HPLC在中药研究中的应用

2017-01-14金凤华

中国现代药物应用 2017年2期

关键词：色谱法液相指纹

金凤华

·综述·

HPLC在中药研究中的应用

金凤华

阐述高效液相色谱法(HPLC)在中药方面的应用, 包括炮制、指纹图谱、有效成分的测定、药理等。

高效液相色谱法；中药研究；应用

高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC)起源于上世纪70年代, 自诞生后发展快速, 主要是分析、分离多成分的仪器技术, 其特点在于方便、灵敏、准确、快速。目前在各大领域, 包括医药、化工、军事、食品等。进入新世纪后, 广泛应用于前沿学科, 如生物基因工程、新能源等, 随着计算机软件技术的普及, 各种检测设备的合作运用, HPLC的运用范围也得到了拓展, 是当前科技发展不可缺少的重要仪器设备。高效液相色谱仪结构并不复杂, 主要包括检测器、输液泵、色谱柱、样品进入口等, 流动相可为单一溶剂, 也可为比例不同的混合溶剂, 流动相通过泵可直接填充至色谱柱并注入样品溶液, 通过流动相融入到柱内,在填充剂上分离, 之后各个成分可以先后流入到检测器内并记录下其色谱图, 开展定量、定性的分析。以其高效、稳定、可靠的特点, 在中药研究中占有不可替代的地位。本文就近年来HPLC技术在中药有效成分测定、中药指纹图谱研究、中药炮制和中药药理等方面的应用作一简要介绍。

1 中药有效成分测定

HPLC在中药有效成分分析中最常见, 特别是其样品的纯化技术, 如液液、临界、液固萃取等, 让其具有高分离效率, HPLC法可以更加精准的对中药成分进行测定。例如, 2015年版《中国药典》采用HPLC法, 分析柱为C18, 流动相包括甲醇、水等, 以此来测定骨碎补、丹参、香加皮、护肝片、小儿消炎栓等有效成分含量［1］。有文献报道证明HPLC法分离测定中药中的有效成分, 如生物碱类、甙类、黄酮类等均非常准确、有效, 例如, 测银杏叶中黄酮成分可采用高效液相一二极管阵列检测器分离检测法［2］, 测定银杏叶提取物中内酯、黄酮含量则可采用高效液相/蒸发激光散射检测器［3］。包括红豆杉中紫杉醇含量、清胃片中黄芩苷的含量等［4］。通过实验证明均取得了令人满意的结果, 有着极好的操作性［5］,并且还有部分已录入到了质量标准内［6］。

2 中药指纹图谱研究

正相HPLC法、反相HPLC技术均已达到一定标准, 分离效果好、准确性高、分析快, 已被运用到中药材、制剂定量、定性的分析中。当前, 检测中药指纹图谱的首选方法主要就是反相HPLC技术。

中药HPLC指纹图谱指中成药、中药材在进行一定科学处理后, 采用HPLC分析可以得到提示此药中共有峰值的图谱。一般来说指纹图谱包括两层内容：一是要反映出此药与其他物质间的差别；二是对于中药材还可反应出采收时节或是生产地不同而有的差异点, 对中成药而言则可展现同一个产品不同批次的区别。差异小则代表稳定性高。

郭澄等［7］运用指纹图谱, 对中药蝼蛄品种、混乱品种间、皱瘤海鞘有效部位开展鉴定。有文献以报告, 参照物-丹皮酚、流动相-甲醇-水, 进行连续梯度洗脱测定10批牡丹皮药材指纹图谱。以此构建起了规范化种植药用牡丹皮的HPLC指纹图谱, 稳定性、精密度都比较高, 也为丹皮药材的质控提供参考。有文献报告, 利用高效液相/紫外检测、高效液相/荧光检测、高效液相/蒸发光散射检测指纹图谱, 对于制首乌、枳壳超微粉甲醇提取物、七叶皂苷钠、三七药开展测定工作。例如, 运用DAD可以得到3D图谱,可见可适用成分复杂的, 紫外光区有吸收的药物。有学者则采用3DHPLC指纹图谱对黄连粉针剂、黄连解毒汤制剂进行质量控制。并且还有乌拉尔甘草、甘草根茎的乙醇提取物的HPLC指纹图谱的有关文献［8-11］。宋金春等［12］则采用RPHPLC, 分析构建了如下药材HPLC指纹图谱分析法：川芎、野菊花、山楂等, 此方法可靠性强、重现性好, 可以对这些药材质量进行有效控制。

3 中药炮制研究

有学者采用高效的液相法对肉豆蔻及炮制品挥发油中肉豆蔻醚、黄樟醚展开测定, 方法快速、准确, 也证明了肉豆蔻醚在炮制后会有不同程度的减少, 可降低毒性, 交对炮制机理进行了简单描述［10］。相关学者则采用高效液相法, 测定白附生品、不同的炮制品中次乌头碱含量, 实验证明了煮后可让乌头碱下降, 下降率可达98%, 而蒸后的下降率更高,达100%, 这也说明了炮制解毒机理主要是让中药材中的毒性成分含量下降, 此测定也为炮制工作打下了扎实的基础［13］。

4 中药药理研究

李艳等［14］实验表明, 限制大鼠活动空间, 以此导致的反复心理应激大鼠血浆多巴胺(DA)、5-羟色氨(5-HT)、下丘脑DA和5-HT含量明显降低。而去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)含量则相反, 有上升的形式。运用加味四逆散, 可以在一定程度上提升应激大鼠下丘脑和血浆中DA、5-HT含量, 与人参总皂苷相比, 起效更多。同时也可减少血浆中NE、E含量, 这也证明了味四逆散能明显提升应激能力, 这机制和升高中枢和血浆中DA及5-HT含量, 降低血浆中NE和E含量有关。

文爱东等［15］结果证明, 阿魏酸在脾虚血瘀组大鼠体内分布容积明显降低, 消除速度也明显降低, 曲线下面积增加,多剂量注射阿魏酸后脾虚血瘀组大鼠血浆和近段空肠组织中胃动素含量显降, 降结肠和直肠组织中前列腺素的含量显著升高。从这里可以看出, 明阿魏酸在正常及血瘀证大鼠体内药动学中存在着差异性, 阿魏酸治疗血瘀证的作用和调节胃肠激素平衡有一定的关系。

5 讨论

几千年过去了, 国药中药世世代代传承下来, 在各种疾病的治疗、保健、养生中, 都有非同一般的效果［16,17］。但是,从根本上来说, 中药成分复杂、多元, 在一定程度上限制了其在临床上的发展, 中药品种确实是不断推出新品, 但质量却远远未能实现科学的量化, 所有的问题都要依靠先进、灵敏、精密的仪器来逐步解决。而HPLC在中药有效成分测定、中药质量控制、中药新剂型研究等方面均有广泛的运用, 其分离效果好、分析速极快, 同时不用耗费大量的样品就可以进行测定［18-20］。伴随和质谱、质谱串联等联用技术的发展、完善, HPLC一定会在中药活性成分鉴定、有效成分分析、中药以及制剂生产质量质控等方面起到重要的作用, 是未来分离、含量测定等的第一选择方法。

［1］国家药典委员会. 中华人民共和国药典(2015年版).一部. 北京：中国医药科技出版社, 2015∶254.

［2］田南卉, 张鲲. 高效液相色谱法蒸发激光散射检测器测定银杏叶提取物中内酯的含量. 药物分析杂志, 1997(4)∶282-283.

［3］王喜军, 孙晖. 茵陈蒿汤的三维HPLC分析. 中成药, 1993(12)∶33-35.

［4］陶巧凤, 黄宗玉, 范秀林. 高效液相色谱法测定银杏叶制剂中黄酮含量. 中成药, 1993(12)∶14-15.

［5］陶巧凤.高效液相色谱法测定清胃片中黄苓甙含量.现代应用药学, 1996, 13(增刊)∶33.

［6］牟德海, 周治发.反相HPLC法分析红豆杉树皮和树叶中紫杉醇及其类似物含量的研究.分析测试学报, 1997, 16(16)∶8.

［7］郭澄, 魏道智, 郑汉臣.中药蝼蛄的高效液相指纹图谱研究.药学实践杂志, 2005, 23(6)∶ 366-369.

［8］谢培山.中药色谱指纹图谱.北京∶ 人民卫生出版社, 2005∶74.

［9］王玺, 王文宇, 张克荣, 等.中药HPLC指纹图谱相似性研究的探讨.沈阳药科大学学报, 2003, 20(5)∶361-362.

［10］叶皓, 沈顺, 张祥民.液相指纹图谱结合欧氏距离对野菊花质量控制的研究.世界科技研究与发展, 2006, 28(2)∶72.

［11］汤树良, 杨滨, 黄璐琦, 等.山楂高效液相指纹图谱研究.中国实验方剂学杂志, 2004, 10(4)∶9-13.

［12］宋金春, 胡传芹, 刘红, 等.川芎高效液相指纹图谱的建立.中国药房, 2005, 16(9)∶716-718.