SALL4、OCT4、C-kit在精原细胞瘤中的表达观察*

何 珏，邓 晓，张文书，王珍玲

(赣南医学院病理学教研室，江西 赣州 341000)

SALL4、OCT4、C-kit在精原细胞瘤中的表达观察*

何 珏，邓 晓，张文书，王珍玲

(赣南医学院病理学教研室，江西 赣州 341000)

目的：观察SALL4、OCT4、C-kit在精原细胞瘤中的表达，探讨其在该瘤病理诊断中的意义。方法：选取68例精原细胞瘤和20例病理形态相似的非精原细胞性肿瘤的术后标本，应用常规病理学技术及免疫组化Polink-2HRP染色系统检测SALL4、OCT4、C-kit的表达，并观察分析其与临床病理形态特征的关系。结果： SALL4、OCT4、C-kit在68例精原细胞瘤中的表达率分别为100%(68/68)、91.2%(62/68)、95.5%(65/68)；在20例非精原细胞性肿瘤中的表达率分别为35%(7/20)、20%(4/20)、25%(5/20)；SALL4、OCT4、C-kit在精原细胞瘤中的表达明显高于非精原细胞性肿瘤(P<0.05)，差异有统计学意义。结论：SALL4在精原细胞瘤中的表达具有较高的敏感性，协同OCT4、C-kit使用，对其病理诊断具有重要价值。

精原细胞瘤；SALL4；OCT4；C-kit；免疫组织化学

精原细胞瘤(Seminoma，SM)是来源于男性胚胎性腺原始生殖细胞的一类最常见的恶性肿瘤，占所有生殖细胞肿瘤的27%～56%，约90%发生于睾丸，在中线部位生殖神经嵴附近如纵膈、腹膜后、颅内松果体亦有一定的发病[1]；其形态学与其它圆细胞恶性肿瘤有一定的重叠，病理诊断有一定难度。SM对化疗和放射治疗均具有很高的敏感性，准确诊断，合理及时的治疗可明显提高其生存时间和生活质量[2]。SALL4是近年发现的一种来源于生殖干细胞的肿瘤基因[3]，OCT4是具有较强特异性的胚胎干细胞标志物，原癌基因 C-kit(CD117) 是造血干细胞的标志物，三者协同使用，对SM的病理诊断有很好的帮助。笔者选取2009年1月～2013年12月赣南医院第一附属医院经手术切除的SM共计68例为研究组，选取形态相似的非精原细胞性肿瘤(Non Seminoma,NSM)包括弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、胸腺瘤、黑色素瘤、低分化神经内分泌癌(NEC)、原始神经外胚层肿瘤(PNET)共20例为对照组，进行回顾性研究；通过免疫组织化学(IHC)方法检测SALL4、OCT4、C-kit在SM中的表达，探讨其在病理诊断中的作用和意义，并结合临床资料加以分析、总结，以期提高对SM的认识和诊治水平。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2009年1月～2013年12月赣南医学院第一附属医院经外科手术切除、资料完整的SM患者68例，年龄19～65岁，中位年龄43.5岁；其中发生在睾丸55例，纵膈7例，腹膜后5例，骶尾部1例；临床分期ⅠA期47例，ⅠB期间11例；ⅡA期6 例，ⅡB期2例；ⅢA期2 例；所选病例中，经典型SM 59例，间变型SM(ASM)6例，精母细胞型SM(SSM)3例。SM病理诊断依据Magi-Galluzzi C等《泌尿生殖病理学》结合WHO泌尿生殖系统肿瘤分类标准[4]；选取同期发生在男性患者睾丸、纵膈、腹膜后等部位形态相似的圆细胞恶性肿瘤，包括DLBCL 8例、胸腺瘤5例、黑色素瘤2例、NEC 3例、PNET 2例，共计20例进行分组对照研究，对照组年龄26～72岁，中位年龄51岁。全部病例的选取均符合伦理道德规范，并经研究对象知情同意。

1.2 病理学研究方法

1.2.1 SM临床分期及IHC依据 68例SM临床分期依据AJCC和UICC标准[5]；IHC方案参考国际泌尿病理学会(ISUP)推荐方案，结合临床实践制订[6]。

1.2.2 研究方法 68例SM及20例NSM均常规规范取材，4%中性甲醛固定，系列乙醇脱水，石蜡包埋，4 μm切片，苏木素-伊红(H&E)染色，采用二步法增强型辣根酶聚合物(Polink-2HRP)非生物素染色系统对全部研究肿瘤组织进行IHC标记，以 PBS 代替一抗为阴性对照，阳性对照为罗氏商供；标记抗体为：SALL4、OCT4、C-kit及相关肿瘤组合抗体。

1.2.3 IHC评价 由2名以上高年资病理医生采用双盲法，依据国际标准化评价[7],经光学显微镜观察共同完成；SALL4和OCT4为核阳性，C-kit(CD117)为膜阳性；以染色强度和染色范围进行综合评分；随机选取10个视野，计数200个细胞，以10%～25%为(+)，25%～50%为(++)，>50%(+++)。以棕黄色为(+)，淡黄为弱(+)，不着色为(-)。

1.3 统计学方法 使用统计软件SPSS 20.0进行统计分析，采用χ2检验，P<0.05认为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 病理特征 68例SM最大直径18.5 cm，最小直径1.5 cm;肿瘤切面灰白灰黄色，质地实，部分有出血及坏死，11例有不完整包膜；肿瘤细胞大小较一致，呈圆形或多边形弥漫分布；部分细胞的胞膜较为清楚，胞质呈透明或淡染状；胞核居中，呈椭圆形或圆形，染色质颗粒略粗，多均匀分布，肿瘤细胞可见明显核仁；部分肿瘤细胞呈巢状分布，巢间存在少量的间质，含有较多淋巴细胞浸润，富于血管(见图1)。对照组NSM与研究组SM光镜下形态具有一定的相似性，鉴别诊断有一定难度。

2.2 ICH表达 研究组68例中，SALL4阳性68例(100%),定位于胞核(见图2)；OCT4阳性62例(91.2%)，定位于胞核(见图3)；C-kit阳性65例(95.5%)，定位于胞质和胞膜(见图4)；SALL4+C-kit及SALL4+OCT4阳性均为68例(100%)。其中经典型SM表达阳性率最高，MSM表达较弱。对照组20例NSM中，SALL4阳性7例(35%)，OCT4阳性(20%)，C-kit阳性5例(25%)， 2种抗体共同表达3例(15%)；其中DLBCL表达相对较好，其它如低分化NET、PNET、胸腺瘤、恶性黑色素瘤其表达更低(见表1)。经对照分析，SALL4的IHC表达与OCT4、C-kit有一定的协同性，与肿瘤类型有明确的相关性。经两两对照分析，SALL4、OCT4、C-kit协同作用在研究组和对照组织中的表达有统计学意义(P<0.05)。

图1 精原细胞，瘤瘤细胞呈圆形、多边形巢状分布，胞质淡染，核居中，见明显核仁；间质见淋巴细胞浸润(H&E，×200)。

图2 SALL4在SM中的表达，核阳性(Polink-2HRP，×200)

图3 OCT4在SM中的表达，核阳性(Polink-2HRP，×200)

图4 C-kit在SM中的表达，膜阳性(Polink-2HRP，×200)

表1 SALL4、OCT4及C-kit在精原细胞瘤和非精原细胞瘤中的表达/n(%)

Tab 1 Expression of SALL4, OCT4, C-kit in Seminoma and Nonseminoma

组别肿瘤类型例数SALL4OCT4C⁃kitSM59595859研究组ASM6634SSM3312合计6868(100)62(91．2)65(95．5)DLBCL8532Thymoma51-1对照组NEC3-1-PNET21-1Melanoma2--1合计207(35)4(20)5(25)

注：SM：精原细胞瘤，ASM：间变型精原细胞瘤，SSM：精母细胞瘤，DLBCL：弥漫性大B细胞性淋巴瘤，Thymoma：胸腺瘤，NEC：神经内分泌癌，PNET：原始神经外胚层肿瘤，Melanoma：黑色素瘤。

3 讨 论

SM是男性最常见的生殖细胞肿瘤，占所有生殖细胞肿瘤的27%～56%，多发生在35～45岁的青中年男性，中位年龄40岁[8]。早期临床症状不明显，影像学检查常常有占位性病灶， 但确诊主要依靠病理形态及IHC标记。治疗以手术切除为主，配合放疗及化疗。预后与年龄、 肿瘤周围侵犯及有无远处转移等相关。Ⅰ期SM预后良好，对化疗有很高的敏感性，手术加化疗即可能完全治愈，为避免长期放射治疗因辐射而引起第二肿瘤的风险，故准确诊断SM并分期对临床治疗具有十分重要的意义[9]。

典型的SM外观呈结节状，有分叶，大小不等，切面灰白色，质软，较均匀；部分肿瘤伴有坏死；质地均匀，可有不完整包膜；光镜下，肿瘤细胞呈圆形、多边形，边界较清，胞质透亮，可见明显的核仁；肿瘤被纤细的纤维组织分隔成条索状、梁状、巢片状、管状、筛状结构。在HE染色光学显微镜下，SM形态特征与其它圆细胞肿瘤有一定的重叠，准确的临床病理诊断难度较大，容易发生误诊。常需要IHC抗体标记以辅助诊断和鉴别诊断；传统IHC抗体主要以PLAP、CK、EMA、CD117等为主，其特异性和敏感性均受客观因素影响，在临床使用中效果不够理想；新发现的抗体单一使用,亦容易发生偏差，产生误诊和漏诊;为更好的解决临床病理诊断中的疑难问题和困惑，课题组参考国际泌尿病理学会(ISUP)推荐方案，结合临床实践，选取SALL4、OCT4、C-kit的组合抗体，制订IHC方案付诸临床及研究。

SALL4是果蝇婆罗双树基因(Drosophila spalt)的同源基因, 属于C2H2型锌指转录因子，定位于细胞核内,是近来肿瘤病理诊断和治疗研究中的热点，负责调节胚胎干细胞的多向发育潜能和自我更新,是许多肿瘤演进中的关键基因，在生殖细胞肿瘤中呈现高度敏感性和特异性,被证实是一种实用性很高的诊断型标志物[10]。同样有研究证实SALL4在肝癌、胆管癌、肾母细胞瘤、胃癌、肺癌、淋巴瘤、乳腺癌、子宫内膜癌等恶性肿瘤的上皮成分中均有不同程度的阳性表达，有望成为新的癌细胞靶向基因[11]。干细胞转录因子OCT4在维持干细胞多功能性和自我更新中起着重要的作用，有研究证实其与SALL4具有很好的协同作用[12]；在临床SM的基因诊断中 ,OCT4可以逐步取代 PLAP 的地位[13]。原癌基因C-kit是造血干细胞的标志物，其表达异常可刺激肿瘤细胞的持续增殖和抗凋亡信号的失控， 有利于肿瘤的恶性增殖；是诊断SM的经典IHC抗体之一,但许多肿瘤中均有不同程度的表达[14-15]。

本研究通过IHC的方法，联合检测SALL4、OCT4、C-kit 在SM及NSM中的表达，弥补了单一抗体在特异性和敏感性方面的不足,结果显示研究组68例SM中，SALL4阳性100%,OCT4阳性92.6%，C-kit阳性95.5%；SALL4+C-kit及SALL4+OCT4阳性均为100%；其中经典型SM表达阳性率最高，精母细胞型SM表达不足。对照组20例NSM中，SALL4阳性35%，OCT4阳性20%，C-kit阳性25%， 2种抗体共同表达15%；其中DLBCL表达相对较好，其它如低分化NET、PNET、胸腺瘤、恶性黑色素瘤其表达更低；证实SM中这三种基因的表达明显高于NSM组织 (P<0.05)，并且SALL4、OCT4、C-kit三者与SM的发生相关，其间可能存在着协同关系；经对照分析，SALL4、OCT4、C-kit的表达与肿瘤类型有明确的相关性；但是,由于研究群体的样本较小，尚有许多缺陷存在，相信随着研究的深入，应该会有更多的发现。

SM是一种多基因共同作用的恶性肿瘤，其形态学与多种圆细胞恶性肿瘤有重叠，临床IHC中选择的抗体由于其特异性、敏感性的问题，均有不同程度的缺陷，在病理诊断中若选用单一抗体有可能导致误判。SALL4在多种肿瘤中都有表达，在生殖细胞肿瘤中具有很高的敏感性，而其特异性有一定的局限性，本研究采用SALL4、OCT4、C-kit协同方案，可对SM做出准确的病理诊断；其研究方案具有一定的创新性思路，有其内在的实用价值。

总之，病理医师对于SM的诊疗起着重要的作用，使用IHC的方法，合理选用SALL4、OCT3/4、C-kit的抗体组合，协同使用，通过准确的病理诊断，正确的肿瘤分类，提供恰当的病理分期以及预后参数，可以为临床积极治疗和监测予以有效的支持，尽早发现并综合治疗以提高患者生存质量和生存率。

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Expression of SALL4, OCT4 and C-kit in the Seminoma

HEJue,DENGXiao,ZHANGWen-shu,WANGZhen-ling

(Dept.ofPathology,GannanMedicalUniversity,Ganzhou,Jiangx341000)

Objective: To observe the expression of SALL4, OCT4 and C-kit in the seminoma, and to explore its significance in the diagnosis of the tumor. Methods: Postoperative samples of 68 seminoma and 20 non-seminoma with similar Pathologic morphology were selected. The expression of SALL4, OCT4 and C-kit were detected by routine pathological technique and immunohistochemical Polink-2HRP staining system. To observe and analyze the relationship between the clinical features and pathological characteristics. The relationship between the expressions and the clinical pathological morphological features was observed and analyzed. Results: The expression rates of SALL4, OCT4 and C-kit in 68 cases seminomas were 100% (68/68), 91.2% (62/68) and 95.5% (65/68), respectively. the expression rates in 20 cases of non-seminomas were 35% (7/20), 20% (4/20), 25% (5/20), respectively; The expression of SALL4, OCT4 and C-kit in the seminomas was significantly higher than that in the non-seminomas. The difference was statistically significant (P<0.05).Conclusion: The expression of SALL4 in the seminoma is highly sensitive. It is of great value in the pathological diagnosis if it is used with OCT4 and C-kit.

seminoma; SALL4;OCT4;C-kit;immunohistochemistry

江西省教育厅科学技术研究项目(GJJ14690)

R737

A

1001-5779(2016)06-0876-04

10.3969/j.issn.1001-5779.2016.06.011

2016-08-18)(责任编辑：刘仰斌)