核酸检测法对血液标本内乙肝病毒的检测价值分析①

王志宏，李 辉

(陕西省汉中市中心血站检验科，陕西 汉中 723000)



核酸检测法对血液标本内乙肝病毒的检测价值分析①

王志宏，李 辉

(陕西省汉中市中心血站检验科，陕西 汉中 723000)

目的：研究分析核酸检测法对血液标本内乙肝病毒(HBV)的检测价值。方法：采集中心血站无偿献血的血液标本16214份，同时进行酶联免疫吸附法(ELISA)和核酸检测法，以筛查HBV感染情况，并分析两组检测方法的诊断价值。结果：ELISA、核酸检测HBV的一致性较好，差异无统计学意义(P>0.05)。核酸检测法的特异性、敏感度明显高于ELISA检测法，而漏诊率及窗口期明显低于ELISA检测；A组的HBV-DNA阳性率、含量均高于B组、C组。上述差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：核酸检测法具有高度的特异性和灵敏度，与ELISA检测具有一定的互补性，可有效地减少漏诊率，缩短窗口期，且HBV-DNA的含量能反映HBV的传染性，对输血安全具有重要作用。

核酸检测； 乙肝病毒； 检测价值

本文通过在ELISA检测HBsAg的基础上，同时应用核酸检测对献血者的血液标本进行检测，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 筛查对象:采集2015年8月至2015年12月我院血液中心无偿献血的血液标本16214份。所有献血者均经金标试纸法检测HBsAg和干化学法检测ALT结果合格。血液采集后同时留取两样管标本，一管用于ELISA检测：使用分离胶促凝真空管(5mL/管)采集；另一管用于核酸检测：使用带分离胶EDTA-K2抗凝真空管(5mL/管)采集。所得样本应准确记录具体的采集日期以及样品编码等信息。并在4h内经离心后冻存在4℃冰箱，48h内检测结果。若不能完成的标本则提取血浆置于-20℃环境下保存。

1.2 仪器与试剂:ELISA检测采用FAME24/20型全自动酶免分析仪(瑞士哈密顿公司)；核酸检测采用实时荧光定量PCR系统(美国罗氏公司)；低温离心机(德国Thermo)。HBV常规血清学筛查试剂盒(厦门英科新创)以及配套检测试剂。

1.3 检测方法:所有血液标本均参照国家《献血者健康检查要求》[1]进行卫生部的初检和复检。每份标本均采用ELISA试剂进行HBV血清学标志物检测以及PCR系统进行乙肝病毒基因(HBV-DNA)检测。以lg(HBV-DNA)>2.7记为阳性，其中HBV血清学标志物包含HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb。

1.3 观察指标:观察HBsAg的阳性3种HBV感染状态，包括大三阳(HBsAg+/HBeAg+/HBcAb+)、小三阳(HBsAg+/HBeAb+/HBcAb+)和急性感染或感染慢性期(HBsAg+/HBcAb+)。

2 结 果

2.1 两组方法诊断阳性率对比:两种方法检测法的阳性率比较，一致性较好，差异无统计学意义(Kappa值=0.647，P=0.053)。见表1。

表1 两组方法诊断阳性率对比(n)

2.2 两组方法特异性、敏感度对比:核酸检测法的特异性、敏感度高于ELISA检测法，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 两组方法特异性以及敏感度对比n(%)

2.3 两组方法漏诊率、窗口期对比:核酸检测法的漏诊率、窗口期低于ELISA检测，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 两组方法漏诊率、窗口期对比

2.4 HBV感染与HBV-DNA阳性率、含量分析：A组的HBV-DNA阳性率、含量均高于B组、C组，差异有统计学意义(P<0.05)，而B组、C组的HBV-DNA阳性率、含量差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。

表4 HBV感染与HBV-DNA阳性率、含量分析

注：A组：大三阳，B组：小三阳，C组：急性感染或感染慢性期；A、B两组比较，①P<0.05；A、C两组比较，②P<0.05；B、C两组比较，③P<0.05

3 讨 论

乙肝病毒(HBV)是一种经血液传播的病毒性传染病。在我国HBV呈高流行发展趋势，对献血人群的血液进行筛查是预防HBV传播的重要途径。酶联免疫吸附法(ELISA)作为检测HBV最常用的方法，常以乙肝表面抗原(HBsAg)作为检测指标，具有快速、便宜等优势，在血液筛检中占据着重要的地位。但是由于存在HBV感染的窗口期、隐匿性HBV等问题，使得HBV漏检的风险较大。核酸检测法作为血清学诊断方法的一种补充，是一种新型的分子生物学诊断方法[2]。此方法是通过对乙肝病毒基因(HBV-DNA)含量的测定，进而直接、有效地反映HBV的感染情况，其结果灵敏性较高，现已广泛地应用于献血者血液病毒感染的筛查。

本文通过对中心血站无偿献血的血液标本进行ELISA检测法以及核酸检测法。结果发现，核酸检测HBV的阳性率与ELISA检测存在着一定的差异性。8份血液标本ELISA检测阳性但在核酸检测中呈阴性。笔者认为，这可能是因为乙肝患者在药物治疗过程使得血液里残留HBsAg，它并不具备病毒DNA，且传染性及复制率均不高。而11份标本ELISA检测为阴性但在核酸检测中呈阳性。究其原因，这可能是因为在HBV感染早期病毒数量不多，ELISA检测通过HBsAg指标并不能被检测到，而DNA在血清中也存在，因此核酸检测阳性。Chatterjee等研究表明[3]，通过核酸检测可将输血传播HBV的ELISA检测窗口期缩短43%。与本文研究结果基本一致，核酸检测的窗口期几乎只需ELISA检测时间的一半。此外，本研究结果还发现，A组的HBV-DNA阳性率、含量均明显高于B组、C组(P<0.05)。这提示，HBV感染状态与HBV-DNA阳性率、含量相关，大三阳的阳性率以及含量明显较高。这可能是因为急性感染或感染慢性期的HBV并无传染性，随着HBV-DNA阳性率、含量的增高，HBV血液标本的传染性越强。同时也发现了可以通过对HBV-DNA的定量测定来说明HBV传染性。

[1] 蔡杰,许纪玲,陆玉婷,等.大容量样本病毒浓缩HCV核酸检测方案的研究[J].临床和实验医学,2014,13(13):1070～1073.

[2] Xiao X,Zhai J,Zeng J,et al.Comparative evaluation of a triplex nucleic acid test for detection of HBV DNA, HCV RNA, and HIV-1 RNA, with the Procleix Tigris System[J].Virol Methods,2013,187 (2): 357～361.

[3] Chatterjee K,Agarwal N,Coshic P,et al.Sensitivity of individual and mini-pool nucleic acidtesting assessed by dilution of hepatitis B nucleic acid testing yield samples[J].Asian Transfus Sci, 2014,8 (1): 26～28.

Value Analysis of Nucleic Acid detection Method for Detection of Hepatitis B Virus in Blood Samples

WANGZhihong,LIHui

(ClinicallaboratoryofHanzhoungBloodCenter,ShanxiHanzhong723000,China)

Objective: To analyze the nucleic acid detection method for blood samples in the detection of hepatitis B virus (HBV). Methods: 16214 blood samples were collected in our hospital blood center blood donation, and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and nucleic acid detection method in screening of HBV infection situation, diagnosis and analysis of two group detection method. Results: The positive rate of nucleic acid detection ELISA, HBV were 0.21%, 0.23%, the difference was not statistically significant (P > 0.05), the coincidence rate of the two methods for detection of specific 99.77%. nucleic acid detection method, the sensitivity was significantly higher than that of ELISA detection, and the detection rate and the detection window period was significantly lower than that of ELISA the positive rate of HBV-DNA; A group, were significantly higher than in B group, C group. The differences were statistically significant (P < 0.05). Conclusion: The nucleic acid detection method has high specificity and sensitivity, complementarities and ELISA can effectively detect. To reduce the false negative rate, shorten the window period, and the content of HBV-DNA can reflect HBV infectivity, plays an important role in the safety of blood transfusion.

Nucleic acid detection; Hepatitis B virus; Detection value

① 【基金项目】陕西省科技攻关项目，(编号：2009k13-G6(7))

1006-6233(2016)12-2097-03

A 【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2016.12.068