肉羊棘球蚴病检测技术

卓 玛

（青海省海南州同德县河北乡兽医站，青海同德 813299）

肉羊棘球蚴病检测技术

卓 玛

（青海省海南州同德县河北乡兽医站，青海同德 813299）

文章以“肉羊棘球蚴病检测配套技术”为主要研究对象，展开深入、细致的研究和分析，希望能为进一步了解检测技术，为后续做好疾病的综合防治提供一定的依据和参考。

肉羊 棘球蚴病检测 配套技术 应用

1 引言

要想真正做好棘球蚴病防治，就需要精准的检测。为此，我们一定要在立足当地实际条件的基础上，尽快建立并不断完善关于棘球蚴病中间宿主和终末宿主的检测体系，为后续的治疗防治奠定坚实的基础。

2 关于肉羊棘球蚴病检测配套技术应用的研究与分析

2.1 包虫概述

包虫是一种寄生虫，危害极为严重，其主要来源就是动物的排泄物，呈现世界性范围分布，尤其是畜牧业相对发达的地区和国家更是常见。在我国，棘球蚴病的高发流行区主要是在一些气候寒冷、干旱少雨的牧区等，其中青海就是高发地区之一。由此可见，关于“家畜棘球蚴(包虫)病流行情况调查”的研究与分析显得尤为重要。

2.2 肉羊棘球蚴病检测配套技术应用分析

关于肉羊棘球蚴病检测的配套技术，目前常用的就是犬粪包虫抗原酶联免疫吸附法联合检测的配套技术。特异性强、敏感度高，而且检测也相对迅速，结果准确，适用于大批量样品的检测，对于疾病的净化具有极为重要的作用和积极意义。

首先就是做好的前期的准备，主要是完成血样的采集和血清的制备以及全粪便的采集等工作。采血要注意剂量不能低于5毫升，全程都要在无菌化条件下进行操作，制备血清要在室温条件下进行，经过离心处理之后，将收集到的血清转移到无菌的小离心管中，避免溶血现象。至于采集到的犬粪便，需要放置在4摄氏度条件下保存，是冷藏状态，并非冻结状态。

其次就是肉羊血清抗体的检测

在检测之前，要控制好实验室的温度，检测的试剂在使用之前一定要做好均匀混合，没有任何沉淀，检测中用到的仪器主要有移液器，移液枪头以及量筒、振荡器等，需要科学操作，配置好洗涤液。

在操作方面，首先就是要进行家养，将96孔的预包被板去除，进行阳性对照孔的设置，对照孔需要两个，每个对照孔进行阳性对照添加10ul，设置三个阴性对照孔，每个对照孔进行阴性对照添加10ul；设置一个空白的对照孔，不要进行任何样品的添加；剩余的每个孔按照顺序进行待检测血清的添加，剂量都是10ul，做好记录，进行标记。

然后就是加中和抗原，除了空白之外，其余各孔都要进行添加，添加的是50ul的包虫囊液中和抗原，必须垂直添加，在轻轻晃动20秒钟以后，保证均匀混合。

第三步就是孵育，在恒温箱中进行，时间为1个小时。

之后经过洗板、加酶、孵育以及重复洗板、显色和中止等操作之后，进行检测，检测的时候，以空白的孔调零，在450NM的滤光片下测量样品和对照品的吸光度，从而做出判定。

再次关于犬粪的抗原检测

犬粪进行低温冷冻处理之后，取出1克的分班，加入1毫升的粪便处理液，搅拌均匀，待静置十分钟以后，进行离心处理，将上清液取出，进行检验。

在试剂的准备方面，等到回温室温后，用前保证进行均匀混合，没有沉淀后，用10倍的浓缩洗涤液用去离子水按照1:9的比例进行稀释，一般要多配制200毫升以上。

将96孔的预包被板取出，设置阳性对照孔、阴性对照孔和空白对赵红，分别进行样品稀释液的添加，添加剂量为100ul。剩余的检测孔在添加样品稀释液50ul之后，再行添加50ul犬粪上清液，记录好位置，做出标记；然后在37摄氏度的温度条件下进行半个小时的避光反应，将孔内的液体甩去。选用已经进行稀释的洗涤液，按照每个检测孔350ul的剂量进行添加，进行4次洗涤之后，扣板拍干。

接下来，除了空白的检测孔之外，每孔进行100ul的添加酶结合物添加，在37摄氏度条件下进行半个小时的孵育，将孔内液体甩去，扣板拍干。再次进行洗涤之后，进行底物溶液和显色剂的添加，再一次添加终止液，将反应终止，进行结果的判定。在650NM的滤光片下进行吸光度A值测量。

预包被板上的阴性对照孔如果没有颜色或者是浅黄色的话，阳性对照孔呈现黄色的话，就说明实验结果是成立的，是有效的。

3 综合评定与分析

对于肉羊血清包虫抗体的检测，抑制率不足45%的样品，判定为银杏，而且没有感染；关于犬粪便的抗原检测，样本的A值＜阈值的样品，判定为阴性，没有感染的；实验结果判定为阳性的肉羊血清样品和犬粪便样品需要使用相同的试剂进行重复性实验，以此保证结果的准确性。

肉羊棘球蚴病检测技术的快速发展、成熟，使棘球蚴病得到了有效的控制。但犬类动物作为棘球蚴病终末宿主，其对环境的污染造成的棘球蚴病的复发也具有相当大的风险。经过大量检测应用，现已证实包虫抗体检测技术与犬粪抗原检测技术在棘球蚴病检测工作中配套使用，不仅能够准确评估棘球蚴病流行状况的消长规律，也可将每一只染病的肉羊和与肉羊密切接触的犬精准检出。因此，棘球蚴病检测配套技术的应用对于当前防控肉羊棘球蚴病具有重要意义。

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