精草润目液治疗大鼠干眼模型的实验观察

王诗敏，李点

干眼是由于泪液的量或质或流体动力学异常引起的泪膜不稳定和（或）眼表损害，从而导致眼不适症状及视功能障碍的一类疾病。临床出现的各种名称（如干眼症、干眼病及干眼综合征等）均统一称为干眼[1]。近年干眼的发病率呈上升趋势，已严重影响患者的生活和工作。本研究的前期临床观察证实，精草润目液治疗干眼有良好疗效，为进一步探究其作用机制，观察该滴眼液对干眼模型角膜上皮和泪液分泌量的影响进行了本实验。

1 材料与方法

1.1 动物、试剂及药品

选用SPF级健康SD大鼠60只，体质量150～300 g，雌雄各半，由斯莱克景达实验动物公司提供（合格证编号：43004700016330），在湖南中医药大学SPF级动物实验中心进行普通饲料适应性喂养3 d，并双眼滴0.25%氯霉素滴眼液0.05 ml/(眼·次)，5次/d。实验前所有动物经裂隙灯（上海施惠医疗器械有限公司，SLM-2型）行外眼检查，均无异常，可纳入研究。

表1 角膜上皮损伤评分表

试剂：0.4%的盐酸奥布卡因滴眼液：日本参天制药株式会社。0.5%盐酸利多卡因注射液：国药集团容生制药有限公司。0.25%氯霉素滴眼液：四川美大康华康药业有限公司。1%苯扎溴铵溶液：上海运佳黄埔制药有限公司。0.5%羧甲基纤维素钠滴眼液：Allergan，InC。0.2%卡波姆滴眼液：Dr.Gerhard Mann，Chen.-pharm.Fabrik GmbH。0.9%NaCl注射液：湖南科伦制药有限公司。0.5mg/ml阿托品注射液：苪城天通动保药业有限公司。2%荧光素钠溶液，由湖南中医药大学制剂室配置。Schirmer测定滤纸：天津晶新技术开发公司。

精草润目液的制备：黄精浸泡后回流提取并滤过，减压浓缩。浓缩液加活性炭，煮沸，放冷，冷藏静置后抽滤，滤液在搅拌下加入乙醇使含醇量达到80%，滤过，取沉淀物，烘箱中干燥至恒重，即得黄精多糖。鱼腥草蒸馏提取，收集芳香水。取鱼腥草芳香水1000 ml及黄精多糖（高、中、低剂量组分别取黄静多糖2 g、1.5 g、1 g，最终的药物浓度分别为0.2%、0.15%、0.1%）。混合再加入氯化钠搅匀，调pH值至7.0，高速离心，灭菌备用。溶剂的制备：将氯化钠搅匀，加蒸馏水后调pH值至7.0，高速离心，灭菌备用。

裂隙灯显微镜、5 ml无菌注射器、5号针头、镊子、持针器、眼科剪、秒表、缝合针、1号黑丝线。

1.2 造模及分组

1.2.1 大鼠角膜上皮损伤干眼模型：用摘除泪腺后、滴加苯扎溴铵溶液的方法制备大鼠角膜上皮损伤干眼模型[3-4]。30只大鼠，双眼周去毛、消毒，0.4%的奥布卡因表面麻醉，0.5%利多卡因1 ml球后麻醉，在大鼠耳前皮肤上剪一小口，剥离并摘除双侧泪腺，双眼滴1%苯扎溴铵溶液，第2天观察角膜情况。

分组及给药：将造模成功的30只大鼠随机分为5组，每组6只。第1组为空白对照组，用溶剂治疗；第2组为阳性药物对照组，用0.5%羧甲基纤维素钠滴眼液治疗；第3、4、5组分别采用高、中、低剂量精草润目液治疗。 滴眼液的使用：4 次/(眼·d)，0.05ml/次，用药21 d。记录用药第7、14、21天角膜上皮损伤情况。

检测方法及评分标准：荧光素钠角膜染色采用5 ml注射器、5号针头将荧光素钠1滴滴入结膜囊内，5 min后在裂隙灯显微镜蓝光下观察角膜上皮的情况，每周观察1次。评分标准[5]见表1。

1.2.2 泪液分泌低下大鼠模型：参照Burgalassi泪腺注射阿托品的方法进行泪液分泌低下干眼动物模型的造模[6]。30只大鼠，双眼滴0.4%盐酸奥布卡因滴眼液，在泪腺注射阿托品 0.25 ml/眼（0.5 mg/ml），予每日双眼下泪腺注射阿托品4次，记录每日注射阿托品0.5 h后大鼠泪液分泌试验的结果，持续注射至第7天。

分组及给药：除阳性药物对照组采用0.2%卡波姆滴眼液治疗外，余分组及给药方法同前。记录治疗的第7、14、21天每只眼的泪液分泌量。

泪液分泌试验（SchirmerⅡ）：考虑SD大鼠眼球较小，不适合用适用于人类大小的滤纸条测试，故采取将其剪成两半的方式进行检测，以5 mm×35 mm滤纸一条，剪成两个各2.5 mm×35 mm大小的滤纸，在首端处反折，轻巧地置于下睑中后部1/3交界处，5 min后取出纸条，取出后2 min测滤纸湿长，反复测3次，取平均值。每周观察1次。

1.3 统计学方法

使用SPSS 17.0进行统计学分析。计量资料以x¯±s表示。大鼠造模前后泪液分泌量比较采用配对t检验；各组大鼠不同时期泪液分泌量和角膜上皮损伤评分值的比较采用单因素方差分析。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 大鼠角膜上皮损伤干眼模型

治疗前各组间的角膜上皮损伤评分差异无统计学意义（P＞0.05），治疗 7 d 及 14 d，低、中、高剂量组与阳性药物对照组相比，角膜上皮损伤评分差异均无统计学意义（P＞0.05）；治疗21 d，仅有精草润目液高剂量组的角膜损伤评分与阳性药物组相比差异有统计学意义（P＜0.05）；其中精草润目液高剂量组的角膜损伤评分明显低于中、低剂量组（P中=0.012，P低=0.001），中剂量组与低剂量组之间相比差异无统计学意义（P=0.151）（表 2）。

2.2 大鼠泪液分泌低下干眼模型

造模前，大鼠的泪液分泌量为（9.02±1.29）mm，造模后减少为（3.07±1.23） mm（t=4.326，P＜0.001），提示造模成功；造模前及造模后各组间泪液分泌量差异无统计学意义（P＞0.05），说明各组的泪液分泌量具有可比性；在治疗7、14及21 d，低剂量组泪液分泌量始终低于阳性药物对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）；而在治疗 21 d，精草润目液中、高剂量组的泪液分泌量明显高于阳性药物对照组 （P＜0.05），并且高剂量组的泪液分泌量要高于中剂量组（P=0.018）（表 3）。

3 讨论

干眼的发病，或由素体肺阴不足，燥热犯目；或情志不舒，郁火内生，津伤血壅；或久病、年老体衰、过用目力，阴津损耗；或风热眼或天行赤眼治疗不彻底，余热未清等，致津液亏虚，目失濡润而生燥。精草润目液选用黄精和鱼腥草两味药组方。黄精有补气滋阴的功效，黄精多糖是黄精生物活性物质的一个非常重要的成分，具有一定的抗氧化、提高免疫力、抗菌抗炎及调节细胞内分泌等作用[7]，用黄精多糖制成的滴眼液有抗炎、抗病毒、抗渗出、抗增生的作用[8]。鱼腥草的成分复杂，其中挥发油成分主要为癸酰乙醛（鱼腥草素）及月桂醛，而癸酰乙醛对多种细菌有明显的抑制作用，鱼腥草还具有增强免疫功能、增加白细胞吞噬能力和促进组织再生等作用，对增加机体免疫能力、抑制干眼引起的眼表上皮细胞炎症反应有一定疗效[9]，既往有应用鱼腥草制剂治疗干眼的报道[10]。

表2 各组角膜上皮损伤干眼模型大鼠的角膜上皮损伤评分比较（x¯±s，n=12）

表3 各组泪液分泌低下干眼模型大鼠的泪液分泌量（Schirmer II试验）比较（x¯±s,mm，n=12）

临床上治疗干眼主要应用人工泪液治疗。羧甲基纤维素钠滴眼液是具有代表性的一种人工泪液，它具有较强的黏稠性，是一种较理想的角膜表面润滑剂，能对角膜、结膜提供良好的湿润作用，而完整和有效的泪液成分和泪膜分布能加速角膜上皮的愈合，减轻角膜痛觉，利于减轻刺激症状。唯地息是由德国生产的含有0.2%卡波姆的亲水凝胶,由固相基质和水相分散层组成,类似泪膜的二层结构即黏液层和水层,可在眼球表面形成液体储库,每眨眼1次凝胶中的水分即可部分释放以补充泪液,因此唯地息可适用于泪液分泌减少的替代治疗。相比而言，羧甲基纤维素钠滴眼液对角膜的保护作用更好，而且不含防腐剂，避免了防腐剂对眼表的再次损伤，故用于第一种模型；卡波姆滴眼液补充泪液的作用更强，且为凝胶制剂，作用更持久，是泪液的良好替代品，更适合于第二种动物模型。

干眼的治疗目标是重建高质量稳定的泪膜，缓解症状，促使角膜上皮愈合，减少泪膜异常相关并发症的发生。基于此，我们分别观察了精草润目液对角膜上皮损伤大鼠和泪液分泌低下大鼠的影响。在角膜上皮损伤模型，用药干预21 d后，高剂量组角膜损伤评分明显低于阳性药物治疗组。在泪液分泌低下模型，高、中剂量组的泪液分泌量有随治疗时间延长逐渐增加的趋势，用药21 d时，这两组的泪液分泌量明显高于阳性药物对照组，而低剂量组干预后的泪液分泌量始终低于阳性药物对照组。上述结果提示，足够浓度的精草润目液在治疗一定时间后，对于修复角膜损伤、促进泪液分泌均有明显作用，药物的疗效与药物的浓度及治疗时间相关。现代医学认为炎症是各种不同类型干眼的共有发病机制[11-14]，即慢性炎症通过刺激眼表细胞激活局部的免疫反应，引起泪膜稳定性下降，增加泪液渗透压，继而导致干眼的发生。我们因此推测，精草润目液的作用机制可能与对炎症反应的调节作用有关。

综上所述，精草润目液能明显减轻干眼大鼠模型的角膜上皮损伤，并增加泪液分泌，在适当的浓度及治疗时间下，其疗效优于阳性药物（羧甲基纤维素钠滴眼液及卡波姆滴眼液）。精草润目液的药效机制尚需进一步研究。