中西医对阿霉素肾病模型的研究进展

2017-01-15徐静李霄王斌匡海学王秋红

中医药信息 2017年3期

关键词：阿霉素蛋白尿肾小球

徐静，李霄，王斌，匡海学，王秋红

(1.黑龙江中医药大学，黑龙江哈尔滨 150040；2.广东药科大学中药学院，广东广州 510006)

综述

中西医对阿霉素肾病模型的研究进展

徐静1，李霄1，王斌1，匡海学1，王秋红2*

(1.黑龙江中医药大学，黑龙江哈尔滨 150040；2.广东药科大学中药学院，广东广州 510006)

肾小球疾病是泌尿系统较为常见的疾病，是指以肾小球损害为主的变态反应性炎症。在实验研究过程中，阿霉素肾病模型能代替肾小球疾病的病理及生理的改变。中西医治疗阿霉素肾病通过抑制免疫反应、减轻炎症损伤、延缓肾纤维化、保护足细胞和肾小管上皮细胞等机制，改善其临床表症。现将中西医治疗阿霉素肾病的药理作用研究进展进行综述，为临床用药提供科学理论依据。

肾小球；阿霉素肾病；足细胞；生长因子;综述

肾小球疾病是指以肾小球损害为主的变态反应性炎症，是泌尿系统较为常见的疾病。其临床表现为蛋白含量降低，肾小球滤过功能下降，血脂含量升高等肾病综合征。阿霉素肾病模型病理及生理改变类似于人类的微小病变型肾病，且模型制备简单方便，所以研究中常用阿霉素肾病模型复制肾小球疾病[1]。现代医学认为肾小球疾病形成的因素主要有血流动力学改变、炎性介质、生长因子、肾小球过滤障碍、足细胞损伤等[2]。中西医治疗阿霉素肾病通过抑制免疫反应、减轻炎症损伤、延缓肾纤维化、保护足细胞和肾小管上皮细胞等机制，改善其临床表症，为临床用药提供科学理论依据。

1 西药研究

西医治疗肾小球肾炎常依照常规检查指标的异常，针对其症状给予药物治疗。比如尿蛋白多常用ACEI、ARB治疗，水肿则用利尿剂治疗，不同的症状需要不同的药物治疗。

1.1 组蛋白去乙酰化酶抑制剂

丙戊酸钠是典型的组蛋白去乙酰化酶(HDACs)抑制剂，具有良好的抗炎症及抗纤维化作用。戴芹等[3]研究发现,VPA可以改善阿霉素大鼠低蛋白、高血脂等肾病综合征，同时下调纤维细胞活化标志蛋白α-SMA，肾脏组织中的ColⅠ、ColⅢ和α-SMA mRNA 的表达也显著降低。

1.2 血管紧张素转化酶抑制剂

王军建等[4]研究发现,培哚普利可以减少尿中蛋白的排泄，上调阿霉素大鼠肾脏Nephrin的表达，抑制TGF-β1的表达，减轻肾脏足细胞损害。杨沿浪等[5]研究血管紧张素转化酶抑制剂贝那普利和螺内酯联合应用对阿霉素大鼠肾小管的保护作用，通过观察尿蛋白、尿RBP、血压、转化生长因子-β等指标，发现联合应用比单用任何一个作用效果都要明显。卡托普利可降低阿霉素肾病大鼠慢性肾功能衰竭[6]。吴仁胜等[7-8]研究发现,卡托普利与洛伐他汀联用可以降低阿霉素大鼠血清IL-6、TNF-α、胆固醇、甘油三酯含量，升高血浆白蛋白浓度，联用可以更有效地保护阿霉素肾脏功能。

1.3 肾上腺皮质激素

张文晓等[9]研究发现,泼尼松通过IL-17、IL-6参与阿霉素肾病免疫发病机制，可改善蛋白尿、低白蛋白血症和高脂血症，降低血清IL-17、IL-6水平抑制Th17细胞的过度分化。陈小英等[10]通过研究泼尼松对阿霉素大鼠肾脏组织FAK/Pyk2表达的影响，发现构成足突间裂孔隔膜关键成分Nephrin在模型组表达减少，给予药物治疗后明显回调；泼尼松能抑制FAK和Pyk2激活，降低蛋白尿，改善足突病变，保护肾小球过滤屏障。

1.4 免疫抑制剂

来氟米特是一种新型的免疫抑制剂，常用于自身免疫性疾病、肾小球疾病及脏器移植后排异反应等。LEF能有效减低患者蛋白尿作用。邹艳红等[11]研究发现,降低蛋白尿改善肾小球病变的作用机制可能与肾脏血管内皮生长因子的表达有关，LEF能显著降低血管内皮生长因子VEGF。

2 中药研究

近年来，中医药通过多途径、多靶点针对肾小球疾病的干预与调节进行了多方面研究，发现中药不仅可以改善其蛋白尿、低白蛋白血症、高脂血症等临床症状，还可以延缓肾脏损伤。治疗肾小球肾炎通常采用补肾活血、祛风通络、补益脾肾、利水消肿等方法。

2.1 复方制剂

1)肾炎康复片(西洋参、人参、生地黄、杜仲、山药、白花蛇舌草、黑豆、土茯苓、益母草、丹参、泽泻、白茅根、桔梗)是中药复方制剂，具有健脾补肾、清化湿热、活血化瘀等功效。王朝俊等[12]研究发现,肾炎康复片可以通过调节p38MAPK信号通路，减少肾小球内TGF-β1表达和巨噬细胞的浸润，从而改善阿霉素肾病模型肾炎组织炎症损伤。

2)当归芍药散(当归：芍药：川芎：白术：茯苓：泽泻=3:16:8:4:4:8)具有活血利水之功效。杨明月等[13]通过研究当归芍药散对肾病综合征大鼠电解质紊乱的作用，得出该方可以通过改变血清和尿液的钠离子、钾离子、氯离子浓度，调节体内电解质平衡，改善电解质紊乱，达到利水消肿功效。

3)加味当归补血汤(黄芪：当归：川芎：怀牛膝=1:1:1:1)是《内外伤辨惑论》中经典名方。黄芪补气益肾，当归补血通络，二者合用达到益气补血之功。在当归补血汤中加入川芎和怀牛膝，川芎牛膝活血养阴，利尿通淋，改善血液循环，防止硬化。魏明刚等[14]利用阿霉素肾病模型研究加味当归补血汤的作用机制，发现该方可上调足细胞标志蛋白Nephrin、Podocin的表达，间接减轻足细胞的损伤，保持足细胞的完整性，延缓肾脏纤维化的速度。

4)五味子复方(五味子为主药，辅以黄芪、丹参等)以补肾活血为原则。左春霞等[15]研究发现五味子复方可以减轻阿霉素肾病小鼠尿蛋白含量，其作用机制可能与肾皮质WT1蛋白、Nephrin和 Podocin mRNA表达有关，实验结果表明治疗组Nephrin mRNA和Podocin mRNA表达高于模型组，模型组肾小球荧光染色WT1成节段性缺失，治疗组较轻。即SM通过上调WT1、Nephrin、Podocin mRNA表达，减少尿蛋白生成，保护足细胞病变。

5)补益脾肾方(由黄芪、山茱萸、白术、三七、川芎等药物组成)具有补肾健脾、益气活血等作用。陈彤等[16]研究发现,补益脾肾方可以下调肾间质TGF-β1、结缔组织生长因子CTGF的表达，抑制细胞外基质合成，减轻肾脏纤维化，延缓肾脏衰竭。

6)柴苓归芪汤(由柴胡、黄芩各10 g,黄芪30 g,当归、茯苓各15 g,猪苓、地龙各12 g等组成)具有补肾益气，泻火解毒，利水消肿等功效。ZHANG等[17]研究发现,柴苓归芪汤能降低蛋白尿及血清TC、TG、LDL、Cr、BUN水平，而血清TP、ALB、HDL水平显著升高。即归芪汤能够降低尿蛋白，调节脂质代谢，保护肾功能，延缓大鼠肾脏损害。

7)祛风通络：祛风通络方(青风藤20 g，海风藤20 g，桑寄生30 g，乌梢蛇15 g，黄芪30 g，生地黄20 g)在临床上治疗肾性蛋白尿取得了较好的效果。王娟等[18-19]通过观察肾小球内皮细胞VEGF及其受体FLK-1的表达、细胞骨架蛋白Desmin及裂孔隔膜蛋白CD2AP的表达，探讨祛风通络方对阿霉素大鼠肾脏保护的作用机制，研究发现祛风通络方可以下调VEGF及其受体FLK-1的表达、下调Desmin及CD2AP基因及蛋白的表达，在降低阿霉素大鼠尿蛋白含量的同时，改善肾小球内皮细胞的损伤，对细胞骨架重塑以及足细胞形态的完整也起着一定作用。

8)清热解毒消肿：黄葵胶囊HKC是以黄葵总黄酮为主要成分的提取物制剂，临床广泛应用治疗各类慢性肾脏病CKD，如肾病综合征、糖尿病肾病、膜性肾病等。通过研究发现,HKC能降低蛋白尿、保护肾功、减轻肾小管损伤、清除自由基、减轻肾小球炎症反应等。赵青等[20]研究发现,HKC改善了阿霉素大鼠奶蛋白及血清白蛋白含量，抑制系膜细胞MC增生，细胞外基质ECM及胶原成分的沉积，降低肾小球α-SMA和I型胶原水平，下调肾组织TGF-β1和磷酸化p38MAPK蛋白的表达。即改善肾脏炎性损伤的机制是HKC干预了肾组织炎症信号通路p38MAPK。

2.2 单味中药及其提取物

目前，对于单味中药及提取物的研究也越来越多，主要研究其物质基础、药理功效及作用机制等。研究后发现许多单味中药及其提取物对血脂、肾功、蛋白含量等具有明显改善作用。

2.2.1 利水消肿药

1)车前草：陈兰英等[21]通过实验发现,车前草水提物能不仅能升高阿霉素大鼠血清TP、ALB，还能降低丙二醛MDA、转化生长因子TGF-β1，增加超氧化物歧化酶SOD含量，可能通过清除氧自由基和抑制脂质过氧化反应改善肾病综合征。2)白茅根：陈兰英等[22]针对白茅根不同提取物对阿霉素大鼠肾脏保护进行研究，研究发现白茅根乙酸乙酯部位可通过降低NF-κB的上游分子TNF-α和TGF-β1、抑制了NF-κB p65的活性，从而减少尿蛋白的排泄，减轻肾脏组织的炎症，抑制肾小球纤维化，改善肾脏病理损害。3)黄芪：WANG等[23]研究发现,黄芪甲苷可降低尿蛋白水平， Nephrin和Podocin mRNA蛋白的表达水平明显高于模型组，从而维持裂隙膜的完整。4)苦参:Xu等[24]研究发现，苦参碱能降低IL-6、IL-10、TGF-β含量，升高Foxp3水平，改善Foxp3和RORγT的表达，苦参碱通过抑制肾脏炎症和调节Treg/Th1改善肾病综合征，修复肾脏损伤。

2.2.2 补肾活血药

1)红景天：苗里宁等[25]研究发现红景天苷除了能有效减少阿霉素肾病大鼠尿蛋白，提高血浆蛋白，改善脂质代谢；还能抑制纤维连接蛋白FN、层黏连蛋白LN的表达;抑制细胞外基质ECM的合成，通过降低外周血TGF-β水平，下调大鼠肾组织纤溶酶原激活物抑制剂PAT-1、上调基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的水平，从而减少细胞外基质ECM在肾小球中的积聚,从而促进肾脏病理损害的修复。2)丹参：吕波等[26]通过研究丹参酮ⅡA磺酸钠对阿霉素肾病大鼠肾脏损伤的干预机制，实验结果表明丹参酮ⅡA磺酸钠可能通过降低血浆黏度，抑制凝血与纤溶所造成的肾损伤，抑制肾脏组织TGF-β、PAI-1的表达，从而对肾脏起到保护作用。3)三七：吴金玉等[27]研究三七注射液对阿霉素大鼠TGF-β1/p38MAPK信号通路的影响，三七注射液可以下调TGF-β1和p38MAPK蛋白的表达，阻断肾组织炎症信号通路，降低肾间质纤维化损伤。钟丹等[28]通过观察三七总皂苷对阿霉素大鼠血液流变学影响，发现三七总皂苷通过扩张肾动脉及小血管，降低血液高凝状态，改善肾脏循环。

2.2.3 祛风除湿药

雷公藤：曹英杰等[29]研究发现雷公藤甲素对阿霉素大鼠作用可能通过抑制乙酰肝素酶Hpa的含量而减少HSPG的表达，从而对肾小球基底膜的电荷屏障起到保护作用。

3 小结与展望

由以上论述可知，阿霉素肾病是最经典的肾病病理模型，主要表现为蛋白尿、足细胞损害、高血脂的肾病综合征[30-32]。随着病情的发展出现肾小球硬化、肾脏纤维化，最严重可导致肾功能衰竭。大量实验研究发现,治疗阿霉素肾病可从几方面入手。1)蛋白尿与足细胞：蛋白尿是阿霉素肾病模型的最常见的症状，也是临床比较难解决的问题之一。肾小球过滤屏障破坏与蛋白尿密切相关。足细胞的足突分为3个膜性结构域：顶膜区，裂孔隔膜SD和域肾小球基底膜GBM相连的基膜区[33]。肾小球内皮细胞、基底膜及足细胞等共同构成了肾小球滤过膜。FAK/Pyk2蛋白的高表达可以导致尿蛋白水平增加，敲除或降低其蛋白可降低尿蛋白的排泄。VEGF及其受体FLK-1不仅参与滤过膜的形成，对肾脏微血管结构改变也起着重要作用。肾脏足细胞裂孔隔膜SD上有很多蛋白，CD2AP、Nephrin表达异常与蛋白尿的发生紧密相关。足细胞标志蛋白Nephrin、Podocin和足细胞骨架蛋白Desmin等是过滤屏障的结构基础。这些蛋白参与并维持正常足细胞的生理功能以及信号的传递，在修复足细胞损伤及重塑足细胞完整上起到了重要的作用。2)肾脏纤维化：转化生长因子-β1是导致肾脏纤维化重要细胞因子，它在细胞外基质代谢、促进肾小球硬化病变过程中起着关键作用。TGF-β1和p38MAPK蛋白参与阻断肾组织炎症信号通路，降低肾间质纤维化损伤[34]。α-SMA蛋白也是纤维细胞活化标志蛋白，下调α-SMA也可降低肾间质纤维化损伤[35]。3)改善血液循环：扩张肾动脉及小血管，降低血浆黏度，降低血液高凝状态，抑制凝血与纤溶所造成的肾损伤，改善肾脏循环。但是阿霉素肾病模型肾炎仍有不足之处，所涉及的机制研究仅仅是一些单个指标、蛋白、基因的观察，没有一个完整而系统的体系。未来可以利用代谢组学、蛋白组学、基因组学等系统生物学方法对阿霉素肾病模型进行整体研究，全面揭示阿霉素肾病模型的机制[36]。

[1] Bertani T,Poggi A,Pozzoni R,et al.Adrimyoin induced nephritic syndrome in rays[J].Laboratory Investigation,1982,46(50):16-18.

[2] Floege J,Bienert A.Glomerulonephritis[J].Dtsch med Wochenschr,2013,138(30):1515-1528.

[3] 戴芹,刘剑,郝旭,等.丙戊酸钠对阿霉素肾病大鼠的肾保护作用[J].上海交通大学学报,2014,34(5):573-577.

[4] 王军建,王列,苏宇飞,等.培哚普利对阿霉素肾病大鼠肾脏的保护作用[J].山东医药,2013,53(35):26-28.

[5] 杨沿浪,邹和群,张道友,等.贝那普利、螺内酯联用对阿霉素肾病大鼠肾小管保护作用的研究[J].中国临床药理学与治疗学,2012,17(4):381-386.

[6] Jovanovi Dijana B,Jovovic curcica,Varagic Jasmina,et al.Slowing down of chronic renal failure progression with captopril in spontaneously hypertensive rats with adriamycin nephropathy[J].Srpski Arhiv za Celokupno Lekarstvo,2002,130(3):73-80.

[7] 吴仁胜,张道友,陈忠辉,等.卡托普利与洛伐他汀联用对阿霉素肾病大鼠血清IL-6的影响[J].实用药物与临床,2008,11(2):65-67.

[8] 张道友,吴仁胜,陈忠辉,等.卡托普利与洛伐他汀联用对阿霉素肾病大鼠血清TNF-α的影响[J].放射免疫学杂志,2007,20(6):488-490.

[9] 张文晓,张碧丽.阿霉素肾病大鼠血清IL-17、IL-6的动态变化及其意义[J].天津医科大学学报,2016,22(3):204-207.

[10] 陈小英,王菊霞,郑京,等.泼尼松对阿霉素肾病大鼠肾组织FAK/Pyk2表达的影响[J].南方医科大学学报,2014,34(8):1149-1153.

[11] 邹艳红,迟瑛娇,赵塔娜,等.来氟米特对阿霉素肾病大鼠尿、肾脏VEGF表达的影响[J].黑龙江医药科学,2013,36(1):48-49.

[12] 王朝俊.肾炎康复片改善阿霉素肾病模型肾组织炎症损伤的分子机制[D].南京:南京中医药大学,2011:12.

[13] 杨明月,岳晓莉,周敏,等.基于电解质研究当归芍药散对肾病综合征大鼠作用[J].辽宁中医药大学学报,2017,19(1):39-41.

[14] 魏明刚,张玲,倪莉,等.加味当归补血汤对阿霉素肾病大鼠肾脏足细胞保护机制的研究[J].中国中西医结合杂志,2012,32(8):1077-1082.

[15] 左春霞,谭小月,张勉之.五味子复方减轻阿霉素肾病小鼠尿蛋白的实验研究[J].天津中医药,2014,31(1):33-35.

[16] 陈彤,舒惠醛,易晓颖.补益脾肾方对阿霉素肾病大鼠肾间质转化生长因子-β1和结缔组织生长因子表达的影响[J].四川中医,2012,30(8):53-55.

[17] ZHANG Fen-Fang,CHEN Zhi-Qiang.Protective effects of Chailing Guiqi Decoction combined with lumbrukinase on renal function in rats with adriamycin nephropathy[J].Zhong Xi Yi Jie He Xue Bao,2005,3(4):294-298.

[18] 王娟,崔志军,马巧亚,等.祛风通络方对阿霉素大鼠肾小球内皮细胞VEGF及其受体FLK-1表达的影响[J].长春中医药大学学报,2015,35(5):897-900.

[19] 王竹,刘俊田,孙万森,等.祛风通络方对阿霉素肾病大鼠足细胞Desmin及CD2AP蛋白的影响[J].中国中西医结合杂志,2014,34(2):203-208.

[20] 赵青,万毅刚,孙伟,等.黄葵胶囊对阿霉素肾病肾组织炎症信号通路p38MAPK的干预作用[J].中国中药杂志,2012,37(19):2926-2934.

[21] 陈兰英,王昌芹,罗园红,等.车前草水提物对肾小球肾炎大鼠的保护作用[J].时珍国医国药,2015,26(12):2874-2877.

[22] 陈兰英,陈卓,王昌芹,等.白茅根不同提取物对阿霉素肾病大鼠的保护作用及对TGF-β1、NF-κB p65分子表达的影响[J].中药材,2015,38(11):2342-2347.

[23] Na WANG,Ri-Bao WEI,Qing-Ping LI,et al.Protective effects of astragaloside in rats with adriamycin nephropathy and underlying mechanism[J].Chinese Journal of Natural Medicines,2016,14(4):270-277.

[24] Yixiao Xu. Matrine ameliorates adriamycin-induced nephropathy in rats by enhancing renal function and modulating Th17/Treg balance[J].European journal of pharmacology,2016,791(15):491-501.

[25] 苗立宁.高山红景天苷对阿霉素大鼠肾小球硬化防治作用研究[D].北京:中国人民解放军军医进修学院,2005:19.

[26] 吕波,杨茂波,肖洪彬.丹参酮IIA磺酸钠针对阿霉素肾病大鼠肾损伤的干预机制研究[J].中华中医药学刊，2015,33(10):2470-2471.

[27] 吴金玉,周倍伊,唐宇,等.三七注射液对阿霉素肾纤维化大鼠TDF-β1/P38MAPK信号通路的影响[J].中国现代医学杂志，2015,25(10):1-5.

[28] 钟丹,刘明平,邹亦平,等.三七总皂苷对系膜增生肾小球肾炎模型大鼠血液流变学的影响[J].中国老年学杂志，2010,30(7):958-959.

[29] 曹英杰,陈晓岚,范亚萍,等.雷公藤甲素对阿霉素肾病大鼠肾脏乙酰肝素酶表达及蛋白尿的影响[J].长江大学学报,2014,11(36):110-115.

[30] 乔铁,马进,刘丽,等.防己黄芪汤对阿霉素肾病大鼠蛋白尿及水通道蛋白2的影响[J].中医药信息,2015,32(4):17-19.

[31] 范颖,乔铁,刘丽,等.防己黄芪汤对阿霉素肾病大鼠蛋白尿及炎性因子的影响[J].中医药信息,2014,31(6):47-49.

[32] 黄雯静,刘娜,杨馨,等.肾炎消白颗粒对阿霉素肾病大鼠Podocin、α-actinin-4蛋白的影响[J].中医药学报,2015,43(5):44-47.

[33] 龚雪,吴少波,陈明.足细胞并的研究进展[J].湖南中医药杂志,2017,33(1):171-174.

[34] 辛冰牧,杨红振,胡卓伟.肾纤维化发病机制及治疗学研究进展[J].国际药学研究杂志,2008,35(5):349-354.

[35] 张均.Snail及α-SMA在IgA肾病中的表达及意义[D].重庆:重庆医科大学,2015.

[36] 罗国安,梁琼麟,王义明,等.中医药系统生物学发展及展望[J].中国天然药物,2009,7(4):242-248.