枸杞多糖保护小鼠GC-1spg精原细胞氧化损伤的研究

徐杨超 赖青 许春 黄磊 吴剑 陈剑英

【摘 要】：目的观察枸杞多糖对活性氧引起的小鼠GC-1spg精原细胞氧化损伤的保护作用。方法利用体外培养的小鼠GC-1spg精原细胞建立氧化应激模型，通过采用MTS比色法测定小鼠GC-1spg精原细胞活力，评价枸杞多糖对小鼠GC-1spg精原细胞氧化损伤的保护作用。结果次黄嘌呤/黄嘌呤活性氧化可导致精原细胞活性降低，而添加枸杞多糖可以降低次黄嘌呤/黄嘌呤活对小鼠GC-1spg精原细胞的生长抑制率。结论枸杞多糖可通过抗氧化作用保护活性氧引起的小鼠GC-1spg精原细胞氧化损伤。

【关键词】：枸杞多糖;小鼠GC-1spg精原细胞;次黄嘌呤/黄嘌呤;氧化损伤

枸杞多糖（Lycium Barbarum PoIysaccharides，LBP）是枸杞子的主要功能成分之一，对生殖系统具有多种药理作用和生物活性功能[1]。国内有研究通过枸杞多糖对生殖系统损伤大鼠的抗氧化作用及对性激素水平的影响[2]，通过在对睾丸组织超微结构观察证实，枸杞多糖能明显减轻大鼠睾丸组织的损伤程度，而目前枸杞多糖（LBP）对小鼠精原细胞氧化损伤的保护机制目前并未见报道。本实验拟利用小鼠GC-1spg精原细胞为研究对象，采用次黄嘌呤/黄嘌呤氧化损伤模型，研究枸杞多糖（LBP）对小鼠GC-1 spg精原细胞有无氧化损伤的保护作用，为男性生殖健康保护和天然生物活性物质的利用提供理论依据[3-4] 。

1材料与方法

1.1GC-1 spg精原细胞培养  小鼠GC-1spg精原细胞为上海通派生物科技公司提供，合格证编号HDC-20180562541。培养液为高糖DMEM培养液（Sigma），其中添加Hepes 1.75mmoL·mL-1、谷氨酰胺2mmoL·mL-1、青霉素100U·mL-1、链霉素100 mg·mL-1、胰岛素10mg·mL-1、转铁蛋白5mg·mL-1和亚硒酸钠3×10-8 moL·mL-1作为完全培养液。

1.2分组及药物处理  将小鼠GC-1spg精原细胞按随机数字法分为4组：对照组、次黄嘌呤/黄嘌呤氧化组（hypoxanthine/xanthine oxidase，HX/XO组，次黄嘌呤10μmoL·L-1，黄嘌呤2.5U·L-1）、枸杞多糖组（LBP組，枸杞多糖10mg·mL-1）、枸杞多糖和次黄嘌呤/黄嘌呤氧化组（HX/XO+LBP组，枸杞多糖10 mg·mL-1，次黄嘌呤10μmoL·L-1，黄嘌呤2.5U·L-1）。细胞培养于37℃的培养箱。每次处理组4孔，实验重复3次。

1.3精原细胞活性测试  本实验采用四氮唑蓝盐（MTS）比色法测定精原细胞活力。细胞培养24h后，加入MTS 20ul，继续培养4h。用酶标仪测570nm下的吸收度值，并计算细胞存活率。

1.4统计学方法  采用SPSS 11.5统计软件对数据进行分析。计量资料用表示，组间差异比较用检验。

2 结果

2.1   LBP和HX/XO对小鼠GC-1 spg精原细胞存活的影响

通过MTS比色法检测小鼠GC-1spg精原细胞活力发现：小鼠GC-1spg精原细胞培养24h后，与对照组相比，HX/XO氧化组小鼠GC-1spg精原细胞活力明显降低，枸杞多糖组及枸杞多糖和HX/XO氧化组小鼠GC-1spg精原细胞活力明显升高（均P〈0.05）见图1。

2.2LBP和HX/XO对小鼠GC-1spg精原细胞生长抑制率的影响

通过采用MTS比色法检测小鼠GC-1spg精原细胞生长抑制率发现枸杞多糖对小鼠GC-1spg精原细胞氧化损伤有一定保护作用，实验结果详见表1。

3 讨论

哺乳动物精原细胞待遇细胞内外的氧化状态高度敏感，极易受到内外的氧化损伤。本实验结果显示，枸杞多糖能够显著改善HX/XO对小鼠GC-1spg精原细胞的活力影响，并且枸杞多糖可以降低HX/XO氧化小鼠GC-1spg精原细胞生长抑制率，表明枸杞多糖对HX/XO呤所致小鼠GC-1spg精原细胞的氧化损伤有很好的防护作用，有一定的临床意义。

参考文献

邹惟莹， 夏丽萍， 杨树龙， 等.槲皮素对小鼠精原细胞氧化应激的保护作用[J].南昌大学学报（医学版），2014，（12）：1-3，8.

南亚昀， 雍学芳， 王礼星， 等.枸杞多糖药理学研究进展[J].天津中医药，2014，（12）：763-765.

黄庚娣， 贺芳， 韩魁， 等.枸杞多糖对紫外线照射的RAW264.7细胞保护作用的分析[J].中国病理生理杂志，2015，（10）：1837-1837.

张大雷， 杨蓓， 吴磊， 等.人参皂苷保护小鼠精原细胞氧化损伤的研究[J].中国药理学通报，2010，（8）：1014-1016.