白柏颗粒质量标准初步研究

王玉鹏，黄顺旺，陈师农，孙 备，李玲芝，宋少江

（1．武警安徽省总队医院，安徽 合肥 230041； 2．安徽省食品药品检验研究院，安徽 合肥 230022； 3．沈阳药科大学中药学院，辽宁 沈阳 110016）

白柏颗粒质量标准初步研究

王玉鹏1，黄顺旺2，3，陈师农2，孙 备2，李玲芝3，宋少江3

（1．武警安徽省总队医院，安徽 合肥 230041； 2．安徽省食品药品检验研究院，安徽 合肥 230022； 3．沈阳药科大学中药学院，辽宁 沈阳 110016）

目的 建立白柏颗粒质量标准。方法 采用薄层色谱法对处方中的白术、党参、茯苓、黄芪进行定性鉴别；采用高效液相色谱法对样品中的甘草酸进行含量测定。结果 薄层鉴别的分离度好，专属性强，阴性对照无干扰；含量测定甘草酸质量浓度（以甘草酸单铵盐计）在6～60 g／mL范围内与峰面积线性关系良好（r＝0．999 9），平均回收率为98．89%（n＝6），RSD为0．66%。结论 所建立的方法准确、可靠、专属性强，可用于该制剂的质量控制。

白柏颗粒；甘草酸；薄层色谱法；高效液相色谱法

白柏颗粒是由黄芪、党参、茯苓、白术、山药、当归、地榆、小蓟、大蓟、藕节、炙甘草、乌梅、麦冬、枸杞子、续断、桑寄生、柏子仁、远志18味中药组方。其原剂型白柏胶囊具有补气固冲、清热止血的功效，适用于气虚血热型月经过多[1]。为了更好地控制白柏颗粒的内在质量，本试验对方中黄芪、党参、茯苓、白术4味药材进行了薄层色谱鉴别，并采用高效液相色谱（HPLC）法对方中炙甘草中的活性成分甘草酸（C42H62O16，以甘草酸单铵盐计）进行含量测定，为该建立制剂完善的质量标准提供依据。

1 仪器与试药

硅胶G板（100 mm×100 mm，供薄层层析用，青岛海洋化工厂分厂）；高效液相色谱仪（日本岛津公司）：紫外检测器 SPD－10Avp；LC－10ATvp型溶剂输送泵；N－2000双通道色谱工作站；AR1140型电子天平（上海加惠仪器仪表有限公司）；KQ－250E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；GZX－9140MBE型干燥箱（上海跃进医疗器械厂）；HHS型电热数显水浴锅（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）。甘草酸单铵盐（批号为110731－201116），黄芪甲苷（批号为0781－200109，供含量测定用），党参（批号为121057－200805），茯苓（批号为120925－200407），白术（批号为925－9303），供薄层鉴别用，均购自中国食品药品检定研究院；乙腈、冰醋酸为色谱纯，水为超纯水；其余试剂均为分析纯；白柏颗粒（批号分别为140901，140902，140903）及缺味阴性样品由安徽省食品药品检验研究院科研办自制。

2 方法与结果

2．1 薄层色谱鉴别

党参[1－2]：取本品8 g，研细，加正丁醇40 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液；取除党参以外的药材按处方工艺制成阴性样品，同法制成阴性对照品溶液；另取党参对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇－醋酸（1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液无干扰，见图1 A。

茯苓[2]：取本品8 g，研细，加乙醚50 mL，浸泡24 h，加热回流1 h，放冷，滤过，滤液回收溶剂至干，残渣加三氯甲烷1 mL使溶解，作为供试品溶液；取除茯苓以外的药材按处方工艺制成阴性样品，同法制成阴性对照品溶液；另取茯苓对照药材0．5 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）－丙酮（80∶20）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365 nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性对照品溶液无干扰，见图1 B。

白术[2－3]：取本品8 g，研细，加正己烷25 mL，超声处理30 min，滤过，滤液浓缩至1 mL，作为供试品溶液；取除白术以外的药材按处方工艺制成阴性样品，同法制成阴性对照品溶液；另取白术对照药材0．5 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各 2 μL，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以石油醚（60～90℃）－乙酸乙酯（40∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷5%香草醛硫酸溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性对照品溶液无干扰，见图1 C。

黄芪[2－3]：取本品8 g，研细，加无水乙醇25 mL，超声处理10 min，滤过，滤液置已处理好的中性氧化铝柱（100～140目，15 g，内径10～15 mm）上，用40%甲醇100 mL洗脱，收集洗脱液，置水浴蒸干，残渣加水20 mL使溶解，用水饱和的正丁醇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，用水洗涤2次，弃去水液，正丁醇液水浴蒸干，残渣加甲醇0．5 mL使溶解，作为供试品溶液；取除黄芪以外的药材按处方工艺制成阴性样品，同法制成阴性对照品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各3 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿－醋酸乙酯－甲醇－水（15∶15∶10∶5）为展开剂（10℃以下放置后的下层溶液），展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液（1→10），105℃加热数分钟，至斑点显色清晰后，置紫外光灯(365 nm)下检视，供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰，见图1 D。

2．2 甘草酸含量测定[2，4－5]

2．2．1 色谱条件

色谱柱：Cosmosil5 C18－MS－Ⅱ柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流动相：乙腈－2%冰醋酸溶液（40∶60）；流速：1．0 mL／min；检测波长：250 nm，柱温：35℃，进样量10 μL。理论板数以甘草酸单铵盐峰计不低于2 000。

2．2．2 溶液制备

精密称取甘草酸单铵盐对照品6 mg，置50 mL容量瓶中，用流动相溶解并定容至刻度，摇匀，精密量取1 mL，移至10 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，即得质量浓度为12 μg／mL的对照品溶液；取本品适量，研细，精密称取1．5 g，置50 mL容量瓶中，加入流动相适量，超声处理30 min，放冷，再稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；按处方组成，取除炙甘草外的其余药材，按制备工艺要求，制成缺炙甘草的样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

图1 薄层色谱图

2．2．3 方法学考察

干扰试验：在此色谱条件下，将甘草酸单铵盐对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液分别进样，测定。结果供试品溶液色谱中，甘草酸单铵盐的色谱峰与相邻色谱峰达到基线分离，阴性对照无干扰，见图2。

标准曲线制备：精密称取甘草酸单铵盐对照品6 mg，置50 mL容量瓶中，加流动相使溶解，并稀释至刻度，精密吸取此溶液0．5，1．0，2．0，3．0，4．0，5．0 mL，分别置10 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。精密吸取上述溶液各10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积，并以对照品溶液峰面积（Y）对质量浓度（X，μg／mL）进行线性回归，得回归方程Y＝13 235 X－809．13，r＝0．999 9（n＝6）。结果表明，甘草酸单铵盐质量浓度在6～60 μg／mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取同一甘草酸单铵盐对照品溶液、供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，连续进样6次，计录甘草酸单铵盐的峰面积。结果的 RSD为0．87%（n＝6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同一批（批号为140901）白柏颗粒样品，按拟订方法制备6份供试品溶液，各精密吸取10 μL，依法进样测定甘草酸单铵盐的含量。结果的RSD为0．99%（n＝6），表明方法重复性良好。

图2 高效液相色谱图

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于0，1，2，4，6，8 h时进样10 μL，测定甘草酸单铵盐的峰面积。结果的 RSD为1．08%（n＝6），表明供试品溶液在8 h内稳定。

加样回收试验：取已知含量（0．878 5 mg／g）的同一批（140901）白柏颗粒6份，每份约1．0 g，精密称定，分别加入甘草酸单铵盐对照品溶液（0．085 12 mg／mL）10 mL，按拟订方法制备供试品溶液，依法测定甘草酸单铵盐的含量。结果见表1。

表1 甘草酸单铵盐加样回收试验结果（n＝6）

2．2．3 样品含量测定

精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，依法进样测定，并按外标法以峰面积计算3批样品的含量。结果见表2。

表2 白柏颗粒中甘草酸单铵盐含量测定结果（mg／g，n＝2）

3 讨论

3．1 薄层鉴别试验

原剂型白柏胶囊标准收载了当归、麦冬、党参3味药材薄层鉴别项，在本制剂白柏颗粒薄层鉴别研究中，参照文献[1－3]，对君药黄芪、党参，臣药茯苓、白术进行了鉴别，分离效果及重复性较好，缺味阴性对照试验未见干扰。同时，还分别对处方中山药、当归、地榆、小蓟、大蓟、麦冬等也进行了薄层鉴别试验，结果因阴性对照试验有干扰或斑点不明显，有待进一步探讨。

3．2 含量测定指标的选择

原制剂白柏胶囊含量测定以阿魏酸为对照品，每粒含当归以阿魏酸计，不得少于0．40 μg。考虑到阿魏酸含量偏低，在本研究中采用HPLC法对处方中君药黄芪中黄芪甲苷和党参中党参炔苷含量测定方法进行了研究。结果在HPLC－ELSD条件下黄芪甲苷与其他峰均未得到较好分离；党参炔苷性质不稳定，且紫外扫描有多个吸收峰，不宜作为考核指标。甘草酸 （C42H62O16）为炙甘草的有效成分，在本制剂中含量稳定，可用作本品的定量指标成分。

3．3 含量控制

参照[2010年版《中国药典（一部）》炙甘草项下含量测定]甘草酸的含量限度，以及不同批次炙甘草含量的差异，结合本制剂试验数据，暂订本品的含量限度为每袋8 g，含炙甘草以甘草酸单铵盐计，应不得少于5．5 mg。

[1]WS－10452（ZD－0452）－2002．国家中成药标准汇编中成药地方标准上升为国家标准：妇科合成[S]．

[2]国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）[M]．北京：中国医药科技出版社，2010：81，95，224，264，283．

[3]国家药典委员会．中药薄层色谱彩色图集[M]．北京：人民卫生出版社，1993：37，66．

[4]曲 佳，张 茉，周 军．HPLC法测定通脉养心丸中甘草酸的含量[J]．天津药学，2009，21（5）：3－5．

[5]蔡翠芳，冀小君， 帮琴，等．甘草饮片中甘草苷和甘草酸含量分析[J]．中国现代药物应用，2009，3（21）：3－5．

Quality Standard of Baibai Granules

Wang Yupeng1，Huang Shunwang2，3，Chen Shinong2，Sun Bei2，Li Lingzhi3，Song Shaojiang3

（1．Anhui Provincial Corps Hospital of Chinese People′s Armed Police Forces，Hefei，Anhui，China 230041； 2．Anhui Institute of Food and Drug Control，Hefei，Anhui，China 230022； 3．School of Chinese Materia Medicia，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang，Liaoning，China 110016) Abstract:Objective To establish the quality standards of Baibai Granules．M ethods The atractylodes macrocephala，codonopsis pilosula，poriacocos，astragalus membranaceus were indentified by TLC，and the content of glycyrrhizic acid was determined by HPLC．Results The characteristic identification by TLC was distinct and highly specific．Glycyrrhizic acid showed a good liner relationship at the range of 6－60 μg／mL(r＝0．999 9)，and the average recovery rate was 98．89% with RSD of 0．66%（n＝6）．Conclusion The method is reliable，accurate and specific，which can be used for the quality control of the preparation．

Baibai Granules；glycyrrhizic acid；TLC；HPLC

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)02－0072－03

王玉鹏，副主任药师，研究方向为医院临床药学，（电话）0551－64637553；黄顺旺，男，副主任药师，研究方向为新药，本文通讯作者，（电话）0551－63662063（电子信箱）huangsw5503＠163．com。

2015－07－05)