湖北省首例人感染H5N6禽流感病例实验室检测结果分析

王喜云，侯 敏，梅玉发，汪 倩，郑向梅，易卫兵

湖北省首例人感染H5N6禽流感病例实验室检测结果分析

王喜云，侯 敏，梅玉发，汪 倩，郑向梅，易卫兵

目的 分析湖北省首例人感染H5N6禽流感病例的实验室检测结果，为更好地检测人禽流感疑似病例标本提供参考。方法 对患者的不同病程、不同种类的标本进行实验室检测并进行分析。结果 我省首例人感染H5N6禽流感确诊病例只有前期的痰液标本检测到H5N6核酸，其它时间未检测到。结论 疑似人感染 H5N6 禽流感病例标本采集一定多样化，而且一定采集到初期的痰液标本。

H5N6；实验室；标本；人禽流感

2016年4月15日晚10点，十堰市西苑医院收治一例由神农架林区转来的“不明原因重症肺炎”患者，经国家、省、市疾控中心流行病学调查和实验室检测，确认该病例为我省首例H5N6人禽流感病例。H5N6是流感病毒的一种亚型，来源为禽类。H5N6禽流感病毒是一个低毒性的菌株，它在禽类中不会引起严重的疾病，然而人类感染后，临床表现严重[1]。H5N6导致人感染和传播的风险较低，目前尚未发现人传人的证据[2-4]。此前国内仅发现6例人感染H5N6禽流感病例，关于人感染H5N6禽流感病例实验室检测情况报道较少[5]，现将我市首例病例的实验室检测情况与结果汇报如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源和种类 2016年4月至6月分多次采集患者的鼻拭子、咽拭子、痰液、肺分泌物、肺洗液等标本。

1.2 检测方法

1.2.1 仪器与试剂 Real-time PCR仪(ABI 7300，美国)，病毒RNA提取试剂盒Rneasy Mini Kit(Cat. No：74104，QIAGEN公司)，病毒核酸提取试剂盒(磁珠法;型号:Ex-RNA/DNA，西安天隆科技有限公司)，禽流感病毒RNA检测试剂盒(PCR荧光法，AB公司)，PCR扩增引物探针由国家流感中心提供，H7N9、 H5N1、H10N8，H5N2检测试剂盒由北京金豪、江苏硕世、上海之江科技有限公司提供，后期H5N6检测试剂由湖北省疾控中心提供。

1.2.2 方法及结果判定 病毒RNA提取按照试剂盒相关说明书进行；Real-time PCR扩增反应按照试剂盒相关说明书进行.结果按以下方法判定：阴性对照或标本阴性无Ct值或Ct值为0，阳性对照Ct值<30，检测标本Ct值≤35为阳性。

1.3 质量控制 标本采集者均是检验专业应急队员，经过了专业的培训。实验室核酸提取采用两种方法、两名实验人员操作、体系使用两个厂家的试剂盒、每次试验均设阴阳性对照且重复1次。

2 结 果

2.1 实验室前期(发病1周内)检测结果 2016年4月16日凌晨神农架疾控中心与十堰市疾控中心采集患者鼻咽拭子以及痰液进行核酸检测，鼻咽拭子阴性，痰液A通阳性、H5阳性。4月16日上午十堰市疾控中心采集患者的肺分泌液、肺洗液、鼻拭子和3份痰液后一分为二，一份开展检测工作，另一份送至湖北省疾控中心，两地经甲型流感病毒通用，禽流感病毒H5、H7、H9、AN1、AN2、AN9和AN6核酸分型检测，检出患者3份痰液样本为H5阳性(十堰)、H5N6阳性(省疾控)，其余标本均为阴性。4月19日，经中国疾控中心复核，结合病例临床表现和流行病学调查结果，报告为湖北省首例确诊H5N6病例。

表1 病例初期各类标本3家实验室检测结果
Tab.1 Detected results of specimens in three laboratories in the early stage

检测时间检测单位标本种类检测项目PCR结果2016.04.15神农架林区疾病预防控制中心鼻咽拭液A型通用、H5、AN1阴性痰液阳性2016.04.16十堰市疾病预防控制中心鼻咽拭液A型、B型通用、H5、AN1、H7、阴性痰液AN9、H9、AN2、H10、AN8H5阳性2016.04.19湖北省疾病预防控制中心流感肺分泌液A型通用、H5、AN1、AN6阴性参比实验室肺洗液阴性鼻拭液阴性痰液H5N6阳性

2.2 实验室中期(发病1周后至出院1周前)检测结果 4月21日及27日十堰市疾控中心2次进行H5N6核酸检测均为阴性。

表2 病例中期各类标本实验室检测结果
Tab.2 Detection results of specimens in the different laboratories in the medium stage

检测时间检测单位标本PCR检测结果A型通用H5AN62016.04.21十堰市疾控中心鼻咽拭液阴性阴性阴性2016.04.27十堰市疾控中心鼻咽拭液阴性阴性阴性上呼吸道痰液阴性阴性阴性下呼吸道痰液阴性阴性阴性2016.05.19湖北省疾控中心流感参比实验室咽拭子2份阴性阴性阴性上呼吸道拭液阴性阴性阴性下呼吸道拭液阴性阴性阴性下呼吸道分泌液阴性阴性阴性

2.3 实验室后期(出院前1周内)检测结果 2016年6月6号及8号再次采集标本，经十堰市疾控中心和湖北省疾控中心流感参比实验室对采集的病人痰液、鼻咽拭液、血清等进行H5N6核酸检测结果为阴性，达到出院标准。6月13号，病人康复出院。

表3 病例晚期各类标本实验室检测结果
Tab.3 Detection results of specimens in the different laboratories in the later stage

检测时间检测单位标本PCR检测结果A型通用H5AN62016.06.06十堰市疾控中心痰液阴性阴性阴性鼻咽拭液阴性阴性阴性2016.06.08湖北省疾控中心流感参比实验室鼻拭液阴性阴性阴性痰液阴性阴性阴性血清阴性阴性阴性血凝块阴性阴性阴性

3 讨 论

目前国内外有关人感染 H5N6 禽流感病例的相关报道和研究较少[4,6-7]，有关实验室检测报道更少。此病例为湖北省首次发现报告H5N6 流感病例。本次报告的H5N6病例经两个月治疗康复出院，与文献[6]报道的病例不同。

本病例初期、中期、后期采集不同种类的标本，但只有前期的痰液标本检测到H5N6核酸，其它标本均未检测到，此情况与文献[2]报道不同，此病例检测结果提示，遇到重大不明原因的病例标本，要多次多样采集标本，以避免造成结果的失误；其次，提醒地市一级疾控机构的实验室除储备常用的检测试剂外，还应储备一些不常用的试剂，以能够及时准确的出具结果，为疫情的控制提供保障。

本病例研究的不足之处在于前期由于病人病重未能每天采样，中期由于无痰液标本，故而无法确定不带毒的时间。

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Detection results from first case of human infection with avian influenza (H5N6) in Hubei Province, China

WANG Xi-yun, HOU Ming, MEI Yu-fa, WANG Qian, ZHENG Xiang-mei, YI Wei-bing

(ShiyanCenterforDiseaseControlandPrevention,Shiyan442000,China)

We analyzed the laboratory detection results from the first case of human infected with avian influenza (H5N6) in Hubei Province, in order to provide a better basis for preventing and controlling human avian influenza in the future and a detected strategy for the detection of suspected cases of human avian influenza for the staff in the laboratory . The case data of epidemiological survey and related laboratory detection results of specimens of infection virus from the different time piont and kinds of specimens were analyzed by descriptive epidemiological methods. The H5N6 nucleic acid from the only early sputum specimens were detected, and while the others were not detected.In conclusion the different specimens of the doubtful H5N6 case should be collected, and the early sputum samples are very important and should be collected and detected.

H5N6; laboratory; specimens; human avian influenza

Zheng Xiang-mei，Email: 494698225@qq.com

10.3969/j.issn.1002-2694.2017.01.017

郑向梅，Email: 494698225@qq.com

十堰市疾病预防控制中心，十堰 442000

R511.7

C

1002-2694(2017)01-0089-03

2016-07-27 编辑：王晓欢