新疆维吾尔族非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变与病理特征的相关性研究

阿提坎·卡吾力++++++张淑娟++++++王磊++++++克尤木·阿不来提++++++常建华

[摘要] 目的 研究新疆维吾尔族非小细胞肺癌（NSCLC）表皮生长因子受体（EGFR）基因突变与病理特征的相关性。 方法 回顾性分析2003年1月～2014年1月新疆喀什地区第二人民医院诊治的新疆维吾尔族NSCLC患者的组织蜡块43例，病理标本均予EGFR基因突变检测试剂盒检测，观察患者EGFR基因突变检出率、临床病症分型与EGFR基因突变的相关性，基线资料与EGFR基因突变的相关性。 结果 本组患者病理标本EGFR基因突变率为11.63%（5/43），第19外显子缺失改变率[80.00%（4/5）]显著高于第21外显子L858R点突变率[20.00%（1/5）]（P < 0.01）；临床病症分型中腺癌EGFR基因突变检出率[19.05%（4/21）]较鳞癌[6.67%（1/15）]、大细胞癌[0.00%（0/4）]及其他癌[0.00%（0/3）]高（P < 0.05），同时临床基线资料中女性EGFR基因突变检出率[20.00%（4/20）]较男性[4.34%（1/23）]高（P < 0.05）。在临床基线资料中年龄、吸烟史和TNM分期的EGFR基因突变检出率比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。 结论 新疆维吾尔族NSCLC患者EGFR基因突变与病理特征具一定相关性，临床女性腺癌患者较多见。

[关键词] 新疆维吾尔族；非小细胞肺癌；表皮生长因子受体；基因突变；病理特征

[中图分類号] R734.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）11（b）-0105-04

[Abstract] Objective To explore the relevance between the gene mutation and pathologic feature of epidermal growth factor receptor in non small cell lung cancer of Xinjiang Uygur. Methods 43 cases wax block tissue of Xinjiang Uygur non small cell lung cancer patients in the Second People's Hospital of Xinjiang Kashi District from January 2003 to January 2014 were selected for retrospective analysis， pathological specimen were tested by EGFR gene mutation detection kit.The mutation detection rate of EGFR gene， relevance between clinical classification of diseases， EGFR gene mutation， the relevance between baseline data and EGFR gene mutation were observed. Results The mutation rate of EGFR gene was 11.63%（5/43）. The constituent ratio of exon nineteenth deletion was 80.00% （4/5）， which was higher than the constituent ratio of exon Twenty-one L858R mutation （20.00%， 1/5）（P < 0.01）. In clinical classification of diseases， mutation detection rate of EGFR gene in adenocarcinoma was 19.05% （4/21）， which was higher than 6.67% （1/15） of squamous cell carcinoma， 0.00%（0/4） of Large cell carcinoma and 0.00%（0/3）of other cancer（P < 0.05）. In clinical baseline data， mutation detection rate of EGFR gene of female was 20.00%（4/20）， which was higher than 4.34% （1/23） of man' （P < 0.05）. In clinical baseline data， Age， smoking history and TNM stage had no significant difference（P > 0.05）. Conclusion There is certain correlation between gene mutation and pathological characteristics in epidermal growth factor receptor in non small cell lung cancer of Xinjiang Uygur， clinical female patients with adenocarcinoma are more common.

[Key words] Xinjiang Uygur； Non small cell lung cancer； epidermal growth factor receptor； Gene mutation； Pathological characteristics

肺癌是临床常见、多发的肺原发恶性肿瘤，临床患病率、致残率和死亡率均居高不下。各类肺癌疾病中又以非小细胞癌（non-small-cell carcinoma，NSCLC）的患病人数最多，约占肺癌总人数的75%，且大量研究表明，80%以上NSCLC患者病情已进入中晚期，错过了常规根治性手术或放射性治疗的最佳时期[1-4]，勉强手术后的5年存活期也较短。表皮生长因子受体（epithelial growth factor receptor，EGFR）是上皮生长因子细胞增殖和信号传导的受体，属于ErbB受体家族的一种，突变或过表达均会造成肿瘤疾病的快速发展[5]。EGFR在正常肺细胞组织中不表达或表达较低，而在NSCLC患者肺细胞组织中表现为活性显著增高，由此可初步认定，EGFR是NSCLC患者较有前途的特异性癌病治疗靶点[6-7]。本研究对新疆喀什地区第二人民医院（以下简称“本院”）诊治的43例新疆维吾尔族非小细胞肺癌患者临床资料进行回顾性分析，以期为该类型病症患者临床治疗方案的合理选择提供科学指导。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2003年1月～2014年1月本院诊治的新疆维吾尔族非小细胞肺癌患者的组织蜡块43例，病情均经手术病理证实[8]。本组患者男23例（53.49%），年龄23～72岁，平均（56.95±2.54）岁；女20例（46.51%），年龄23～75岁，平均（57.88±2.74）岁；年龄分界：<60岁者11例（25.58%），≥60岁者32例（74.42%）；鳞癌、腺癌、大细胞癌和其他癌症的情况分别为15例（34.88%），21例（48.84%），4例（9.30%）和3例（6.98%）；依据国际通用肿瘤分期标准做TNM分期，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期肿瘤分别为9例（20.93%），12例（27.90%），19例（44.19%）和3例（6.98%）；有吸烟史者16例（37.21%），无吸烟史者27例（62.79%）；受教育程度：初中及以下12例（27.91%），高中至大专17例（39.53%），大专以上14例（32.56%）。本组患者性别、年龄、病症分型、TNM分期及受教育程度等基线资料均未对本研究实验结果构成不良影响。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：患者病情符合本研究实驗基本要求；均为新疆维吾尔族；研究实验展开条件均相同；临床资料无缺失。排除标准：较难完全配合本研究实验实施者；患者统计资料缺失，无法完成研究分析[9-10]。

1.3 方法

采用4%中性甲醛固定，经石蜡包埋本组所有患者的病理标本，行常规HE染色，选择肿瘤成分>80.00%的瘤组织切片进行EGFR基因突变检测。43例患者病理标本行ARMS-PCR法检测，均采用EGFR基因突变检测试剂盒检测，试剂盒购自厦门艾德生物医药科技有限公司[（货号：ADx-EG01，EG07，EG08，EG09），规格：24测试/盒]。反应条件分别为，第一次扩增：94℃预变性3 min，58℃ 30 s，72℃ 30 s，共25个循环，最后72℃延伸3 min；第二次扩增：94℃预变性3 min，58℃ 30 s，72℃ 30 s，共25个循环，最后72℃延伸3 min。具体操作步骤：将阳性质控品Tap酶（EGFR29）取出，室温解冻后摇匀，离心15 min后待用。然后将3份2.25 μL EGFR29分别置入45 μL待测标本DNA、45 μL阳性质控品（STD）和45 μL超纯水（NTC）中，用涡旋器摇匀15 min后再快速离心15 min[11]。揭开8联反应条条盖，取出DNA样品5 μL分别加入8联PCR管反应条，盖上条盖做离心处理。然后加入PCR仪器，行扩增程序。共进行三个阶段，将各阶段收集到的信号，行实时PCR，并保存文件。

1.4 观察指标

统计本组43例NSCLC患者的EGFR基因，主要包括第19外显子和第21外显子L858R点的突变检测情况；分析本组所有患者各基线资料与EGFR基因突变的相关性。

1.5 统计学处理

采用SPSS 18.0统计软件对数据进行分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，计数资料用百分率（%）表示，采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 本组NSCLC患者EGFR基因突变检测情况

本组43例NSCLC患者EGFR基因突变的检出例数为5例（11.63%），其中4例患者为EGFR基因第19外显子缺失改变，占EGFR基因突变总数的80.00%（4/5），明显高于1例患者EGFR基因第21外显子L858R点突变，所占的20.00%（1/5），差异有统计学意义（P<0.01）。

2.2 本组NSCLC临床病症分型与EGFR基因突变的相关性

本组43例NSCLC患者临床病症分型与EGFR基因突变具有一定相关性，即腺癌患者EGFR基因突变检出率为19.05%（4/21），明显高于临床其他几个癌病症。见表1。

2.3 本组NSCLC基线资料与EGFR基因突变的相关性

本组43例NSCLC临床基线资料中女性EGFR基因突变检出率为20.00%（4/20），较男性的4.35%（1/23）高（P<0.05），剩余3项基线资料比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。

3 讨论

肺癌在临床恶性肿瘤疾病中位居首位，具有极高的病死率，其中NSCLC又以75%的比率，为肺癌患病人数最多的病症。NSCLC确诊较晚，常见手术和化疗方法治疗已无法取得理想临床效果，患者5年存活期也较短。随着科学技术的进步和对NSCLC的深入研究，EGFR作为原癌基因的一种表达产物，EGFR高表达或基因突变会促进瘤血管生成，加快癌变进展，NSCLC患者肺细胞组织中EGFR表达普遍较高，因此寻找EGFR基因突变的关联因素并靶向抑制，对NSCLC疾病的治疗具较大帮助。由于国内外对新疆维吾尔族NSCLC患者EGFR基因突变的相关研究较少，本文相关研究具有十分重要的意义。

EGFR基因位于人类第7号染色体短臂7p12-14区，包括28个外显子，EGFR基因是上皮生长因子细胞增殖和信号转导的受体，与肿瘤细胞组织的侵袭、增殖、转移、凋亡抑制及血管生成有密切联系[12-13]。EGFR基因突变检测对非小细胞癌患者个体化疗具有积极帮助，所以本研究回顾性分析本院诊治的43例新疆维吾尔族NSCLC患者的临床资料，根据其EGFR基因突变检出率，患者临床病症分型与EGFR基因突变的相关性以及患者临床基线资料与EGFR基因突变的相关性予以综合性分析，旨在为NSCLC患者临床治疗提供依据。本次收集标本量较少，考虑原因为：①患者就诊时即为晚期，失去了手术机会，未能收集到组织标本；②特殊的地理区域及经济特点，患者经济承受能力较差，未能进一步诊断治疗；③部分患者经穿刺确诊为肺癌，但组织较小，无法完成EGFR基因的进一步检测。

研究结果显示，本组43例患者中EGFR基因突总检出率为11.63%（5/43），其中4例患者为EGFR基因第19外显子缺失改变，占EGFR基因突变总数的80.00%（4/5），明显高于1例患者EGFR基因第21外显子L858R点突变占EGFR基因突变总数的20.00%（1/5），其可能与小分子TKIs的敏感度具有一定关系。大量研究证实，18-21外显子为EGFR基因的主要突变点，而其中90%是19和21号的外显子突变，肿瘤细胞的耐药性与21号外显子点突变密切关联，这主要是由于C-T的转换在790位密码子出现，引起的EGFR基因中790位点的T790M转变，好发于药物治疗后癌症复发患者中[14]。本研究患者均未首次接受治疗，因此第21号外显子L858R突变检测率低于第19外显子缺失改变，上述理论研究很好地证明了本次实验结果。EGFR基因突变率在不同种族的人群中存在显著差异。文献报道，亚洲人口EGFR基因突变率能够达到40%左右，而高加索人群则还不到10%[15]。另有研究认为，新疆维吾尔族为罗马人种，本组患者的EGFR基因突变率为11.63%，考虑与种族差异有关，需要进一步的实验研究[16]。

本研究中针对患者临床病症分型与EGFR基因突变的相关性给予调查分析，结果显示，本组患者临床病症分型与EGFR基因突变具有一定相关性，即腺癌患者EGFR基因突变检出率最高：19.05%（4/21），明显高于鳞癌的6.67%（1/15），大细胞癌的0.00%（0/4）及其他癌病患者的0.00%（0/3）。提示NSCLC患者病症分析与EGFR基因突变具有一定相关性，由此看来，在临床治疗中可根据患者疾病类型做出良好治疗方案的拟定，这对增强NSCLC患者临床治疗效果，提高生存率，改善其生活质量均具有积极影响意义[17]。临床相关研究发现，我国汉族肺腺癌EGFR突变率约为75%，本研究新疆维吾尔族19.05%检出率明显比较低，因此临床应用EGFR-TKI的效果会受到限制，但是本研究样本较少，期待以后会有进一步的研究进展[18]。

本研究结果显示，本组43例非小细胞癌患者临床基线资料中女性患者EGFR基因突变检出率为20.00%（4/20），较男性患者4.35%（1/23）高，差异有统计学意义，但患者年龄、有无吸烟史、TNM分期等基线资料比较无明显差别。相关临床研究发现，EGFR基因突变检出率与性别无关联，男女患者相关检出率无明显差异，与本研究结果存在差异，分析原因可能与本研究样本基数比较少相关[19]。且本研究吸烟与非吸烟突变无明显差异，与相关研究存在区别，分析原因可能与当地选取样本二手烟、其他途径吸烟造成突变降低相关[20]。关于新疆维吾尔族NSCLC患者EGFR基因突变与相关病理特征因素的相关性，还需后续更多的临床研究及验证。

综上所述，新疆维吾尔族NSCLC患者EGFR基因突变与病理特征具有一定相关性，通常多见于腺癌，好发于女性患者，且EGFR的基因突变研究可有效促进肺癌分子靶向的治疗发展。靶向药物治疗虽然个体差异较大，但其能够针对性地阻断机体肿瘤细胞增殖，具有独特的靶向治疗机制，且毒副作用小。因此，可合理利用基因检测进行靶向治疗优势人群的筛选，完成个体化的治疗方案实施，从而进一步提升肿瘤患者的临床疗效。

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