。痰涂片阳性的T-SPOT.TB检测阳性率为85.0%，痰涂片阴性的T-SPOT.TB检测阳性率为86.7%，两者比较差异无统计学意义(P>0.05)，说明T-SPOT.TB检测在痰菌涂片阴性结核病患者中的敏感性也很高。结核相关生化指标(LDH、ADA、hs-CRP)检测和ESR在T-SPOT.TB阳性组的数值均明显高于T-SPOT.TB阴性组的数值，差异均有统计学意义，说明结核相关生化指标(LDH、ADA、hs-CRP)检测和ESR测定对结核的诊断也有一定价值。

[1] WHO.G lobal Tubercu los is Control Surveillance Planning Financing Geneva WHO,2007.

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[4]中华医学会.临床诊疗指南-结核病分册[M].北京:人民卫生出版社，2005.1-46，122.

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[10]Kulshrestha A,Cupta A,Verma N.et al.Expression and purification of recombinant antigens of Mycobacterium tuberculosis for applicotion in serodiagnosis[J].Protein Expr Purif,2005,44(8):75.

Research T-SPOT.TB applied to Mycobacterium tuberculosis infection

FANWei-guang,MENGJuan,SUMiao-miao,etal.

(InfectiousDiseaseHospitalofBaodingCity,Baoding071000,China)

Objective The results were analyzed to evaluate the meaning of T-SPOT.TB in the clinical diagnosis and treatment of tuberculosis.Methods:All the samples were examined by T-SPOT.TB,sputum smear,LDH,ADA,hs-CRP and ESR test.All the testing items were performed strictly in accordance with the Reagent testing instructions.Methods The T-SPOT.TB positive rate of the tuberculous group was significantly higher than that of non-tuberculosis disease group and control group(P<0.05);However,the T-SPOT.TB positive rate was no statistically significant between non-tuberculosis group and control group.(P>0.05).Positive rate of T-SPOT.TB test was 85.0% for Sputum smear-positive cases,and 86.7% for Sputum smear negative cases,with no statistically significant difference(P>0.05).It showed that T-SPOT.TB test in the sputum smear negative TB patients had a high sensitivity.The amount of LDH、ADA、hs-CRP and ESR test in T-SPOT.TB positive group were significantly higher than that in T-SPOT.TB negative groups(P<0.05).Results Conclusion T-SPOT.TB is a reliable index for judging whether infected with TB.

Mycobacterium Tuberculosis;TB;T-SPOT.TB

1007-4287(2017)02-0220-03

R521

A

范伟光，男，主管技师，硕士，擅长临床基础检验、生化检验、免疫检验等;孟娟，女，主管护师，从事感染科护理管理.

2016-01-30)