关于规模化养猪场疫病的监测与检测问题

2017-02-01万遂如

养猪 2017年6期

关键词：养猪场猪群猪场

万遂如

（中国畜牧兽医学会动物传染病学分会，吉林长春 130122）

关于规模化养猪场疫病的监测与检测问题

万遂如

（中国畜牧兽医学会动物传染病学分会，吉林长春 130122）

规模化养猪场平时对猪群健康状况进行定期检查，对疫病进行监测与检测，全面收集疫病流行动态及生产中出现的问题，对猪群健康水平进行综合评估，对疫病发生的危险程度进行预测预警是检疫与疫病监测的主要任务，也是规模化养猪场防疫体系中的一项非常重要的技术措施。许多养猪场对猪场疫病监测与检测不够重视，是防疫体系中的一个薄弱环节。目前由于动物与动物产品国际贸易流动频繁，猪只新品种不断地引进，造成各种疾病相应增多。许多养猪场呈现老病新发，新病不断的出现；多种病原体混合感染与继发感染普遍存在；病原体变异加快，毒力增强，致病力增强，细菌耐药性日趋严重；免疫抑制威胁加剧，免疫失败时有发生；猪群（特别是种猪群）长期带毒，处于亚健康状态等。面对如此严峻的疫病防控形势，规模化养猪场，特别是种猪场一定要高度重视对猪场疫病进行监测与检测，把它作为防疫体系中的一项重要技术措施抓好抓实，并使之制度化与合理化。本文就规模化养猪场疫病的监测与检测问题谈点个人意见，仅供养猪场参考。

1 规模化猪场疫病监测与检测的目的

（1）规模化养猪场通过有计划的定期对猪群进行疫病监测，可系统科学地掌握猪场疫病发生与流行动态和危害程度，为制定和调整相应的疫病预防与防控措施提供有力的科学依据，做到疫病防控心中有数。

（2）养猪场通过对免疫猪群的抗体检测，以评估疫苗的免疫效果，检查免疫程序是否科学合理，为猪用疫苗的选择与使用以及进一步完善结合猪场生产实际的免疫程序提供可靠的实践证据，防止猪群免疫失败而诱发疾病。

（3）发生疫情时对疫病进行检测，以确诊猪群发病原因，可及时针对致病病原体采取相应的控制措施，以降低疫情发生造成的经济损失。

（4）通过对猪场疫病的监测，能及时发现养猪场相关疫病病原体的变异、新毒株与新血清型病原的出现，以便有针对性地及时调整养猪场疫病预防与控制策略，保障养猪生产的健康发展。

（5）养猪场引进新品种或进行疫病净化时，一定要严格检疫，对疫病进行监测与检测，防止引入病原，及时淘汰阳性猪只（带毒猪），建立健康的阴性猪群。

2 养猪场疫病监测与检测的主要内容

2.1 兽医临床监测与诊断

主要内容包括认真观察猪群的健康状况，重点注意猪只采食饮水、运动、休息及体温变化等，发病个体与群体的临床表现、流行特点、发病率、死亡率及治疗效果等。

2.2 病理学监测与诊断

主要内容包括病猪与病死猪的解剖，尸体外部及内部检查，观察大体病变；同时采取病变组织及分泌物等，进行病理组织样本的显微病理学观察。

2.3 病原学监测与诊断

主要内容包括采取临床病理样本做病原体检测，进行病原学的分离培养与鉴定，生化特性试验，动物试验，病原的分子流行病学监测，病原菌的耐药性监测等。

2.4 病原体血清型监测与诊断

主要内容包括猪群感染的病原体血清型诊断，猪群感染状况的血清型监测，猪群疫苗免疫效果的评价等。

3 养猪场疫病监测与检测技术的应用

养猪场在正常生产中一般每半年对猪群检测1次免疫抗体，每年监测1次病原。引进新品种猪只时要全面进行检疫，进行疫病净化时定期对猪群实时监测与检测，发生疫情时随即进行疫病检测与诊断。监测与检测之前要按照规定无菌采取血清、扁桃体、脾、肝、肺、肾、淋巴结、小肠、粪尿及其它分泌物等送相关部门进行监测与检测。组织样本冷冻，血清冷藏，妥善保存运输送检。常用的监测与检测技术如下。

3.1 血清学技术

血清学技术是监测与检测猪疫病的一项重要手段，它可利用已知的微生物抗原（病毒或细菌抗原、基因工程表达的重组特异性抗原蛋白）来检测发病猪群或个体体内存在的特异性抗体，或比较发病猪群或个体急性发病期和恢复期的特异性抗体水平有无升高，从而判定猪群或个体是否受到感染而做出诊断。利用血清学技术还能监测猪群的带毒情况，以及进行疫苗免疫效果的评价。也可应用特异性诊断血清或单克隆抗体，采用相应的血清学技术来检测病原微生物和对分离的病原体进行相应的鉴定。血清学技术还可区分野毒感染和疫苗免疫接种猪群或个体的抗体检测。目前在猪疫病监测与检测中使用较多的血清学技术主要有免疫酶技术（如ELISA、免疫组织化学染色法、JPMA等）、免疫荧光技术与胶体金试纸条等，其次是中和试验、凝集试验、沉淀试验、补体结合试验等。

3.2 分子生物学技术

分子生物学技术又称基因诊断，主要是针对不同病原微生物所具有的特异性核酸（基因）序列和结构进行测定，如聚合酶链式反应（PCR、PT-PCR、实时荧光定量-PCR等），主要用于检测病原体，做疫病的早期诊断和传染源的鉴定。核酸分子杂交技术（包括southren杂交、Norther杂交、原位杂交、斑点杂交等）可用于对疫病病原体作出快速准确诊断，并对病原体进行准确分类鉴定，检测出带菌、带毒隐性感染动物以及对动物产品进行卫生检测等。生物芯片技术（包括基因芯片、蛋白质芯片、组织芯片、细胞芯片）可用于鉴定靶序列、基因突变检测、基因表达监控、新基因发现、遗传制图等。

4 养猪场主要疫病的监测与检测

4.1 猪瘟（CSF）

养猪场按照免疫接种计划定期应用的猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒监测猪群免疫抗体水平，可科学地评估猪瘟疫苗免疫抗体水平和免疫效果，为合理制定和调整猪瘟疫苗免疫程序提供可靠依据。除外，中和过氧化物酶联试验和免疫荧光抗体病毒中和试验等也可用于猪瘟病毒抗体监测。冰冻切片直接荧光抗体试验、抗原捕获ELISA试验以及RT-PCR检测试剂盒等可用于检测猪瘟病毒抗原与野毒感染。应用C系兔化弱毒特异单抗和强毒特异单抗亲和层析提纯的强弱毒抗原进行ELISA试验，可以区分疫苗弱毒感染、野毒感染和混合感染所引起的抗体反应，这为控制和消灭猪瘟提供了新的手段。对种猪群进行猪瘟净化时需活体采取扁桃体，对冰冻切片作直接荧光抗体试验检测抗原，这是养猪场净化猪瘟最常用的一种监测方法，具有方法简便、快速、可靠的特点。养猪场定期采用抗原或抗体检测方法监测亚临床感染的猪群，对防控与消灭猪瘟具有重要意义。

4.2 猪口蹄疫（FMD）

发生疫情时，可采取新鲜的水疱皮、水疱液或其他组织样品，应用反向间接血凝试验、反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）试验、乳鼠中和试验、微量补体结合反应等进行病原检测，可用于猪口蹄疫诊断、检测和流行病学调查。其中反向间接血凝试验，除了检测口蹄疫病毒之外，还可鉴定口蹄疫病毒亚型与排除猪传染性水疱病。采取血清样品时，可应用正向间接血凝试验（IHA）、结构蛋白及非结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验或液相阻断酶联免疫吸附试验等进行抗体检测，检查疫苗的免疫效果。要求两次免疫后1个月监测猪群抗体水平与阳性率，每批疫苗监测一批猪，每个疫苗供应企业监测一批疫苗。猪口蹄疫病毒非结构蛋白抗体阻断ELISA试验，可用于猪口蹄疫病毒（FMDV）感染的检测、检疫，以及口蹄疫病毒灭活疫苗免疫与自然感染口蹄疫病毒的鉴别诊断。目前养猪场常用的猪口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC-ELISA抗体检测试剂盒，就可区别猪群中口蹄疫野毒感染和疫苗免疫的猪只。一般猪群中出现符合口蹄疫典型临床症状特征，经病毒抗原检测为阳性者；怀疑发病猪群，非结构蛋白抗体呈阳性者；未免疫猪群，病毒抗体呈阳性者，都可诊断为口蹄疫疫情。

4.3 猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）

用于PRRS检测与鉴定的方法有：间接免疫荧光抗体技术、免疫过氧化物酶试验、RT-PCR技术、电镜技术及基因芯片技术等。这些技术均可直接检测病猪肺脏、腹水、血液、精液、粪便及细胞培养物中的病毒抗原。方法快速，特异性高。检测血清中的PRRSV抗体，有PRRSV抗体（间接ELISA）检测试剂盒、免疫过氧化物酶单层试验（IPMA）、间接免疫荧光抗体试验（IFA）和血清中和试验等。这些方法的敏感性和特异性都很好，临床上使用较多。但是抗体监测不能区分疫苗免疫猪与野毒感染猪、不能区分不同毒株的感染和多毒株的共感染，抗体水平和阳性率也不能代表PRRSV疫苗的免疫效果。猪群PRRSV的血清型监测，阴性猪场每半年或每季度监测1次；阳性猪场要监测猪群抗体，以分析评估猪群中的感染状况。目前用单克隆抗体技术检测PRRSV抗原，可鉴定不同来源毒株的抗原表位、病毒分型以及区分野毒株和疫苗毒株感染。用扩增PRRSV基因的RT-PCR方法监测可区分美洲型和欧洲型毒株，此法已在兽医临床上被广泛应用。

4.4 猪伪狂犬病（PR）

乳胶凝集试验（LAT），如gG-LAT方法可检测PRV抗原，区分gG基因缺失疫苗免疫猪和野毒感染猪血清抗体，可用于PR的鉴别诊断、疫病监测、流行病学调查与种猪群检测净化。此方法具有操作简便、快速、敏感性高、特异性强、不需要仪器设备、易于推广应用的特点。聚合酶链式反应（PCR）检测试剂盒，既可用于检测活体扁桃体细胞、实质组织、潜伏感染猪只的伪狂犬病病毒，又可根据gD、gE、gG基因序列设计两对引物，进行DNA扩增，可区分疫苗毒与田间强弱毒株。酶联免疫吸附试验（ELISA）可用于检测抗原，又可以检测抗体，具有快速、简便、特异性强、敏感性高的特点。gE抗体的胶体金试纸条（gE-GICA）可用于PRV野毒感染的快速筛查，适用于PR的临床诊断，具有简便、快速、敏感、特异的优点。目前在兽医临床上与种猪群净化时，常用的监测方法是：检测PR抗体与血清学调查多用猪伪狂犬病乳胶凝集试验抗体检测试剂盒和猪伪狂犬病病毒ELISA检测试验盒等。种猪群净化时，检测伪狂犬病野毒抗体使用gE-ELISA试剂盒；免疫抗体检测使用gB-ELISA试剂盒与灭活全病毒为抗原的ELISA试剂盒，必要时配合使用中和试验等。监测重点是区分野毒感染猪与疫苗免疫猪。阴性猪场的种猪群要每半年监测1次；阳性猪场种猪群应每季度监测1次，要特别重视后备种猪的监测。

4.5 猪圆环病毒2型感染（PCV2）

目前我国养猪场圆环病毒2型感染率在98%以上，阴性猪场很少，在普遍感染的情况下，对病原学进行监测其意义不大。对PCV2的抗体监测和血清学调查可用猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒与猪圆环病毒2型胶体金抗体检测试剂盒进行。虽然PCV2抗体监测不能区分疫苗免疫猪与野毒感染猪，不能评价疫苗免疫效果，但可以反映猪场的感染状况，可用于评价疫苗免疫状况。

4.6 猪乙型脑炎（JE）

检测猪乙型脑炎病毒抗原的方法有荧光抗体技术、免疫细胞化学法和反向被动血凝试验等。逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）是病原学早期诊断最有效的诊断方法，具有敏感、特异、操作简单、易自动化的特点。目前兽医临床上使用较多的猪乙型脑炎乳胶凝集试验抗体检测试剂盒和猪乙型脑炎病毒ELISA抗体检测试剂盒可用于猪乙型脑炎检测抗体和血清学调查，具有特异、敏感、微量、快速、简易的特点。

4.7 猪病毒性腹泻疾病

用免疫荧光抗体技术作荧光抗体染色检查，可检测腹泻病毒抗原，并区分传染性胃肠炎病毒（TGEV）、流行性腹泻病毒（PEDV）与轮状病毒（PoRV）3种病毒。ELISA方法在兽医临床上使用既可测定抗原，又可测定抗体，具有很高的敏感性和特异性，可用于腹泻病毒的检测（直接从粪便中检测病毒抗原）。用PCR和RT-PCR方法检测腹泻性病毒，并能鉴别诊断TGEV、PEDV与PoRV 3种病毒，为鉴别病毒性腹泻病原的混合感染提供了技术支持。近年来建立的腹泻性病毒胶体金抗体检测试纸条法又可用于抗体水平的检测，方便、快速、安全、便于操作，是一种环保型的检测方法。

4.8 猪的细菌性疾病

猪场细菌性疾病的监测除了必要的病原学监测与耐药性监测之外，重点是对病原进行血清型鉴定，区别野毒感染猪和疫苗免疫猪，以便为猪场选用相应的疫苗免疫接种和使用最敏感的药物防治疫病提供科学的实践依据。目前临床上用PCR技术检测病原，用ELISA技术检测抗体，其敏感性与特异性尚佳。

4.8.1 猪传染性胸膜肺炎（APP）间接血凝试验（IHA），可用于APP早期诊断、检测与分型，具有操作简便、敏感性强、特异性高的特点。聚合酶链反应（PCR），可用于APP的早期诊断和快速鉴定细菌血清型，其敏感性和特异性都很高。猪传染性胸膜肺炎APXIV-ELISA抗体检测试剂盒和猪传染性胸膜肺炎APXIV胶体金抗体检测试剂盒等可用于APP检测，并能区分野毒感染和疫苗免疫猪，目前在兽医临床上已广为应用。

4.8.2 猪链球菌病（SS）协同凝集试验可用于链球菌血清定性，PCR方法可用于诊断及检测链球菌特异性基因，其敏感性与特异性都很高。猪链球菌2型ELISA抗体检测试剂盒，可用于检测抗体和血清学调查，目前兽医临床上使用较多。

5 养猪场疫病监测注意的问题

5.1 养猪场要提高对猪疫病进行监测的重要性认识

随着生态养猪生产的发展，在规模化猪场疫病防控中，兽医实验室监测与检测技术的地位与作用越来越显得突出与重要。应用当代先进的检测技术与方法，开展疫病的监测与检测工作，以评估各种病原体、毒素和生理生化等指标，系统全面诊断和评估猪群的健康状况与生产性能，为疫病诊断、评估和疫病防控提供可靠、精准和科学的依据，用于指导生态养猪生产和疫病防控工作，这对发展生态健康养猪和科学的防控疫病、提高猪场的生产效益与经济效益都具有重要的实际意义。为此，养猪场一定要高度重视猪场的疫病监测工作，并使之制度化、合理化、常态化。

5.2 大型规模化养猪场应创造条件建立自己的实验室

一般养猪场受经费、人员与条件的限制，其猪场的疫病监测工作只能依赖于国家兽医行政部门、相关的农业院校、科研院所以及大型动保企业的兽医诊断室与兽医实验室来完成。大型规模化养猪场有条件建立自己的疫病诊断与监测实验室，只要大力培养技术人才，购制相应的现代仪器与设备，购买商品化的、特异、准确的检测试剂与试剂盒，就可对病原学与血清学开展监测工作。这样既方便养猪生产，又可节约费用，提高养殖业的竞争力，从长远来看这是大型养殖企业创新发展的必由之路。

5.3 制定疫病监测与检测方案一定要结合养猪场的生产实际

养猪场制定疫病监测与检测方案时一定要很好地结合猪场生产实际、疫病流行状况、临床检查结果、饲养管理水平、人员素质、实验室条件以及养猪环境污染等综合考虑，合理制定。这样的监测与检测方案才具有科学性与实用性，其获得的结果和数据才有可能符合养猪场的生产实际，再经过合理分析、科学评估后，对疫病预防与防控、对养猪生产才能真正起到指导作用。

5.4 注意检测样品的采集、保存与送检

采取检测样品要一律严格遵守无菌操作，各种用具、器械、注射用器、容器及操作人员必须进行严格消毒，按操作规程进行采取。血清样品于4℃冷藏保存，24小时送达实验室。组织与器官等病料-20℃冻存，不要反复冻融，尽快送达实验室。送检样品装好后要编号、标明猪号、样品名称、免疫情况、采取的地点、时间等。运送实验室一律按冷链要求实施。

5.5 严格实验室技术操作规范

每一项检测技术实施时都要按照实验室技术操作规范进行，做到认真操作、细心观察、及时记录试验结果，数据要准确无误。因为检测技术操作的规范性直接会影响到检测结果的准确性与可靠性。

5.6 注意疫病检测中的生物安全

实验室检测前后都要进行严格的消毒，保证无污染源。技术人员操作时要做好自身防护，如戴口罩、手套、穿工作鞋和工作服，试验前后均要洗手消毒，防止感染与传播人畜共患病。检测结束后，多余的检测样品、废弃物及污染物等一律集中统一消毒处理，防止二次污染猪场环境。

随着动物疫病防控进入净化时代，养猪场的疫病通过监测、检验检疫、隔离、扑杀、建立阳性健康猪群，强化生物安全等综合措施，在猪场消灭或消除病原，达到猪群不发病和无感染状态，实现养猪场的疫病有效净化。目前我国已发布了《国家中长期动物疫病防治规划（2012—2020年）》，其中提出了优先防治禽流感等16种国内动物疫病，逐步实现种畜禽场8种主要疫病的净化。我国对动物疫病净化技术水平有了巨大的提升，对猪瘟、猪伪狂犬病、猪口蹄疫等疫病已经具备了净化的条件。因此，规模化猪场，特别是种猪场一定要把猪场疫病的监测与检测、检疫工作融入到养猪场疫病净化系统工程之中，实施猪场的疫病净化，这是防控猪场流行病的方向。

中年感染炎症或致老年痴呆

【法新社美国迈阿密11月1日电】研究人员今天说，中年感染过炎症的人日后更有可能出现大脑萎缩—可能是痴呆或阿尔茨海默病的前兆。

这份发表在《神经学》周刊上的研究报告是揭开痴呆与炎症之间关联的最新成果。

不过，研究结果未能证明二者之间的因果关系。

研究报告作者、约翰斯·霍普金斯大学医学院的基南·沃克说：“这些结果表明中年感染炎症可能是大脑变化的一个早期诱因，与阿尔茨海默病及其他痴呆症相关。”

他说：“因为导致脑细胞损失的进程早在症状出现前几十年就已开始，所以非常重要的是，我们必须弄清中年发生的这些进程多年后是如何致病的。”

研究人员对平均年龄为53岁的1 633人进行了研究。研究人员化验了他们血液中五项炎症标志物的含量，包括白血球的数量。

平均24年后，参与研究的对象进行了记忆测试，并接受了大脑扫描检查。

报告称，中年时期三项以上炎症标志物水平较高的人，其大脑中与阿尔茨海默病相关的海马体及其他区域的脑容量平均降低了5%。

炎症标志物含量高的人在记忆测试中也表现略差，平均只记住了要求记忆的10个单词中的5个，而非炎症组的人为5.5个。

未参与研究的专家称这项研究规模庞大，方法严谨。但是，他们强调研究并未涉及患者是否最终得了阿尔茨海默病，只是说有些人表现出大脑萎缩和记忆丧失的症状。

英国阿尔茨海默病研究所研究部主任卡萝尔·劳特利奇说：“研究显示，炎症可能是日后大脑退化的早期指标，但我们无法断定炎症是否会导致大脑萎缩，抑或只是对其他可能已经发生的有害进程的一种反应。”